【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物，具體涉及一種提高裂壺藻發酵生產高dha含量以及高sn-2dha占比的培養基及發酵方法。
技術介紹
1、不飽和脂肪酸是人體必需脂肪酸，其生理功能是保持細胞膜的相對流動性，以保證細胞的正常生理活動。根據雙鍵的位置及功能可以將多不飽和脂肪酸分為ω-6系列和ω-3系列，亞油酸和花生四烯酸屬ω-6系列，亞麻酸、二十二碳六烯酸(dha)、二十碳五烯酸(epa)屬ω-3系列。二十二碳六烯酸(dha)又稱為“腦黃金”，是人體心血管、神經和視覺系統發揮正常功能所不可缺少的物質。dha在人體大腦皮層中含量較高，約占大腦灰質磷脂的24.30-36.60％，在眼睛視網膜中所占比例約50％，對嬰幼兒智力和視力發育至關重要。
2、基于dha的作用，市面上陸續出現一些含有dha的產品，例如dha配方奶粉、孕婦營養奶粉、魚油膠囊等等，主要致力于促進嬰幼兒智力發育、孕婦補充營養、中老年人群增強免疫力等。根據脂質結構的差異，dha可分為甘油酯型(tag)、乙酯型(ee)、游離型(ffa)等，相關研究表明，dha的構型以及分布位置的差異會影響其生物利用度。乙酯dha含量雖然會高于甘油三酯型dha，但是其在體內的生物利用度確遠不及甘油酯型和游離型dha。由于人體攝入dha后sn-1,3特異性脂肪酶可將tag水解成sn-2單甘酯和游離脂肪酸，其中sn-2單甘酯可通過小腸黏膜吸收，再由體內轉化合成dag和磷脂從而發揮其生理功能，而胰脂酶水解ee-dha的速率比tag-dha低10-15倍。因此，dha在甘油骨架上的分布影響其消化和吸收的效率
3、利用海洋微藻發酵生產dha一直是研究關注的熱點。裂壺藻作為商業化生產dha的優勢菌種，具有發酵周期短、不受外界環境影響、dha產量高等特點，因此是替代魚油的可持續性資源。裂壺藻油的dha含量一般在40-60％之間。有研究表明，藻油sn-2dha占比普遍在甘油酯型dha的31.66％-42.09％之間，低于天然魚油sn-2-dha占比。此外，作為異養型微生物，酵母浸粉、酵母膏是裂壺藻發酵生產dha的良好有機氮源。傳統工業化生產藻油dha主要應用酵母浸粉，但酵母浸粉價格較為昂貴，且轉化是低效率的，加之生產過程中需輸入大量能量，設備投資與維護費用不菲，使得當前藻油dha的生產成本非常高。因此，利用優勢菌種，通過改善發酵工藝，獲得產高dha含量以及高sn-2dha占比的發酵技術工藝，以提高dha生物利用度以及充分發揮dha的生理功能。
技術實現思路
1、為解決上述技術問題，本專利技術提供一種提高裂壺藻發酵生產高dha含量以及高sn-2dha占比的培養基，其特征在于，所述培養基含有啤酒酵母破壁液。啤酒酵母破壁液在本專利技術的的技術方案中，其不僅作為氮源提供給裂壺藻，特別的，其還能夠解決了如何提高發酵液干重、總油脂、dha含量及sn-2dha占比的問題；同時，如果利用本專利技術所述的調節發酵液ph值方法，碳酸鈣、碳酸鈉等碳酸鹽作緩沖劑來調節發酵液ph值，能獲得更優的技術效果。
2、一方面，本專利技術提供一種提高裂壺藻發酵生產高dha含量以及高sn-2dha占比的培養基，所述培養基含有啤酒酵母破壁液。
3、在一些實施例中，啤酒酵母破壁液制備方法包括：啤酒酵母與水，料液體積比為1:10，調節ph值至5.5-6.5，50-60℃下，采用蛋白酶和β-葡聚糖酶水解18-24h；酶解后升溫滅酶，獲得啤酒酵母破壁液。
4、在一些實施例中，啤酒酵母破壁液制備方法包括：將新鮮啤酒酵母與水，料液體積比為1:10，調節ph值至6，55℃下，采用蛋白酶和β-葡聚糖酶水解18-24h；酶解后升溫滅酶，獲得啤酒酵母破壁液。
5、在啤酒酵母破壁液制備方法的一些實施例中，所述調節ph值采用鹽酸和氫氧化鈉。
6、在啤酒酵母破壁液制備方法的一些實施例中，所述蛋白酶為微生物蛋白酶、動物蛋白酶、植物蛋白酶。
7、在啤酒酵母破壁液制備方法的一些實施例中，所述蛋白酶為中性蛋白酶、堿性蛋白酶、胰酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶。
8、在啤酒酵母破壁液制備方法的一些實施例中，所述蛋白酶采用堿性蛋白酶。
9、在啤酒酵母破壁液制備方法的一些實施例中，所述蛋白酶和β-葡聚糖酶的質量比為(8-12)：1。
10、在啤酒酵母破壁液制備方法的一些實施例中，所述蛋白酶和β-葡聚糖酶的質量比為10：1。
11、在一些實施例中，所述啤酒酵母破壁液濃度為15-25g/l。
12、在一些實施例中，所述啤酒酵母破壁液濃度為15-20g/l。
13、在一些實施例中，所述培養基含有ph調節劑。
14、在一些實施例中，所述ph調節劑包括：選自氨水、氫氧化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鈣、檸檬酸、蘋果酸、乙酸、丙酸、鹽酸和硫酸中的一種或多種。
15、在一些實施例中，所述ph調節劑包括：選自氨水、氫氧化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鈣中的一種或多種，和選自檸檬酸、蘋果酸、乙酸、丙酸、鹽酸和硫酸中的一種或多種。
16、在一些實施例中，所述ph調節劑包括：選自氨水、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鈣中的一種或多種，和選自檸檬酸和蘋果酸中的一種或多種。
17、在一些實施例中，所述ph調節劑包括：選自氨水、碳酸鈣中的一種或多種，和蘋果酸中。
18、在一些實施例中，所述培養基還包括碳源、無機鹽、維生素。
19、在一些實施例中，所述碳源包括：葡萄糖、玉米糖漿、甘油、蔗糖的一種或多種；
20、在一些實施例中，所述碳源濃度為50～80g/l。
21、在一些實施例中，所述碳源濃度為60～70g/l。
22、在一些實施例中，所述無機鹽包括：無水硫酸鈉、無水硫酸鎂、硫酸鉀、磷酸二氫鉀、氯化鉀和無水氯化鈣中的一種或多種組合。
23、在本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種提高裂壺藻發酵生產高DHA含量以及高sn-2DHA占比的培養基，其特征在于，所述培養基含有啤酒酵母破壁液；優選地，所述啤酒酵母破壁液濃度為15-25g/L；優選地，啤酒酵母破壁液制備方法包括：啤酒酵母與水，按料液體積比為1:10混合，調節pH值至5.5-6.5，50-60℃下，采用蛋白酶和β-葡聚糖酶水解18-24h；酶解后升溫滅酶，獲得啤酒酵母破壁液。
2.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于，所述培養基含有pH調節劑；優選地，所述pH調節劑包括：選自氨水、氫氧化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鈣中的一種或多種，和選自檸檬酸、蘋果酸、乙酸、丙酸、鹽酸和硫酸中的一種或多種；優選地，所述pH調節劑包括：選自氨水、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鈣中的一種或多種，和選自檸檬酸和蘋果酸中的一種或多種。
3.根據權利要求1或2所述的培養基，其特征在于，所述培養基還包括碳源、無機鹽、維生素。
4.根據權利要求3所述的培養基，其特征在于，所述碳源包括：葡萄糖、玉米糖漿、甘油、蔗糖中的一種或多種；優選地，所述碳源濃度為50～80g/L。
5.根據權利要
6.根據權利要求3所述的培養基，其特征在于，所述維生素包括：維生素B1、維生素B5、維生素B2、維生素B6和維生素B12中的一種或多種組合；優選地，所述維生素包括：維生素B10.5～2.0mg/L，維生素B52～6mg/L，維生素B22～6mg/L，維生素B60.01～0.05mg/L，維生素B120.2～0.6mg/L。
7.根據權利要求3所述的培養基，其特征在于，所述培養基還包括氮源；優選地，所述氮源選自：酵母粉、玉米漿干粉、硫酸銨中的一種或多種；優選地，所述氮源濃度為1-20g/L。
8.一種提高裂壺藻發酵生產高DHA含量以及高sn-2DHA占比的發酵方法，其特征在于，所述方法包括下列步驟：
9.根據權利要求8所述的發酵方法，其特征在于，所述方法包括下列步驟：
10.根據權利要求8或9所述的發酵方法，其特征在于，pH采用氨水和/或碳酸鈣，和蘋果酸調控；任選地，pH采用氨水和蘋果酸調控；任選地，pH采用碳酸鈣和蘋果酸調控；任選地，pH采用氨水和碳酸鈣，和蘋果酸調控；任選地，發酵0-48小時，pH采用氨水和蘋果酸調控；發酵48小時之后，pH采用碳酸鈣和蘋果酸調控。
...【技術特征摘要】
1.一種提高裂壺藻發酵生產高dha含量以及高sn-2dha占比的培養基，其特征在于，所述培養基含有啤酒酵母破壁液；優選地，所述啤酒酵母破壁液濃度為15-25g/l；優選地，啤酒酵母破壁液制備方法包括：啤酒酵母與水，按料液體積比為1:10混合，調節ph值至5.5-6.5，50-60℃下，采用蛋白酶和β-葡聚糖酶水解18-24h；酶解后升溫滅酶，獲得啤酒酵母破壁液。
2.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于，所述培養基含有ph調節劑；優選地，所述ph調節劑包括：選自氨水、氫氧化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鈣中的一種或多種，和選自檸檬酸、蘋果酸、乙酸、丙酸、鹽酸和硫酸中的一種或多種；優選地，所述ph調節劑包括：選自氨水、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鈣中的一種或多種，和選自檸檬酸和蘋果酸中的一種或多種。
3.根據權利要求1或2所述的培養基，其特征在于，所述培養基還包括碳源、無機鹽、維生素。
4.根據權利要求3所述的培養基，其特征在于，所述碳源包括：葡萄糖、玉米糖漿、甘油、蔗糖中的一種或多種；優選地，所述碳源濃度為50～80g/l。
5.根據權利要求3所述的培養基，其特征在于，所述無機鹽包括：無水硫酸鈉、無水硫酸鎂、硫酸鉀、磷酸二氫鉀、氯化鉀和無水氯化鈣中的一種或多種組合；優選地，無水硫酸鈉11-19g/l、無水硫酸鎂2.0...
【專利技術屬性】
技術研發人員：陳禮毅，鐘惠昌，陳水榮，曾勝麗，
申請(專利權)人：廈門匯盛生物有限公司，
類型：發明
國別省市：
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