一種新的大鼠胰腺導管上皮細胞原代培養方法技術

本發明專利技術提供了一種新的大鼠胰腺導管上皮細胞原代培養方法；它包括以下工藝步驟：ａ、從健康大鼠胰腺組織中分離主胰管；ｂ、使用混合消化酶分步消化法對胰管組織碎塊進行消化分離，獲取細胞團；ｃ、細胞團進行培養及純化：時差轉皿、使用梯度血清培養基聯合純化，得胰腺導管上皮細胞。本發明專利技術方法原料來源于常見的實驗動物大鼠，利用主胰管周圍器官的張力使其能從整體胰腺組織中得到快速有效的剝離。分步消化的方式可得到大小適宜的細胞團，所得培養細胞產量可比整體消化法提高了６０％以上。聯合使用取材、時差轉皿、使用梯度血清培養基三種方式去除其余胰腺細胞污染，純化上皮細胞；本發明專利技術的上皮細胞純化率可達９５％。

【技術實現步驟摘要】

【技術保護點】
一種大鼠胰腺導管上皮細胞原代培養方法，它包括以下工藝步驟：　　ａ、從健康大鼠胰腺組織中分離主胰管；　?。狻⑹褂没旌舷阜植较▽σ裙芙M織碎塊進行消化分離，獲取細胞團；所述的分步消化法為：　?、偃∏逑春蟮囊裙芗魹樗閴K，加入胰管碎塊４－５倍體積的混合消化酶消化１０－１５分鐘，加入ＨＢＳＳ溶液吹打、清洗，自然沉淀，棄去上清液；加入剩余胰管碎塊２－２．５倍體積的混合消化酶消化５分鐘，胎牛血清ＦＢＳ終止消化，自然沉淀后棄去上清液；　?、谠冖俨襟E的剩余胰管碎塊中加入２－４倍體積的混合消化酶，消化５分鐘，胎牛血清ＦＢＳ終止消化，自然沉淀，收集消化液；重復前述步驟，繼續消化剩余胰管碎塊，直至無肉眼可見胰管碎塊，合并收集的消化液放至離心管中，離心，棄上清，即得細胞團；　　所述的混合消化酶溶液中含有：０．１－０．２％ｗ／ｗＶ型膠原酶、０．１－０．２％ｗ／ｗ透明質酸酶、０．１－０．２％ｗ／ｗ大豆胰酶抑制劑；所述的消化溫度為３７℃；　　ｃ、將步驟ｂ得到的細胞團進行純化培養，即得胰腺導管上皮細胞。

【技術特征摘要】
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【專利技術屬性】
技術研發人員：周總光，陳珂玲，李園，鄭雪蓮，
申請(專利權)人：四川大學華西醫院，
類型：發明
國別省市：90[中國|成都]