【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及黑鱸雌核培育，具體為一種大口黑鱸雌核發(fā)育苗培育方法。
技術(shù)介紹
1、大口黑鱸是一種魚類，屬于鱸形目黃鱸科。它的體型較大，體長可達1米，體重可達12公斤。大口黑鱸主要分布在歐洲的大西洋沿岸地區(qū)，包括地中海和黑海。它們生活在海岸附近的淺海水域和河口，也會進入淡水河流。大口黑鱸是肉食性魚類，以小魚、蝦和蟹為食。它們具有較強的捕食能力和游泳速度，是非常受釣魚愛好者歡迎的目標(biāo)魚種。在飲食上，大口黑鱸的肉質(zhì)鮮美，被廣泛用于烹飪。
2、魚類性別控制育種技術(shù)是制備全雌或全雄群體的一種重要手段。性別與魚類高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)和高效養(yǎng)殖的經(jīng)濟性狀(如大小、體色)緊密相關(guān)。制備單性群體可以有效的控制飼養(yǎng)魚群在繁殖季節(jié)的自然繁殖而產(chǎn)生不整齊的群體，從而避免資源的浪費。大口黑鱸的人工誘導(dǎo)減數(shù)分裂雌核發(fā)育已有報道，根據(jù)雌核發(fā)育后代中雌性占2/3，雄性占1/3的結(jié)果，推論鱸魚為zz-zw型魚類。但是，論文作者鑒定性別的方法是超聲波，而不是組織切片方法，是否準(zhǔn)確，有待進一步驗證。我國白俊杰等從雄性染色體上找到性別特異性分子標(biāo)記，并推測鱸魚的性別決定類型是xx-xy型。因此，鱸魚雌核發(fā)育后代的性別組成，有待于進一步實驗驗證，以利于準(zhǔn)確判斷其性別決定類型。
3、大口黑鱸雖然已經(jīng)養(yǎng)殖多年，但是由于對催產(chǎn)藥物反應(yīng)不敏感，不能像其它魚類那樣人工采卵受精，所以至今仍舊采用自然繁殖方式生產(chǎn)。為了誘導(dǎo)雌核發(fā)育必須實現(xiàn)人工采卵，需要研究利用藥物催產(chǎn)，建立人工采卵技術(shù)，使之能夠獲得實驗所用的成熟卵，以滿足誘導(dǎo)雌核發(fā)育的需要，人工采卵容易使得黑鱸卵細(xì)胞失
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)要解決的是上述提到的種種問題，提供一種大口黑鱸雌核發(fā)育苗培育方法。
2、為解決上述技術(shù)問題，本專利技術(shù)提供的技術(shù)方案為：一種大口黑鱸雌核發(fā)育苗培育方法，包括以下步驟：
3、s1、在每年的5月底到7月初，水溫在22-26℃，選取兩齡腹部膨大而柔軟的雌性和能擠出白色精液的雄性大口黑鱸個體作為親本。利用人工繁育技術(shù)制備大口黑鱸魚苗，將剛孵化的魚苗放在合適的養(yǎng)殖環(huán)境中飼養(yǎng)2個月(通過高溫大口黑鱸增加性逆轉(zhuǎn))，再轉(zhuǎn)移到池塘中養(yǎng)殖，直至性成熟；
4、s2、利用性別分子標(biāo)記，從上面高溫處理的大口黑鱸性成熟個體中篩選偽雄魚(xx)和正常的雌魚(xx)，具體步驟包括：
5、a.通過胸鰭條的粗糙程度、腹部膨大程度以及精液來鑒別繁殖季節(jié)大口黑鱸的表型性別；
6、b.取每條待檢測魚的小部分尾鰭條，提取其全基因組dna；
7、c.利用上述性別特異性引物ms13-fr，以待檢測魚的樣品的dna為模板，進行pcr擴增；
8、d.擴增后的pcr產(chǎn)物經(jīng)1.5％的瓊脂糖凝膠電泳檢測：如果電泳出現(xiàn)了585bp的顯性條帶，則該魚為遺傳型雄性；如果電泳沒有出現(xiàn)該目的條帶，則該魚遺傳型雌性；
9、e.結(jié)合表型性別和遺傳型性別確定偽雄魚和正常雌魚：偽雄魚表現(xiàn)為表型性別為雄性，而遺傳型性別為雌性；正常的雌魚表現(xiàn)為表型性別和遺傳性別均為雌性；
10、f.將偽雄魚(xx)與正常的雌魚(xx)進行交配，制備全雌(xx)大口黑鱸群體。
11、s3、將全雌(xx)大口黑鱸群體飼養(yǎng)至性成熟，在繁殖季節(jié)通過胸鰭條的粗糙程度、腹部膨大柔軟程度以及精液有否鑒定成魚表型性別，利用分子標(biāo)記檢測其遺傳型性別。
12、作為改進，所述步驟s2中性別分子為大口黑鱸雄性特異性片段，該特異性片段序列如dna序列no.1。
13、作為改進，所述s2步驟中的引物對ms13-fr為：正向引物：ttcagcacacagaccaaggatt；反向引物：tgttccgaagatgagcgaatga。
14、作為改進，所述步驟s1中合適的環(huán)境溫度為性腺分化早期誘導(dǎo)大口黑鱸性逆轉(zhuǎn)的最佳溫度，即為28℃。
15、本專利技術(shù)與現(xiàn)有技術(shù)相比的優(yōu)點在于：
16、1、本專利技術(shù)提供的一種大口黑鱸雌核發(fā)育苗培育方法利用全基因組重測序技術(shù)，通過全基因組關(guān)聯(lián)分析，鑒定出了大口黑鱸雄性特有的dna片段，根據(jù)雄性特異的片段設(shè)計的性別特異性引物可以有效的對大口黑鱸的雌、雄性別進行鑒定，利用篩選出高抗高產(chǎn)雌性大口黑鱸作為母本，固定親本性狀，形成單性純合家系，通過不同家系間進行雜交，篩選具有生長優(yōu)勢雜種品系，通過優(yōu)秀的雌核發(fā)育近交系母本與誘導(dǎo)性變的雌核發(fā)育父本雜交，形成生長快的全雌單交種新品系，周期短，見效快，有助于培育并推廣具有雜種優(yōu)勢的大口黑鱸全雌苗種。
17、2、本專利技術(shù)提供的一種大口黑鱸雌核發(fā)育苗培育方法利用構(gòu)建的性別分子標(biāo)記從高溫養(yǎng)殖處理后的大口黑鱸中篩選出偽雄魚(xx)和遺傳型雌魚(xx)，利用偽雄魚和遺傳型雌魚交配制備全雌(xx)大口黑鱸群體，然后通過誘導(dǎo)雌核發(fā)育，獲得全雌性群體，在此基礎(chǔ)上，通過雌核發(fā)育近交系間的雜交，獲得雜種優(yōu)勢作用明顯的生長快的群體，最終創(chuàng)制生長快的全雌新品種，從而減少魚類育種階段的激素的使用和縮短育種期限。
18、3、本專利技術(shù)提供一種大口黑鱸雌核發(fā)育苗培育方法培育出來的雌核黑鱸純合度高，遺傳均一，形態(tài)一致，且新品種的黑鱸父母本是經(jīng)過選育的雌核發(fā)育系，商品代是通過雜交生產(chǎn)，相當(dāng)于作物上的制種，因此該新品種除育種者外，其他人不可復(fù)制，一旦其他人引進外血(與其他群體雜交)，其后代的雌雄性比將恢復(fù)為1:1，并且將失去原來新品種的生長快等優(yōu)良特性，從而可以保證該雌核黑鱸除選育者外不可復(fù)制，能有效保護品種的純潔性。
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1.一種大口黑鱸雌核發(fā)育苗培育方法，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大口黑鱸雌核發(fā)育苗培育方法，其特征在于：所述步驟S2中性別分子為大口黑鱸雄性特異性片段，該特異性片段序列可以正常選取雄性黑鱸基因中的特異性片段即可，如雄黑鱸DNA序列NO.1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大口黑鱸雌核發(fā)育苗培育方法，其特征在于：所述S2步驟中的引物對MS13-FR由正向引物和反向引物兩個引物組成；
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種大口黑鱸雌核發(fā)育苗培育方法，其特征在于：所述步驟S1中合適的環(huán)境溫度為性腺分化早期誘導(dǎo)大口黑鱸性逆轉(zhuǎn)的最佳溫度，即為28℃。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大口黑鱸雌核發(fā)育苗培育方法，其特征在于：所述步驟S1中篩選特征為：雌性黑鱸親本特征為腹部膨大而柔軟：雌性黑鱸親本特征為能擠出白色精液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大口黑鱸雌核發(fā)育苗培育方法，其特征在于：將步驟e中偽雄黑鱸和正常雌黑鱸的表型性別和遺傳型性別分別為：偽雄黑鱸表現(xiàn)為表型性別為雄性，而遺傳型性別為雌性；正常的黑鱸表現(xiàn)為表型性別和遺傳性別均為雌
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種大口黑鱸雌核發(fā)育苗培育方法，其特征在于：確定完成雄黑鱸和正常雌黑鱸后，將偽雄黑鱸(XX)與正常的雌黑鱸(XX)進行交配，制備全雌(XX)大口黑鱸群體。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種大口黑鱸雌核發(fā)育苗培育方法，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大口黑鱸雌核發(fā)育苗培育方法，其特征在于：所述步驟s2中性別分子為大口黑鱸雄性特異性片段，該特異性片段序列可以正常選取雄性黑鱸基因中的特異性片段即可，如雄黑鱸dna序列no.1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大口黑鱸雌核發(fā)育苗培育方法，其特征在于：所述s2步驟中的引物對ms13-fr由正向引物和反向引物兩個引物組成；
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種大口黑鱸雌核發(fā)育苗培育方法，其特征在于：所述步驟s1中合適的環(huán)境溫度為性腺分化早期誘導(dǎo)大口黑鱸性逆轉(zhuǎn)的最佳溫度，即為28℃。
<...【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：孫奧，吳玉東，王東明，
申請(專利權(quán))人：泗陽縣雙高水產(chǎn)科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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