【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物工程，具體是一種大豆來源的類腸促胰島素制備工藝。
技術介紹
1、糖尿病是目前在世界范圍內廣泛存在的慢性疾病之一。尤其是2型糖尿病(t2dm)，其患者人數占糖尿病總人數的90％以上；與1型糖尿病(t1dm)患者大多為幼年患者不同，t2dm患者大多為中老年人群。t1dm多是因自身免疫或遺傳因素造成β細胞功能缺陷，以致胰島素分泌絕對不足，需外源胰島素輔助降糖；而t2dm多是因生活習慣不健康、飲食結構不科學、工作壓力過大以及自身遺傳背景等一系列體內外因素的互作造成。首先，各種因素導致機體胰島素抵抗、空腹葡萄糖和糖耐量受損，造成胰島素分泌相對不足；其次，持續性高血糖使機體代償性胰島素分泌大大增加，此舉加快了胰腺β細胞的應激性衰竭；最終，隨著體內糖脂毒性的升高，胰腺β細胞的破壞被進一步加劇。
2、近年來，糖尿病的發病率逐年上升，已經成為僅次于心血管和腫瘤疾病，成為威脅人類健康的第三大疾病。根據我國衛生部門的統計結果顯示，我國糖尿病患者高達1.41億。治療糖尿病及其并發癥的醫療費用成為各國的衛生醫療體系的沉重負擔。因此，尋找治療該疾病的辦法，開發治療糖尿病的新途徑及新藥物的任務非常緊迫。
3、大豆肽是大豆蛋白水解物，大豆肽具有諸多的生理活性，包括降血糖、降血脂、降血壓、增強免疫力等諸多生理功能。本專利技術旨在通過生物提取并通過進一步分離純化得到大豆來源具有降糖活性的多肽，進而通過改善胰島素的抵抗狀態和葡萄糖的耐受水平來調節空腹血糖濃度。因此大豆來源的多肽可以作為一個天然的、可口服的、無毒的豆類生物活性
技術實現思路
1、本專利技術提供一種改善胰島素的抵抗狀態和葡萄糖的耐受水平來調節空腹血糖濃度的大豆來源的類腸促胰島素制備工藝。
2、本專利技術所采用的技術方案為：一種大豆來源的類腸促胰島素制備工藝，包括具體制備步驟如下：
3、(1)首先，量取100l無離子水升溫至25℃，加入80kg洗泡干凈的非轉基因黃豆，充分浸泡3～5h后進行復水，然后過濾掉全部的無離子水，將復水后的黃豆放置萌發培養箱中進行萌發培養；
4、(2)往酶解罐中加入200l無離子水，將第一步培養完成的黃豆加入其中，用膠體磨將其充分破碎；
5、(3)用冰乙酸加入其中調節ph至3.5左右，室溫提取6h后停止提取；
6、(4)將提取完的提取液進行離心處理，離心條件為10000轉/分鐘，上清液采用陶瓷膜進一步處理，固體大豆渣用纖維素酶簡單處理后，接種枯草芽孢桿菌進行納豆激酶的制作；
7、(5)將經離心處理后的水解液用的陶瓷膜過濾處理，處理壓力為1.2mpa，流速穩定至2000l/h，陶瓷膜可以將脂肪大分子蛋白以及其他雜質充分過濾掉，極大提升產品的品質；
8、(6)將經陶瓷膜過濾后的酶解液用的有機過濾膜處理，處理壓力為2.3mpa，流速穩定在2800l/h，用有機膜濃縮后的水解液提高濃度至32％～36％，后進行冷凍干燥處理，最終得到顏色率黃，口感微甜的大豆肽；
9、(7)各種基本理化指標檢測，具體為大豆肽分子量分布、氨基酸分布的指標。
10、作為本專利技術進一步的方案：所述步驟(1)中具體萌發培養條件為：溫度25℃，每隔30min進行淋水處理一次，培養20～25h后結束萌發培養。
11、作為本專利技術進一步的方案：所述陶瓷膜的孔徑為1.2μm孔徑。
12、作為本專利技術進一步的方案：所述有機過濾膜的孔徑為10nm孔徑。
13、作為本專利技術進一步的方案：還包括豆肽的分離純化：采用體外抗α-葡萄糖苷酶試驗，分析大豆肽中具有抑制α-葡萄糖苷酶活性成分的多肽序列并采用層析色譜和制備型液相分離后選擇具有較強抑制α-葡萄糖苷酶活性的組分繼續利用分析性液相對大豆肽抑制α-葡萄糖苷酶活性組分進行分離純化，最后采用液質聯用技術對強抑制α-葡萄糖苷酶活性的組分進行氨基酸序列鑒定；
14、將經胃蛋白酶和胰蛋白酶消化后的大豆肽利用高效液相色譜進行分離純化，并將經分離純化后的多肽組分參考具體的方法，進行α-葡萄糖苷酶抑制率的測定，并最終進行氨基酸序列結構的鑒定；
15、采用制備型高效液相色譜儀對經胃蛋白酶和胰蛋白酶消化后的大豆肽進行分離純化：
16、流動相a：0.1％三氟乙酸+99.9％超純水；流動相b：0.1％三氟乙酸+99.9％乙腈；
17、檢測波長：214nm；檢測時間36min；柱溫：21℃～25℃；
18、采用流動相a以5ml/min的速度平衡6個柱體積，直到基線穩定為止；
19、將得到的大豆肽混合物用流動相a溶解，配制樣品的濃度為10mg/ml，10000r/min離心5min，上清液采用0.22μm的濾膜過濾處理，上樣量為15ml；
20、采用流動相a和流動相b的混合液進行梯度洗脫，洗脫梯度如下：
21、0至5min流動相b濃度由0％梯度上升到5％；5至30min，流動相b濃度由5％梯度上升到80％；30至40min始終保持用濃度為80％的流動相b洗脫；40至45min流動相b濃度由80％梯度下降到5％；
22、接著進行接樣，冷凍干燥后進行α-葡萄糖苷酶的抑制活性檢測；
23、對經胃蛋白酶和胰蛋白酶消化后的大豆肽的10個組分進行α-葡萄糖苷酶抑制率進行測定，并針對激活率較高的組分進一步分離純化，并利用液質聯用系統對組分6進行氨基酸序列結構鑒定；采用納升級液相色譜-q?exactive質譜聯用系統，對實施例4得到的組分6進行純度和結構鑒定，其氨基酸結構為shniletsfhsefeeinrvllgeeeeqrq將其命名為a1，其分子量為3498.665da，通過液質聯用技術測定a1在大豆肽(經體內消化后)質量百分含量為1.35％。
24、本專利技術的有益效果：
25、本專利技術通過生物提取并通過進一步分離純化得到大豆來源具有降糖活性的多肽，進而通過改善胰島素的抵抗狀態和葡萄糖的耐受水平來調節空腹血糖濃度。因此大豆來源的多肽可以作為一個天然的、可口服的、無毒的豆類生物活性多肽，可作為治療2型糖尿病的一個非常有前景的候選藥物或保健食品。
26、本專利技術能夠生產出高純度和生物活性的類腸促胰島素，以幫助管理糖尿病和其他胰島素相關疾病。使用大豆等可再生資源，減少對動物源材料的依賴，有助于可持續制藥生產。采用這種工藝可以降低制備類腸促胰島素的生產成本，使其更加經濟可行。與某些動物源胰島素相比，大豆來源的類腸促胰島素可能降低過敏反應的風險。本專利技術可以根據需要調整，以生產不同類型和規格的類腸促胰島素。從而有助于改善胰島素的生產和可用性，從而改善糖尿病患者的生活質量。
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1.一種大豆來源的類腸促胰島素制備工藝，其特征在于：包括具體制備步驟如下：
2.根據權利要求1所述的一種大豆來源的類腸促胰島素制備工藝，其特征在于：所述步驟(1)中具體萌發培養條件為：溫度25℃，每隔30min進行淋水處理一次，培養20～25h后結束萌發培養。
3.根據權利要求1所述的一種大豆來源的類腸促胰島素制備工藝，其特征在于：所述陶瓷膜的孔徑為1.2μm孔徑。
4.根據權利要求1所述的一種大豆來源的類腸促胰島素制備工藝，其特征在于：所述有機過濾膜的孔徑為10nm孔徑。
5.根據權利要求1所述的一種大豆來源的類腸促胰島素制備工藝，其特征在于：還包括豆肽的分離純化：采用體外抗α-葡萄糖苷酶試驗，分析大豆肽中具有抑制α-葡萄糖苷酶活性成分的多肽序列并采用層析色譜和制備型液相分離后選擇具有較強抑制α-葡萄糖苷酶活性的組分繼續利用分析性液相對大豆肽抑制α-葡萄糖苷酶活性組分進行分離純化，最后采用液質聯用技術對強抑制α-葡萄糖苷酶活性的組分進行氨基酸序列鑒定；
【技術特征摘要】
1.一種大豆來源的類腸促胰島素制備工藝，其特征在于：包括具體制備步驟如下：
2.根據權利要求1所述的一種大豆來源的類腸促胰島素制備工藝，其特征在于：所述步驟(1)中具體萌發培養條件為：溫度25℃，每隔30min進行淋水處理一次，培養20～25h后結束萌發培養。
3.根據權利要求1所述的一種大豆來源的類腸促胰島素制備工藝，其特征在于：所述陶瓷膜的孔徑為1.2μm孔徑。
4.根據權利要求1所述的一種大豆來源的類腸促胰島素制...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張釗，魏瑋，張會，李會允，王芳，王惠娟，
申請(專利權)人：中食都慶山東生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：
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