【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生化體外診斷試劑，尤其涉及一種雙粒徑膠乳微球偶聯的肌紅蛋白檢測試劑盒及制備方法。
技術介紹
1、肌紅蛋白是肌肉中儲存和運載氧的蛋白質，由一條多肽鏈和一個輔基血紅素構成，相對分子質量約為16700kd，含153個氨基酸殘基，生理功能上有助于肌細胞將氧轉運至線粒體。當心肌或骨骼肌細胞膜通透性增高時，肌紅蛋白易從細胞漿逸脫進入血循環，并經腎臟排泄。因此肌紅蛋白是反映骨骼肌、心肌受損有其程度的靈敏指標。
2、急性心肌梗塞時發生心肌缺血壞死，細胞通透性增加，肌紅蛋白釋放進入血循環，12h內患者肌紅蛋白均升高，幅度大于各種心肌酶，且發病1-3小時血中即可檢出，因此肌紅蛋白也是急性心肌梗塞最早的診斷學指標，血清升高的幅度和持續時間與梗死面積及心肌壞死程度呈正相關。另外，肌紅蛋白半衰期短(15min)，胸痛發作后6-12h不升高，有助于排除心肌梗塞的診斷，是篩查心肌梗塞的有效指標。因此，高靈敏度的肌紅蛋白的制備在診斷心肌損傷疾病方面的及時性、進程、預后及治療效果方面具有廣泛的臨床意義。
3、目前通常采用乳膠增強透射比濁法、elisa法和膠體金法等方法測定。elisa法適合大批量制備，但重復性差，操作復雜；但靈敏度不高，難以實現定量等缺點限制了這種方法的使用；現有的乳膠免疫比濁試劑盒靈敏度低，線性差，價格昂貴。
4、因此，建立一種制備時間盡量短，并且除了能在實驗室進行檢測外，還能夠進行床旁檢測，同時能定量測定myo的制備方法，從而為臨床提供準確的診斷依據，是十分必要的。
1、本專利技術的目的在于提供一種雙粒徑膠乳微球偶聯的肌紅蛋白檢測試劑盒及制備方法，旨在解決現有肌紅蛋白測定試劑盒靈敏度較低的問題。
2、為實現上述目的，第一方面，本專利技術提供了一種雙粒徑膠乳微球偶聯的肌紅蛋白檢測試劑盒制備方法，包括以下步驟：
3、準備制備試劑盒的原料；
4、基于所述原料分別制備第一檢測試劑、第二檢測試劑和標準品；
5、將所述第一檢測試劑、所述第二檢測試劑和所述標準品封盒包裝，得到試劑盒。
6、其中，所述制備第一檢測試劑的具體方式：
7、基于所述原料按比例稱取十二水磷酸氫二鈉20-30份、二水磷酸二氫鈉5-11份、氫氧化鈉2-8份、氯化鈉2-4份、吐溫3-8份、檸檬酸4-10份、聚乙二醇1-4份和疊氮化鈉1-2份，得到第一檢測試劑原料；
8、將所述第一檢測試劑原料依次進行純化水定容和混合操作，得到所述第一檢測試劑。
9、其中，所述制備第二檢測試劑關鍵原料抗體致敏乳膠的具體方式：
10、用20mm～40mm的mes緩沖液將10％含固量的膠乳稀釋至2.5％含固量，攪拌10～20min，并按1:2比例加入活化劑1-乙基-碳酰二亞胺和n-羥基琥珀酰亞胺，攪拌30min，得到活化溶液；
11、向所述活化溶液內加入myo抗體，攪拌2h后進行抗體的包被，得到包被溶液；
12、向所述包被溶液加入含牛血清白蛋白的封閉劑，封閉2h，得到封閉溶液；
13、以12000rpm，4℃的條件對所述封閉溶液離心30min，得到離心溶液，并利用所述第二檢測試劑稀釋液重懸后對所述離心溶液超聲100s，再所述第二檢測試劑進行稀釋，最后加入保護劑，得到所述抗體致敏乳膠。
14、其中，所述制備第二檢測試劑的具體方式：
15、基于所述原料按比例稱取十二水磷酸氫二鈉20-30份、二水磷酸二氫鈉4-8份、檸檬酸1-5份、氫氧化鈉5-10份、疊氮化鈉1-2份、吐溫5-10份、牛血清白蛋白10-20份和甘油2-6份，得到第二檢測試劑稀釋液原料；
16、將所述第二檢測試劑稀釋液原料依次進行純化水定容和混合操作，得到所述第二檢測試劑稀釋液，將上述抗體致敏膠乳和第二檢測試劑稀釋液按一定比例混合，最終得到第二檢測試劑。
17、其中，所述制備校準品的具體方式：
18、基于所述原料按比例十二水磷酸氫二鈉10-20份、二水磷酸二氫鈉5-10份、氫氧化鈉2-5份、氯化鈉2-5份、疊氮化鈉1-2份、牛血清白蛋白5-10份、甘油5-10份、聚乙烯吡咯烷酮k-302-5份、edta·2na?2-5份和肌紅蛋白抗原，得到校準品稀釋液原料；
19、將所述校準品原料依次進行純化水定容和混合操作，得到所述校準品。
20、第二方面，本專利技術該提供了一種雙粒徑膠乳微球偶聯的肌紅蛋白檢測試劑盒，包括第一檢測試劑、第二檢測試劑、標準品和外殼，所述第一檢測試劑、所述第二檢測試劑和標準品分別設置于所述外殼內。
21、本專利技術的一種雙粒徑膠乳微球偶聯的肌紅蛋白檢測試劑盒制備方法，準備制備試劑盒的原料；基于所述原料分別制備第一檢測試劑、第二檢測試劑和標準品；將所述第一檢測試劑、所述第二檢測試劑和所述標準品封盒包裝，得到試劑盒，該試劑盒測試肌紅蛋白濃度為100ng/ml的樣本，吸光度變化≥0.0200，分析靈敏度較傳統試劑盒測定的靈敏度更高，該試劑盒制備方法簡便、性能穩定、靈敏度高、抗干擾強、線性好，可廣泛用于各種生化儀配套使用，通用性強，解決現有肌紅蛋白測定試劑盒靈敏度較低的問題。
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1.一種雙粒徑膠乳微球偶聯的肌紅蛋白檢測試劑盒制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.如權利要求1所述的一種雙粒徑膠乳微球偶聯的肌紅蛋白檢測試劑盒制備方法，其特征在于，
3.如權利要求1所述的一種雙粒徑膠乳微球偶聯的肌紅蛋白檢測試劑盒制備方法，其特征在于，
4.如權利要求3所述的一種雙粒徑膠乳微球偶聯的肌紅蛋白檢測試劑盒制備方法，其特征在于，
5.如權利要求1所述的一種雙粒徑膠乳微球偶聯的肌紅蛋白檢測試劑盒制備方法，其特征在于，
6.一種雙粒徑膠乳微球偶聯的肌紅蛋白檢測試劑盒，應用于如權利要求1所述的一種雙粒徑膠乳微球偶聯的肌紅蛋白檢測試劑盒制備方法，其特征在于，
【技術特征摘要】
1.一種雙粒徑膠乳微球偶聯的肌紅蛋白檢測試劑盒制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.如權利要求1所述的一種雙粒徑膠乳微球偶聯的肌紅蛋白檢測試劑盒制備方法，其特征在于，
3.如權利要求1所述的一種雙粒徑膠乳微球偶聯的肌紅蛋白檢測試劑盒制備方法，其特征在于，
4.如權利要求3所述...
【專利技術屬性】
技術研發人員：韋迎春，肖佳民，茍文來，趙麗珍，
申請(專利權)人：桂林優利特醫療電子有限公司，
類型：發明
國別省市：
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