【技術實現步驟摘要】
dna-抗原交換和擴增成像方法，能夠通過將靶標與抗原、抗原特異性結合配偶體和光學標記連接來多重化靶標并提高靶標的檢測靈敏度。
技術介紹
1、產生二級抗體以結合其他抗體，通常具有物種特異性親和力。在免疫熒光應用中使用二級抗體是很普遍的。二級抗體對于節省成本和信號擴增都是有利的。用熒光團標記二級抗體比直接標記一級抗體更具成本效益，因為可以使用一種類型的熒光標記的二級抗體對許多不同的靶標成像，條件是使用來自相同宿主物種的一級抗體在單獨的樣品上檢測靶標。另外，由于多個熒光標記的二級抗體可以結合單個一級抗體，因此從樣品產生的信號強度高于使用熒光標記的一級抗體產生的信號強度。然而，熒光標記的二級抗體的使用嚴重限制了進行多重化檢測的能力。為了多重化多個靶標，必須在不同的宿主物種中產生每個靶標特異性一級抗體，以確保二級抗體與正確的靶標復合物結合并締合。最常見的一級抗體宿主物種是小鼠和兔子，高質量替代性宿主物種的缺乏降低了多重化能力，這種能力實際上可以用每個樣品的兩個靶標的二級抗體來實現(即使用標記的抗小鼠二級抗體和標記的抗兔二級抗體來檢測用小鼠抗體染色的一個靶標和用兔抗體染色的一個靶標)。
2、先前的方法試圖克服用二級抗體進行物種特異性檢測所帶來的限制。已經描述了包含與抗原或半抗原連接的一級抗體的免疫試劑(wo2016127149)，用于用標記的抗抗原或抗半抗原抗體(即檢測抗體)進行檢測。雖然這種方法擴大了可以同時標記的靶標的數量，但是可以多重化的靶標的總數仍然受到可用于修飾檢測抗體的光譜不同標記的數量的限制。此外，一旦樣品被染色，
3、在這里，我們提出了用于高度多重化靶標檢測的新方法，所述新方法實現了與標記的二級抗體相關聯的相似水平的方便性和改進的擴增。這種方法稱為dna-抗原交換和擴增。dna-抗原交換和擴增允許在單個樣品上實現靶標的順序多重化和擴增水平的動態調整。
技術實現思路
1、根據說明書，至少一種方法包括(1)使待測一個或多個靶標的存在的樣品與一個或多個靶標特異性結合配偶體接觸，其中每個靶標特異性結合配偶體連接至對接鏈，并且其中具有不同特異性的靶標特異性結合配偶體連接至不同的對接鏈；(2)任選地去除未結合的靶標特異性結合配偶體；(3)使所述樣品與(直接或間接地)連接至光學標記的抗原結合成像鏈和抗原特異性結合配偶體接觸，其中所述抗原結合成像鏈直接或間接地與對接鏈具有互補性，且其中每個抗原特異性結合配偶體連接至一個或多個光學標記，并且其中具有不同特異性的抗原特異性結合配偶體連接至不同的光學標記；(4)任選地去除未結合的抗原結合成像鏈和/或抗原特異性結合配偶體；(5)對所述樣品成像以檢測結合的標記的抗原特異性結合配偶體；(6)任選地去除/熄滅來自所述光學標記的信號(即，信號終止)；以及(7)任選地重復步驟(1)-(7)，或其任何子集(諸如(1)-(6)或其他子集，記住一些步驟可不重復，尤其是所述信號終止步驟)。
2、在一些實施方案中，一種方法包括(1)使待測一個或多個靶標的存在的樣品與一個或多個靶標特異性結合配偶體接觸，其中每個靶標特異性結合配偶體連接至抗原，并且其中具有不同特異性的靶標特異性結合配偶體連接至不同的抗原；(2)任選地去除未結合的靶標特異性結合配偶體；(3)使所述樣品與連接至對接鏈的抗原特異性結合配偶體接觸，其中不同的抗原特異性結合配偶體連接至不同的對接鏈；(4)任選地去除連接至對接鏈的未結合的抗原特異性結合配偶體；(5)添加成像鏈；其中所述成像鏈直接或間接地與對接鏈具有互補性，并且其中每個成像鏈(直接或間接地)連接至一個或多個光學標記，并且其中具有不同特異性的成像鏈連接至不同的光學標記；(6)任選地去除未結合的成像鏈；(7)對所述樣品成像以檢測結合的標記的抗原特異性結合配偶體；(8)任選地去除/熄滅來自所述光學標記的信號(即，信號終止)；以及(9)任選地重復步驟(1)-(9)，或其任何子集(諸如(1)-(8)或其他子集，記住一些步驟可不重復，尤其是所述信號終止步驟)。
3、在一些實施方案中，一種方法包括(1)使待測一個或多個靶標的存在的樣品與一個或多個靶標特異性結合配偶體接觸，其中每個靶標特異性結合配偶體連接至第一對接鏈，并且其中具有不同特異性的靶標特異性結合配偶體連接至不同的對接鏈；(2)任選地去除未結合的靶標特異性結合配偶體；(3)使所述樣品與抗原結合成像鏈和抗原特異性結合配偶體接觸，其中所述抗原結合成像鏈直接或間接地與對接鏈具有互補性，并且其中每個抗原特異性結合配偶體連接至至少一個第二對接鏈；(4)任選地去除未結合的抗原結合成像鏈和/或抗原特異性結合配偶體；(5)通過dna擴增反應增加第二對接鏈鏈的數量，并使用光學標記標記所述第二對接鏈；(6)對所述樣品成像以檢測結合的標記的抗原特異性結合配偶體；(7)任選地熄滅來自所述光學標記的信號(即，信號終止)；以及(8)任選地重復步驟(1)-(8)，或其任何子集(諸如(1)-(7)或其他子集，記住一些步驟可不重復，尤其是所述信號終止步驟)。
4、在一些實施方案中，一種方法包括(1)使待測一個或多個靶標的存在的樣品與一個或多個靶標特異性結合配偶體接觸，其中每個靶標特異性結合配偶體連接至抗原，并且其中具有不同特異性的靶標特異性結合配偶體連接至不同的抗原；(2)任選地去除未結合的靶標特異性結合配偶體；(3)使所述樣品與連接至對接鏈的抗原特異性結合配偶體接觸，其中不同的抗原特異性結合配偶體連接至不同的對接鏈；(4)任選地去除連接至對接鏈的未結合的抗原特異性結合配偶體；(5)通過dna擴增反應增加對接鏈的數量，并使用光學標記標記所述對接鏈；(6)對所述樣品成像以檢測結合的標記的抗原特異性結合配偶體；(7)任選地熄滅來自所述光學標記的信號(即，信號終止)；以及(8)任選地重復步驟(1)-(8)，或其任何子集(諸如(1)-(7)或其他子集，記住一些步驟可不重復，尤其是所述信號終止步驟)。
5、在一些實施方案中，一種組合物包含：(1)第一結合配偶體-寡核苷酸綴合物，所述綴合物包含與包含對接結構域的寡核苷酸連接的結合配偶體；(2)抗原結合的寡核苷酸綴合物，所述綴合物包含與包含成像結構域的寡核苷酸連接的抗原，其中(2)的成像結構域與(1)的對接結構域互補；以及(3)標記的抗原特異性結合配偶體，所述標記的抗原特異性結合配偶體包含與抗原特異性結合配偶體連接的光學標記，其中(3)的抗原特異性結合配偶體特異性地結合(2)中的抗原。
6、另外的目的和優點將部分地在下面的說明書中闡述，并且部分地根據說明書將顯而易見，或者可以通過實踐來學習。借助于所附權利要求中特別指出的元件和組合，將實現和獲得這些目的和優點。
7、應當理解，前述一般性描述和以下具體描述都只是示例性和說明性的，并不是對權利要求的限制。
8、包含在本說明書中本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種方法，所述方法包括：
2.如權利要求1所述的方法，其中使用所述DNA擴增反應中的標記的核苷酸直接標記所述對接鏈。
3.如權利要求2所述的方法，其中所述標記的核苷酸是熒光標記的核苷酸。
4.如權利要求1-3中任一項所述的方法，其中使用結合所述對接鏈的標記的核酸標記所述對接鏈。
5.如權利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述DNA擴增反應包括滾環擴增。
6.如權利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述DNA擴增反應包括雜交鏈式反應。
7.如權利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述DNA擴增反應包括基于發夾的連環化(包括樹枝狀化)反應。
8.如權利要求1-7中任一項所述的方法，其中所述靶標特異性結合配偶體包括抗體或其抗原結合片段。
9.如權利要求1-8中任一項所述的方法，其中所述靶標特異性結合配偶體包括：
10.如權利要求1-9中任一項所述的方法，其中所述對接鏈是核酸鏈。
11.如權利要求1-10中任一項所述的方法，其中所述成像鏈是核酸鏈。
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13.如權利要求1-12中任一項所述的方法，其中多個抗原特異性結合配偶體結合單個抗原。
14.如權利要求1-13中任一項所述的方法，其中使用多種類型的抗原特異性結合配偶體。
...【技術特征摘要】
1.一種方法，所述方法包括：
2.如權利要求1所述的方法，其中使用所述dna擴增反應中的標記的核苷酸直接標記所述對接鏈。
3.如權利要求2所述的方法，其中所述標記的核苷酸是熒光標記的核苷酸。
4.如權利要求1-3中任一項所述的方法，其中使用結合所述對接鏈的標記的核酸標記所述對接鏈。
5.如權利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述dna擴增反應包括滾環擴增。
6.如權利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述dna擴增反應包括雜交鏈式反應。
7.如權利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述dna擴增反應包括基于發夾的連環化(包括樹枝狀化)反應。
8.如權利要求1-7中任一項所述的方...
【專利技術屬性】
技術研發人員：S·漢尼可，M·瑪尼瑟，
申請(專利權)人：烏爾蒂維尤股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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