【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于菌種培養領域，具體涉及一種高效培養草分枝桿菌的方法。
技術介紹
1、隨著畜禽養殖業的快速發展，集約化、規?；殉蔀槲磥戆l展的趨勢，但隨著用藥越來越多，細菌耐藥性變強，也就導致養殖場用藥劑量加大，最終引發動物食品中的藥物殘留，國家也因此提出抗菌藥使用減量化的國家方針，以加快實現減抗替抗，最終達到無抗養殖。
2、而隨著國家相關政策的出臺，微生態制劑和中藥制劑逐漸進入人們的視野。而近年來微生態制劑在畜禽養殖中的應用展現出良好的效果。微生態制劑己被廣泛應用于飼料、農業食品等領域，由于其為無公害制劑，不會引發耐藥性，在畜禽養殖業中已經逐步地取代了傳統的添加劑。微生態制劑的應用將是行業的一種發展趨勢，是抗生素的最佳替代品，對維護人類健康安全也具有重要意義。
3、草分枝桿菌屬于放線菌綱，放線菌目，分枝桿菌科，是一種典型的非致病性腐生菌，它對人和動物幾乎無致病性。草分枝桿菌滅活處理后，其細胞壁活性成分胞壁酰二肽(mdp)、草分枝桿菌多糖(mps)及cpg免疫調節序列等能夠刺激相應免疫細胞產生免疫應答，進而調節機體免疫功能，增強機體免疫力。在臨床上多用作免疫增強劑，是一種寶貴的微生態制劑資源，其在醫藥領域具有重要的研究價值。
4、然而草分枝桿菌在畜牧領域的研究和應用才剛起步。目前我國的草分枝桿菌藥物主要來源于德國，國內缺少草分枝桿菌發酵培養的相關資料，而且作者在前期研究發現，由于草分枝桿菌屬于放線菌綱，生長過程中極易結團沉降，生長速度慢，從而導致菌體產量低、生產效率低，因而在工業化生產中難以達到要
技術實現思路
1、本專利技術所要解決的技術問題便是針對上述現有技術的不足，提供一種高效培養草分枝桿菌的方法，工藝簡單、產菌量大、效率高的特點，為草分枝桿菌的規?；a提供了一個可行性方案。
2、本專利技術所采用的技術方案是：一種高效培養草分枝桿菌的方法，包括以下步驟：
3、步驟1、準備菌種：取草分枝桿菌備用；
4、步驟2、種子活化：采用斜面培養基對草分枝桿菌在37℃的條件下培養72-96h，所述斜面培養基配方為：胰蛋白胨15-19g/l、大豆胨2-6g/l、葡萄糖2-5g/l、磷酸氫二鉀1-3g/l和瓊脂15-20g/l，余量為純水；
5、步驟3、種子發酵：將步驟2中活化后的草分枝桿菌接入裝有100ml液體培養基的錐形瓶中，將錐形瓶置于發酵裝置中進行發酵，發酵裝置轉速為180rpm/min，發酵溫度為37℃，發酵時間為24-48h，得到草分枝桿菌種子發酵液，對得到的草分枝桿菌種子發酵液進行檢查，確認其無污染，所述的液體培養基配方為：胰蛋白胨15-19g/l、大豆胨2-6g/l、葡萄糖10-30g/l、磷酸氫二鉀1-3g/l和nacl?4-9g/l，余量為純水；
6、步驟4、擴大培養：將步驟3中得到的草分枝桿菌種子發酵液按照體積比5-10％的接種量加入裝有1l擴大培養基的錐形瓶中，將錐形瓶置于培養裝置中進行擴大培養，培養裝置轉速為180rpm/min，培養溫度為37℃，培養時間72-96h，得到草分枝桿菌擴培液，所述的擴大培養基配方為：胰蛋白胨15-19g/l、大豆胨2-6g/l、葡萄糖10-30g/l、磷酸氫二鉀1-3g/l和nacl4-9g/l，余量為純水；
7、步驟5、冷凍干燥：將步驟4中得到的草分枝桿菌擴培液105-121℃處理15-30min，離心收集菌體，離心收集過程中轉速為7000rpm/min，收集到的菌體用pbs洗3次，再用pbs重懸，低溫冷凍后，置于冷凍干燥儀中冷凍干燥，得到草分枝桿菌凍干菌體。
8、其中一個實施例中，步驟3中，所述的錐形瓶體積為250ml，瓶內加入鋪滿瓶底1/3-4/5的珠子。
9、其中一個實施例中，步驟4中，所述的錐形瓶體積為3l，瓶內加入鋪滿瓶底1/3-4/5的珠子。
10、其中一個實施例中，所述的珠子為3-7mm的玻璃珠或鋼珠。
11、其中一個實施例中，步驟3中，發酵時間為48h。
12、其中一個實施例中，步驟4中，培養時間為96h。
13、其中一個實施例中，步驟2、步驟3和步驟4中所述的斜面培養基、液體培養基和擴大培養基ph均為7.2-7.4，均在121℃的環境下滅菌30min備用。
14、本專利技術的有益效果在于：
15、1、本專利技術公開的草分枝桿菌擴培方法，使用“種子發酵1-2天+擴大培養3-4天”擴培模式，在盡可能短的時間內，菌落數可達1010-1011cfu/ml，菌落數遠遠高于現有技術，且使用的培養基相容性好、成本低；
16、2、本專利技術本專利技術公開的草分枝桿菌擴培方法，通過加入一定量的特定大小的玻璃珠或鋼珠，能完全解決草分枝桿菌結團沉降的問題，使菌體充分擴增，在同等條件下達到更高數量級的產菌量。
17、3、本專利技術提出了一種高效擴培草分枝桿菌的方法，操作簡單，有效降低生產成本的同時，極大地提高了發酵菌液的產菌量，為規模化的工業生產提供了一個可行性的方案。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種高效培養草分枝桿菌的方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的一種高效培養草分枝桿菌的方法，其特征在于，步驟3中，所述的錐形瓶體積為250mL，瓶內加入鋪滿瓶底1/3-4/5的珠子。
3.根據權利要求1所述的一種高效培養草分枝桿菌的方法，其特征在于，步驟4中，所述的錐形瓶體積為3L，瓶內加入鋪滿瓶底1/3-4/5的珠子。
4.根據權利要求2或3所述的一種高效培養草分枝桿菌的方法，其特征在于，所述的珠子為3-7mm的玻璃珠或鋼珠。
5.根據權利要求4所述的一種高效培養草分枝桿菌的方法，其特征在于，步驟3中，發酵時間為48h。
6.根據權利要求1、2、3或5所述的一種高效培養草分枝桿菌的方法，其特征在于，步驟4中，培養時間為96h。
7.根據權利要求6所述的一種高效培養草分枝桿菌的方法，其特征在于，步驟2、步驟3和步驟4中所述的斜面培養基、液體培養基和擴大培養基pH均為7.2-7.4，均在121℃的環境下滅菌30min備用。
【技術特征摘要】
1.一種高效培養草分枝桿菌的方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的一種高效培養草分枝桿菌的方法，其特征在于，步驟3中，所述的錐形瓶體積為250ml，瓶內加入鋪滿瓶底1/3-4/5的珠子。
3.根據權利要求1所述的一種高效培養草分枝桿菌的方法，其特征在于，步驟4中，所述的錐形瓶體積為3l，瓶內加入鋪滿瓶底1/3-4/5的珠子。
4.根據權利要求2或3所述的一種高效培養草分枝桿菌的方法，其特征在于，所述的珠子...
【專利技術屬性】
技術研發人員：李恒，蒲發軍，李碧潔，鄭顯奇，
申請(專利權)人：四川恒通動保生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。