【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及皮膚修復，更具體地，涉及一種水解膠原的制備方法及其在皮膚上的應用。
技術介紹
1、膠原蛋白是生物高分子，動物結締組織中的主要成分，也是哺乳動物體內含量最多、分布最廣的功能性蛋白，占蛋白質總量的25％～30％，某些生物體甚至高達80％以上。膠原蛋白含有包括人體生長所必須的七種氨基酸在內的二十多種氨基酸。膠原蛋白因其具有獨特的結構特征，良好的物理性能、生物降解性和生物相容性，在醫藥、食品、化妝品、組織工程和材料工程等領域有廣泛應用。
2、水解膠原蛋白是膠原蛋白水解的產物，水解使膠原蛋白的多肽鍵被打斷,從而使溶解度差、不易被機體吸收的大分子膠原蛋白轉化為水溶性好、易于被機體吸收的小分子多肽(相對分子質量約3000da)，水解膠原蛋白的蛋白質含量高達92％以上,富含人體所需要的18種氨基酸和多種微量元素，現有水解膠原蛋白復合物合成工序較為復雜，產品穩定性差，導致水解蛋白質合成不穩定，且操作過程也需要簡化，從而適合大面積進行推廣使用。
技術實現思路
1、針對現有技術所存在的技術問題，本專利技術提供了一種水解膠原的制備方法及其在皮膚上的應用。本專利技術制備方法得到的水解膠原富含rgd系列片段，ger系列片段等氨基酸片段的功能，具有很好的修護皮膚的作用。本專利技術的水解膠原可高效率地促進成纖維細胞進行增殖，并分泌大量的i型和iii型膠原用于皮膚組織修復。
2、具體而言，本專利技術首先是提供了一種水解膠原的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括如下步驟：>
3、1)構建含膠原蛋白的重組質粒；
4、2)構建含有水解酶的重組質粒；
5、3)將步驟1)和2)的重組質粒共同轉入宿主細胞，進行高溫發酵培養；
6、4)收集步驟3)發酵液，離心取上清備用；
7、5)分離純化步驟4)中的上清液，即可得到水解膠原。
8、優選地，所述步驟1)中的膠原蛋白的編碼序列如seq?id?no.1所示。
9、優選地，所述步驟2)中的水解酶包括中性蛋白酶、胰酶、動物膠原酶。
10、優選地，所述中性蛋白酶的編碼序列如seq?id?no.2所示，胰酶的編碼序列如seqid?no.3所示，動物膠原酶的編碼序列如seq?id?no.4所示。
11、優選地，所述質粒選自puc、pac、pbluescript中的一種或幾種。
12、優選地，所述步驟3)中的轉入方法包括但不限于電轉導、顯微注射和基因槍。
13、優選地，步驟3)中的宿主細胞包括但不限于大腸桿菌、釀酒酵母、枯草芽孢桿菌。
14、優選地，步驟3)中的高溫發酵培養條件為將重組宿主細胞接種于發酵培養液中，維持發酵溫度為65-85℃，ph在4.5-6.5之間進行發酵培養。
15、優選地，步驟4)中的離心條件為5000g?10-16h。
16、另一方面，本專利技術還提供了所述方法制備得到的水解膠原在制備修護皮膚產品中的用途，其特征在于，所述水解膠原富含rgd系列片段，ger系列片段。
17、本專利技術的優點如下：本專利技術首次利用基因工程方法實現了水解膠原的制備，并且經驗證，本專利技術制備方法得到的水解膠原富含rgd系列片段，ger系列片段等氨基酸片段的功能，具有很好的修護皮膚的作用。本專利技術的水解膠原可高效率地促進成纖維細胞進行增殖，并分泌大量的i型和iii型膠原用于皮膚組織修復。
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1.一種水解膠原的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括如下步驟：
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟1)中的膠原蛋白的編碼序列如SEQID?NO.1所示。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟2)中的水解酶包括中性蛋白酶、胰酶、動物膠原酶。
4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述中性蛋白酶的編碼序列如SEQ?ID?NO.2所示，胰酶的編碼序列如SEQ?ID?NO.3所示，動物膠原酶的編碼序列如SEQ?ID?NO.4所示。
5.如權利要求1-4任一項所述的方法，其特征在于，所述質粒選自pUC、pAC、pBluescript中的一種或幾種。
6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟3)中的轉入方法包括但不限于電轉導、顯微注射和基因槍。
7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3)中的宿主細胞包括但不限于大腸桿菌、釀酒酵母、枯草芽孢桿菌。
8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3)中的高溫發酵培養條件為將重組宿主細胞接種于發酵培養液中，維持發酵溫度為6
9.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟4)中的離心條件為5000g?10-16h。
10.權利要求1-9任一項所述方法制備得到的水解膠原在制備修護皮膚產品中的用途，其特征在于，所述水解膠原富含RGD系列片段，GER系列片段。
...【技術特征摘要】
1.一種水解膠原的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括如下步驟：
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟1)中的膠原蛋白的編碼序列如seqid?no.1所示。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟2)中的水解酶包括中性蛋白酶、胰酶、動物膠原酶。
4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述中性蛋白酶的編碼序列如seq?id?no.2所示，胰酶的編碼序列如seq?id?no.3所示，動物膠原酶的編碼序列如seq?id?no.4所示。
5.如權利要求1-4任一項所述的方法，其特征在于，所述質粒選自puc、pac、pbluescript中的一種或幾種。
6.如權利要...
【專利技術屬性】
技術研發人員：涂桂洪，請求不公布姓名，請求不公布姓名，請求不公布姓名，
申請(專利權)人：廣州市金因源生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：
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