【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及食品安全，具體地，涉及乙拌磷半抗原、人工抗原、抗體制備和乙拌磷的檢測試劑盒。
技術介紹
1、乙拌磷，又稱敵死通，能溶于乙醇、乙醚、丙酮、氯仿等有機溶劑，分解溫度105℃，在強酸強堿條件下容易分解。一種有機磷殺蟲劑。純為無色油狀液體，工業品為黃褐色油狀液體，具有惡臭味。難溶于水，易溶于一般有機溶劑。可用于防治棉花、甜菜、馬鈴薯、苜蓿等作物苗期蚜蟲、葉螨及地下害蟲等。糧食作物收獲前60天停止使用。對人畜劇毒。日容許攝入量為0.002mg/kg(體重)。美國規定作業環境空氣中最高容許濃度為0.1mg/m3。日本農藥注冊保留標準規定米為0.07mg/kg，果品、豆類為0.05mg/kg，蔬菜為0.1mg/kg。
2、乙拌磷的存在對人類身體健康造成了很大的威脅，其是有機磷化合物中毒性最大的化合物之一，乙拌磷進入到糧食、蔬菜、水果、水產品等人類賴以生存的食物里面威脅到人類的健康，當乙拌磷被吸收進腸道后，會通過血液循環遍布身體的各個部位，對人體內分泌系統造成影響，使人體發生病變、癌變。作為有機磷化合物最具代表性之一，許多國家和組織對其在食品中的含量具有嚴格的要求。根據gb?2762-2017《食品安全國家標準食品中污染物限量》，在谷物其制品中乙拌磷的最大殘留限量為0.02mg/kg，調味料及其制品中最大殘留限量為0.05mg/kg。研究表明，乙拌磷對果蔬造成了可見的嚴重威脅，因此發展更為先進、有效、靈敏的乙拌磷檢測技術就顯得尤為重要。
3、目前，乙拌磷的檢測方法較少，傳統檢測方法有高效液相色譜法(hplc
4、目前，關于乙拌磷的單克隆抗體制備研究報道較少，且靈敏度、特異性較差，藥物交叉率均超過了20％。
5、因此，需制備一種針對乙拌磷的特異性單克隆抗體，專利技術一種針對乙拌磷靈敏、快速、簡便的檢測方法。
技術實現思路
1、本專利技術的目的是為了克服現有技術的上述不足，提供一種乙拌磷半抗原、人工抗原、抗體制備及其應用。
2、本專利技術的第一個目的是提供一種乙拌磷半抗原。
3、本專利技術的第二個目的是提供一種乙拌磷人工抗原。
4、本專利技術的第三個目的是提供所述乙拌磷半抗原在制備乙拌磷人工抗原中的應用。
5、本專利技術的第四個目的是提供一種用于檢測乙拌磷的組合物。
6、本專利技術的第五個目的是提供所述的乙拌磷半抗原、所述的乙拌磷人工抗原在、或所述組合物在制備乙拌磷檢測試劑盒中的應用。
7、本專利技術的第六個目的是提供一種乙拌磷的檢測試劑盒。
8、本專利技術的第七個目的是提供一種非疾病診斷目的的乙拌磷的檢測方法。
9、為了實現上述目的，本專利技術是通過以下方案予以實現的：
10、一種乙拌磷半抗原(乙拌磷半抗原1)，其結構式如式(i)所示，
11、
12、結構式如(i)所示化合物的制備方法，包括如下步驟：
13、s1.稱取0.9g氫氧化鉀，加入20ml無水乙醇，經加熱超聲后溶清，室溫下攪拌，依次加入2ml二硫代磷酸二乙酯，1.85ml?1,2-二溴乙烷，隨后50℃油浴下加熱反應2h。
14、s2.100ml單口瓶，裝入中間體一2.24g，加入15ml甲醇，0.84ml?2-巰基乙醇，以及2.8ml?5.4m甲醇鈉甲醇溶液，室溫下反應1h。
15、s3.100ml單口瓶，裝入中間體二2.13g，稱取0.73g丁二酸酐，90mg?dmap，加入15ml吡啶，50℃油浴加熱反應2h。
16、本專利技術還要求保護一種乙拌磷人工抗原(乙拌磷人工抗原1)，為所述構式如式(i)所示乙拌磷半抗原(乙拌磷半抗原1)偶聯載體蛋白，其結構式如式(ii)所示，
17、
18、
19、優選地，所述載體蛋白為乳鐵蛋白(lf)、牛血清白蛋白(bsa)、卵清白蛋白(ova)、或血藍蛋白(klh)中的一種或幾種。
20、所述一種乙拌磷人工抗原(乙拌磷人工抗原1)制備方法包括如下步驟：
21、結構式如式(i)所示乙拌磷半抗原活化羧基，得到乙拌磷半抗原活化液；乙拌磷半抗原活化液與載體蛋白的bb緩沖溶液充分反應，純化后即得結構式如式(ii)所示乙拌磷人工抗原。
22、優選地，所述一種乙拌磷人工抗原(乙拌磷人工抗原1)制備方法包括如下步驟：
23、將載體蛋白溶于bb緩沖溶液(硼酸緩沖液)中得載體蛋白溶液；將結構式如式(i)所示乙拌磷半抗原溶于dmf(n,n-二甲基甲酰胺)中，加入edc(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基))和nhs(n-羥基琥珀酰亞胺)避光充分反應，得結構式如式(i)所示乙拌磷半抗原的活化液；將結構式如式(i)所示乙拌磷半抗原的活化液緩慢滴加入溶解有載體蛋白的溶液中，攪拌均勻，避光充分進行偶聯反應；偶聯反應產物透析，得到結構式如式(ii)所示乙拌磷人工抗原。
24、優選地，所述結構式如式(i)所示乙拌磷半抗原與載體蛋白的摩爾比為1:125。
25、本專利技術還要求保護一種乙拌磷人工抗原(乙拌磷人工抗原2)，為所述結構式如式(ii)所示的乙拌磷半抗原偶聯載體蛋白，其結構式如式(iii)所示，
26、
27、結構式如式(iii)所示乙拌磷人工抗原制備方法，包括如下步驟：
28、結構式如式(ii)所示乙拌磷半抗原活化羧基，得到乙拌磷半抗原活化液；乙拌磷半抗原活化液與載體蛋白的bb緩沖溶液充分反應，純化后即得結構式如式(iii)所示乙拌磷人工抗原。
29、優選地，結構式如式(iii)所示乙拌磷人工抗原制備方法，包括如下步驟：將載體蛋白溶于bb緩沖溶液(碳酸緩沖溶液)中得載體蛋白溶液；將結構式如式(ii)所示的乙拌磷半抗原溶于dmf中，加入edc和nhs避光充分反應，得結構式如式(ii)所示的乙拌磷半抗原的活化液；將結構式如式(ii)所示的乙拌磷半抗原的活化液緩慢滴加入載體蛋白溶液中，攪拌均勻，避光充分進行偶聯反應；偶聯反應產物透析，得到結構式如式(iii)所示乙拌磷人工抗原。
30、優選地，所述半抗原2與載體蛋白的摩爾比為1：125。
31、以上所述乙拌磷半抗原中的一個或幾個在制備乙拌磷人工抗原中的應用，也屬于本專利技術的保護范圍。
32、本專利技術還要求保護一種用于檢測乙拌磷的組合物，含有所述的結構式如式(ii)所示乙拌磷人工抗原和結構式如式(iii)所示乙拌磷人工抗原，所述的結構式如式(ii)所示乙拌磷人工抗原作為免疫原，所述的結構式如式(iii)所示乙拌磷人工抗原作為包本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種乙拌磷半抗原，其特征在于，其結構式如式(I)所示，
2.一種乙拌磷人工抗原，其特征在于，為權利要求1所述乙拌磷半抗原偶聯載體蛋白，其結構式如式(Ⅱ)所示，
3.權利要求1所述乙拌磷半抗原在制備乙拌磷人工抗原中的應用。
4.一種用于檢測乙拌磷的組合物，其特征在于，含有權利要求1所述的乙拌磷半抗原，權利要求2所述的乙拌磷人工抗原作為免疫原和包被原。
5.根據權利要求4所述的一種用于檢測乙拌磷的組合物，其特征在于，權利要求2所述的乙拌磷人工抗原載體蛋白為乳鐵蛋白作為免疫原，權利要求2所述的乙拌磷人工抗原載體蛋白為牛血清白蛋白作為包被原。
6.權利要求1所述的乙拌磷半抗原、權利要求2所述的乙拌磷人工抗原在、和/或權利要求4所述組合物在制備乙拌磷檢測試劑盒中的應用。
7.一種乙拌磷的檢測試劑盒，其特征在于，含有權利要求4所述組合物。
8.一種非疾病診斷目的的乙拌磷的檢測方法，其特征在于，利用權利要求4所述組合物。
【技術特征摘要】
1.一種乙拌磷半抗原，其特征在于，其結構式如式(i)所示，
2.一種乙拌磷人工抗原，其特征在于，為權利要求1所述乙拌磷半抗原偶聯載體蛋白，其結構式如式(ⅱ)所示，
3.權利要求1所述乙拌磷半抗原在制備乙拌磷人工抗原中的應用。
4.一種用于檢測乙拌磷的組合物，其特征在于，含有權利要求1所述的乙拌磷半抗原，權利要求2所述的乙拌磷人工抗原作為免疫原和包被原。
5.根據權利要求4所述的一種用于檢測乙拌磷的組合物...
【專利技術屬性】
技術研發人員：李向陽，宋潔，潘修敏，劉威，李聰平，吳江，王越茂，寧勤功，梁純，
申請(專利權)人：中國煙草云南進出口有限公司，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。