【技術實現步驟摘要】
本申請涉及疫苗制備的，更具體地說，它涉及一種新型冠狀病毒mrna疫苗及其制備方法。
技術介紹
1、新型冠狀病毒是一種β屬的冠狀病毒，于2019年首次被發現，是目前已知的第七種能感染人的冠狀病毒，患者感染該病毒后會出現發熱、干咳、乏力等癥狀。隨著新型冠狀病毒的全球大流行，逐步的演化出了多種流行變異株，主要包括阿爾法(alpha)，貝塔(beta)，伽馬(gamma)，德爾塔(delta)和奧密克戎(omicron)變異株。
2、為了控制新型冠狀病毒的全球傳播，疫苗的研制刻不容緩。研究發現，表面刺突蛋白(s蛋白)介導新型冠狀病毒附著、融合和進入宿主細胞，位于表面刺突蛋白c端的受體結合域被認為是誘導機體產生中和抗體的最主要靶區域，是疫苗研發的靶標。
3、mrna疫苗是一種新型核酸疫苗，具有可快速開發，可同時激活體液免疫和細胞免疫等優點。mrna疫苗主要由脂質體包裹病毒mrna制備成脂質納米粒(lnp)，lnp通過宿主細胞膜并將病毒mrna釋放到宿主細胞質中，編碼病毒蛋白的mrna在宿主細胞內進行蛋白表達，激活宿主的免疫系統產生相應的抗體。
4、目前，為了應對新型冠狀病毒的多種流行變異株，現有的mrna疫苗主要采用以下兩種制備方法。一種制備方法就是將多個新型冠狀病毒變異株的表面刺突蛋白的mrna進行串聯，制成新的病毒mrna，然后脂質體包裹新的病毒mrna制成mrna疫苗。不過，該方法中多個新型冠狀病毒變異株的表面刺突蛋白的mrna串聯的成功率較低，而且如果流行變異株的表面刺突蛋白的mrna串聯過多還
5、另一種是將每個新型冠狀病毒流行變異株的mrna通過脂質體進行包封得到lnp制劑，然后將每個新型冠狀病毒流行變異株的lnp制劑進行混合得到mrna疫苗。不過，該方法需要制備多次lnp制劑后混合才能獲得mrna疫苗，制作工藝較為復雜，增加了mrna疫苗的生產成本。
技術實現思路
1、為了解決現有新型冠狀病毒mrna疫苗制作工藝較為復雜，mrna疫苗的生產成本較高的問題，本申請提供一種新型冠狀病毒mrna疫苗及其制備方法，該新型冠狀病毒mrna疫苗既能應對多種新型冠狀病毒的變異株，又能相比于現有技術，降低了生產成本。
2、第一方面，本申請提供一種新型冠狀病毒mrna疫苗的制備方法，采用如下的技術方案：
3、一種新型冠狀病毒mrna疫苗的制備方法，包括以下步驟：
4、制備混合溶液：將新型冠狀病毒delta株的mrna溶液和omicron?ba.5株的mrna溶液混合，獲得mrna混合溶液；
5、制備脂質溶液：將dlin-mc3-dma、dope、膽固醇和dspe-peg2000均溶解于乙醇中，獲得脂質溶液；
6、制備lnp：將所述mrna混合溶液和脂質溶液加入微流控設備，獲得lnp；
7、除雜和制備疫苗：將所述lnp進行超濾去除雜質，得到lnp溶液，然后向所述lnp溶液中添加保護劑，獲得新型冠狀病毒mrna疫苗。
8、通過采用上述技術方案，將新型冠狀病毒delta株和omicron?ba.5株的mrna溶液混合后，制得的mrna混合溶液內既含有delta株的mrna，又含有omicron?ba.5株的mrna；脂質溶液中dlin-mc3-dma包含叔胺頭部，可發生ph依賴性的離子化，使得dlin-mc3-dma帶有正電荷同時與負電荷的delta株的mrna以及omicron?ba.5株的mrna結合，dope能夠自發地組織成脂質雙層，增強lnp的膜穩定性，dope還能夠形成六角相(hii)的組織形式，hii相能夠促進脂質膜與內體膜的融合，方便mrna在胞質內釋放；膽固醇作為天然豐富的細胞膜成分，用于作為lnp的結構脂質；
9、由于親水性和大體積，dspe-peg2000位于納米粒子的外殼上，dspe-peg2000為lnp提供了一個外部聚合層，以阻止血清蛋白吸附和單核吞噬細胞系統的攝取，延長了內體的循環時間；此外，dspe-peg2000還可以降低lnp在儲存過程中以及在血液中進行聚集的可能性；mrna混合溶液作為水相，脂質溶液作為脂相，水相和脂相通過微流控設備制備出分散均一、包封率好的lnp；長期低溫保存中，mrna疫苗由于其水環境的存在，容易形成冰結晶而破壞lnp，加入保護劑能夠減少冰結晶的含量，提高mrna疫苗的穩定性；
10、本申請的新型冠狀病毒mrna疫苗能夠同時作用于新型冠狀病毒delta株的和omicron?ba.5株，而且對新的新型冠狀病毒xbb.1.5株也有一定的效果，且與新型冠狀病毒delta株的lnp制劑和omicron?ba.5株的lnp制劑混合后的新型冠狀病毒mrna疫苗效價無明顯差異，相比于現有技術，本申請的新型冠狀病毒mrna疫苗降低了生產成本。
11、優選的，在制備混合溶液的步驟中，所述mrna混合溶液中所述新型冠狀病毒delta株的mrna和omicron?ba.5株的mrna質量比為1-9:9-1。
12、通過采用上述技術方案，若mrna混合溶液中delta株的mrna含量較高會提高delta株抗體蛋白的表達水平，抑制omicron?ba.5株抗體蛋白的表達水平；若omicron?ba.5株的mrna含量較高會提高omicron?ba.5株抗體蛋白的表達水平，抑制delta株抗體蛋白的表達水平；為了使得mrna疫苗既能對delta株有效，又能對omicron?ba.5株有效，本申請的新型冠狀病毒delta株的mrna和omicron?ba.5株的mrna質量比以上述為宜。
13、優選的，在制備脂質溶液中，所述脂質溶液包括溶劑和溶質，所述溶質包括以下摩爾百分比的組分：dlin-mc3-dma?45-55％、dope?8-12％、膽固醇36-40％和dspe-peg20001-3％。
14、通過采用上述技術方案，dlin-mc3-dma為脂質溶液提供正電荷用于吸附負電荷的mrna，dope和膽固醇作為脂質的結構骨架，dspe-peg2000形成外殼的聚合層，增加lnp在內體的循環時間，經過試驗驗證，本申請的脂質溶液的各個溶質的摩爾百分比以上述為宜。
15、優選的，在制備脂質溶液中，所述溶質的質量濃度為5.5-6.5mg/ml。
16、通過采用上述技術方案，若溶質的質量濃度過小，溶質難以包封mrna混合溶液中全部的mrna,造成mrna的浪費，降低mrna的效價；若溶質的質量濃度過高，溶質已經能夠完全包封mrna混合溶液中全部的mrna，而且溶質的質量濃度過高會導致脂相溶液的流動性降低，不利于lnp的形成；為此，本申請的脂質溶液中溶質的質量濃度以上述為宜。
17、優選的，所述mrna混合溶液中總mrna的質量濃度為0.08-0.1mg/ml，所述mrna混合溶液與所述脂質溶液的體積比為2.5本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種新型冠狀病毒mRNA疫苗的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的新型冠狀病毒mRNA疫苗的制備方法，其特征在于：在制備混合溶液的步驟中，所述mRNA混合溶液中所述新型冠狀病毒Delta株的mRNA和Omicron?BA.5株的mRNA質量比為1-9:9-1。
3.根據權利要求1所述的新型冠狀病毒mRNA疫苗的制備方法，其特征在于：在制備脂質溶液中，所述脂質溶液包括溶劑和溶質，所述溶質包括以下摩爾百分比的組分：Dlin-MC3-DMA?45-55%、DOPE?8-12%、膽固醇36-40%和DSPE-PEG2000?1-3%。
4.根據權利要求3所述的新型冠狀病毒mRNA疫苗的制備方法，其特征在于：在制備脂質溶液中，所述溶質的質量濃度為5.5-6.5mg/mL。
5.根據權利要求4所述的新型冠狀病毒mRNA疫苗的制備方法，其特征在于：所述mRNA混合溶液中總mRNA的質量濃度為0.08-0.1mg/mL，所述mRNA混合溶液與所述脂質溶液的體積比為2.5-3.5:1。
6.根據權利要求1所述
7.根據權利要求1所述的新型冠狀病毒mRNA疫苗的制備方法，其特征在于：在除雜和制備疫苗中，所述LNP超濾過程所使用的緩沖液是PBS或TBS。
8.根據權利要求1所述的新型冠狀病毒mRNA疫苗的制備方法，其特征在于：在除雜和制備疫苗中，所使用的保護劑為蔗糖或海藻糖。
9.根據權利要求8所述的新型冠狀病毒mRNA疫苗的制備方法，其特征在于：所述mRNA疫苗中所述保護劑占所述LNP溶液的質量分數為5-20%。
10.權利要求1-9中任一項制備方法制備的新型冠狀病毒mRNA疫苗。
...【技術特征摘要】
1.一種新型冠狀病毒mrna疫苗的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的新型冠狀病毒mrna疫苗的制備方法，其特征在于：在制備混合溶液的步驟中，所述mrna混合溶液中所述新型冠狀病毒delta株的mrna和omicron?ba.5株的mrna質量比為1-9:9-1。
3.根據權利要求1所述的新型冠狀病毒mrna疫苗的制備方法，其特征在于：在制備脂質溶液中，所述脂質溶液包括溶劑和溶質，所述溶質包括以下摩爾百分比的組分：dlin-mc3-dma?45-55%、dope?8-12%、膽固醇36-40%和dspe-peg2000?1-3%。
4.根據權利要求3所述的新型冠狀病毒mrna疫苗的制備方法，其特征在于：在制備脂質溶液中，所述溶質的質量濃度為5.5-6.5mg/ml。
5.根據權利要求4所述的新型冠狀病毒mrna疫苗的制備方法，其特征在...
【專利技術屬性】
技術研發人員：李舉，李勝男，于娜，倪成章，羅誠，楊杰，王寧，
申請(專利權)人：寧波榮安生物藥業有限公司，
類型：發明
國別省市：
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