【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本申請(qǐng)涉及臨床治療藥物監(jiān)測(cè)的，具體涉及一種三唑類(lèi)抗真菌藥物的檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法。
技術(shù)介紹
1、藥物能夠預(yù)防、治療和診斷疾病，與疾病的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。藥物經(jīng)機(jī)體吸收入血，再分布到組織器官，最終經(jīng)肝腎代謝排泄至體外。臨床上開(kāi)展治療藥物監(jiān)測(cè)的藥物有精神類(lèi)藥物、免疫抑制劑、心血管類(lèi)藥物、抗腫瘤藥、抗真菌藥及抗生素等。
2、體內(nèi)抗真菌藥的藥物濃度和臨床療效及不良反應(yīng)息息相關(guān)，不少藥物因治療范圍窄，毒副作用大而需要進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。通過(guò)測(cè)定患者治療用藥的血濃度或其它體液濃度，根據(jù)藥動(dòng)學(xué)原理和計(jì)算方法擬定個(gè)體化給藥方案，以提高療效和降低不良反應(yīng)，達(dá)到有效而安全治療的目的。
3、目前，三唑類(lèi)抗真菌藥物的檢測(cè)方法主流為液相色譜-質(zhì)譜法，該檢測(cè)方法需要專(zhuān)業(yè)的操作人員，需要先離心分離得到血漿，然后加入有機(jī)試劑和內(nèi)標(biāo)試劑，沉淀蛋白離心再次得到上清，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，檢測(cè)實(shí)際樣本時(shí)需要對(duì)建立的曲線(xiàn)進(jìn)行校準(zhǔn)，且前處理過(guò)程相對(duì)復(fù)雜耗時(shí)，不適用于現(xiàn)場(chǎng)及時(shí)檢測(cè)；其它方法如免疫法和發(fā)光法容易受到類(lèi)似物的干擾出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，準(zhǔn)確性欠佳。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、為了快捷、方便地檢測(cè)三唑類(lèi)抗真菌藥物的藥物濃度，同時(shí)提高檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性，本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N三唑類(lèi)抗真菌藥物的檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法。
2、第一方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N三唑類(lèi)抗真菌藥物的檢測(cè)試劑盒，包括原位電離試劑盒、同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液；所述同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液以體積比為100：(5-10)：(1-5)的乙腈、異丙醇、醋酸銨作為稀釋液。p>
3、本申請(qǐng)?zhí)峁┑脑噭┖谢谕凰叵♂屬|(zhì)譜法原理(idms，isotope?dilution?massspectrometry)進(jìn)行定量檢測(cè)，即采用與待測(cè)物具有相同分子結(jié)構(gòu)的某種濃縮同位素物質(zhì)作為稀釋劑，與試樣進(jìn)行充分混合后使用質(zhì)譜檢測(cè)，結(jié)合同位素豐度的比值和已知同位素物質(zhì)的濃度求得樣品中待測(cè)物濃度；該方法靈敏、準(zhǔn)確，可以降低基質(zhì)效應(yīng)，減小前處理的操作誤差以及系統(tǒng)的誤差。
4、本申請(qǐng)以上述體積比的乙腈、異丙醇、醋酸銨作為稀釋液，以配制得到同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液對(duì)三唑類(lèi)抗真菌藥物進(jìn)行檢測(cè)，可以有效提高檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度和精密度。
5、優(yōu)選地，所述稀釋液為體積比為100：(7-10)：(1-3)的乙腈、異丙醇、醋酸銨。
6、在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述乙腈、異丙醇、醋酸銨的體積比可以為100：5：1、100：7：1、100：10：1、100：5：3、100：7：3、100：10：3、100：5：5、100：7：5、100：10：5。
7、在一些具體的實(shí)施方案中，所述乙腈、異丙醇、醋酸銨的體積比還可以為100：5：(1-3)、100：7：(1-3)、100：10：(1-3)、100：(7-10)：3、100：(5-10)：3、100：10：(1-5)、100：(7-10)：5、100：(5-10)：5、100：10：(1-5)。
8、經(jīng)過(guò)試驗(yàn)分析可知，本申請(qǐng)利用上述重量比的乙腈、異丙醇、醋酸銨作為稀釋液，以配制同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液，可以有效提高檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度和精密度。
9、優(yōu)選地，所述原位電離試劑盒包括殼體、紙芯、毛細(xì)管、鋼珠；所述鋼珠內(nèi)嵌在上殼體的凹槽中；所述毛細(xì)管插在所述紙芯中間，紙芯發(fā)揮載樣功能；所述紙芯由含有卡扣設(shè)計(jì)的上下殼體夾緊固定。
10、優(yōu)選地，所述毛細(xì)管插在所述紙芯中間的深度為0.8-1.2mm。
11、原位電離試劑盒由殼體、紙芯、毛細(xì)管、鋼珠等組成，集色譜分離和前處理功能于一體，極大程度上減少了樣品分析時(shí)間，且更加便捷和低耗。鋼珠內(nèi)嵌在上殼體的凹槽中，提供電壓傳導(dǎo)功能；毛細(xì)管插在長(zhǎng)條形紙芯中間，深度約為1mm，紙芯發(fā)揮載樣功能；插了毛細(xì)管的紙芯由含有卡扣設(shè)計(jì)的上下殼體夾緊固定，殼體起到支撐保護(hù)作用。將液體滴加在紙芯上，液體溶劑進(jìn)入毛細(xì)管，在高壓電壓驅(qū)動(dòng)下形成電噴霧，進(jìn)而進(jìn)入檢測(cè)器，從而進(jìn)行分析。
12、優(yōu)選地，所述三唑類(lèi)抗真菌藥物選自伏立康唑、氟康唑、艾沙康唑、泊沙康唑中的任意一種或多種。
13、優(yōu)選地，所述三唑類(lèi)抗真菌藥物為伏立康唑，所述同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液為0.05-50g/ml的伏立康唑-d3。
14、進(jìn)一步地，所述三唑類(lèi)抗真菌藥物為伏立康唑，所述同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液為0.1-10g/ml的伏立康唑-d3。
15、采用伏立康唑-d3(cas#:1217661-14-7)作為同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液，與固定體積的待測(cè)樣本充分混合后滴加至檢測(cè)試劑盒中，插入便攜式質(zhì)譜分析系統(tǒng)中，對(duì)樣品實(shí)現(xiàn)電噴霧離子化，并通過(guò)質(zhì)譜系統(tǒng)進(jìn)行分析，得到伏立康唑與伏立康唑-d3的信號(hào)峰面積比值，結(jié)合伏立康唑-d3的實(shí)際濃度，通過(guò)數(shù)據(jù)計(jì)算，得到樣品中伏立康唑藥物的濃度。
16、第二方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N三唑類(lèi)抗真菌藥物的檢測(cè)方法，利用上述檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，包括以下步驟：
17、將待測(cè)樣本置于所述同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液中，渦旋充分混合，將混勻的液體滴加在所述原位電離試劑盒上，靜置5-30s后，插入cell小型便攜式質(zhì)譜儀中，對(duì)樣品實(shí)現(xiàn)電噴霧離子化，并通過(guò)質(zhì)譜系統(tǒng)進(jìn)行分析，得到所述三唑類(lèi)抗真菌藥物與所述同位素的信號(hào)峰面積比值，計(jì)算得到所述待測(cè)樣本中三唑類(lèi)抗真菌藥物的含量。
18、優(yōu)選地，所述靜置的時(shí)間為5-15s。
19、經(jīng)過(guò)試驗(yàn)分析可知，在檢測(cè)過(guò)程中，本申請(qǐng)將混勻的液體滴加在原位電離試劑盒上，靜置一定的時(shí)間后，可以有效提高檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度和精密度。
20、優(yōu)選地，所述三唑類(lèi)抗真菌藥物為伏立康唑時(shí)，所述質(zhì)譜儀分析條件為：伏立康唑檢測(cè)模式：正模式，前體離子：m/z：350.1，定量離子m/z：127.1、224.0、281.1中的一種或多種，離子選擇能量:0.5～5v，碰撞誘導(dǎo)解離能量：1-4v；
21、伏立康唑-d3：檢測(cè)模式：正模式，前體離子m/z：353.1，定量離子m/z：127.1、224.0、284.1中的一種或多種，離子選擇能量：0.5-5v，碰撞誘導(dǎo)解離能量：1-4v。
22、同時(shí)，本申請(qǐng)利用上述檢測(cè)試劑盒和檢測(cè)方法時(shí)，在單同位素內(nèi)標(biāo)定量方法時(shí)，同位素內(nèi)標(biāo)濃度已知，基于待測(cè)物和同位素標(biāo)記的待測(cè)物性質(zhì)相同，包括離子化效率、碎裂效率、基質(zhì)效應(yīng)等，進(jìn)而利用待測(cè)物和同位素內(nèi)標(biāo)碎片峰面積比值進(jìn)行定量，無(wú)需建立校準(zhǔn)曲線(xiàn)；在多同位素內(nèi)標(biāo)定量方法時(shí)，使用兩種或多種同位素內(nèi)標(biāo)，同位素內(nèi)標(biāo)濃度覆蓋整個(gè)線(xiàn)性范圍，分析檢測(cè)時(shí)利用兩種或多種同位素建立兩點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)曲線(xiàn)，依據(jù)線(xiàn)性方程計(jì)算待測(cè)物濃度，實(shí)現(xiàn)校準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立和待測(cè)物的定量分析同步完成，極大程度上減少系統(tǒng)偏差，無(wú)需定期對(duì)校準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行校準(zhǔn)。
23、綜上所述，本申請(qǐng)的技術(shù)方案具有以下效果：
24、本申請(qǐng)?zhí)峁┑臋z測(cè)試劑盒基于原位電離質(zhì)譜法，原位電離試劑盒搭配便攜式質(zhì)譜分析系統(tǒng)在保證了準(zhǔn)確度和靈敏度的同時(shí)，一方面可以避免代謝物與藥物結(jié)構(gòu)相似帶來(lái)的假陽(yáng)性問(wèn)題。同時(shí)其操作簡(jiǎn)單，隨時(shí)本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種三唑類(lèi)抗真菌藥物的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括原位電離試劑盒、同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液；所述同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液以體積比為100：（5-10）：（1-5）的乙腈、異丙醇、醋酸銨作為稀釋液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述三唑類(lèi)抗真菌藥物的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述稀釋液為體積比為100：（7-10）：（1-3）的乙腈、異丙醇、醋酸銨。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述三唑類(lèi)抗真菌藥物的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述原位電離試劑盒包括殼體、紙芯、毛細(xì)管、鋼珠；所述鋼珠內(nèi)嵌在上殼體的凹槽中；所述毛細(xì)管插在所述紙芯中間，紙芯發(fā)揮載樣功能；所述紙芯由含有卡扣設(shè)計(jì)的上下殼體夾緊固定。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述三唑類(lèi)抗真菌藥物的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述毛細(xì)管插在所述紙芯中間的深度為0.8-1.2mm。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述三唑類(lèi)抗真菌藥物的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述三唑類(lèi)抗真菌藥物選自伏立康唑、氟康唑、艾沙康唑、泊沙康唑中的任意一種或多種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述三唑類(lèi)抗真菌藥物的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述三唑類(lèi)抗真菌藥物為伏立康唑，所述同位
7.一種三唑類(lèi)抗真菌藥物的檢測(cè)方法，其特征在于，利用權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述三唑類(lèi)抗真菌藥物的檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述三唑類(lèi)抗真菌藥物的檢測(cè)方法，其特征在于，所述靜置的時(shí)間為5-15s。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述三唑類(lèi)抗真菌藥物的檢測(cè)方法，其特征在于，所述三唑類(lèi)抗真菌藥物為伏立康唑時(shí)，所述質(zhì)譜儀分析條件為：伏立康唑檢測(cè)模式：正模式，前體離子：m/z：350.1，定量離子m/z：127.1、224.0、281.1中的一種或多種，離子選擇能量:0.5~5?V，碰撞誘導(dǎo)解離能量：1-4V；
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種三唑類(lèi)抗真菌藥物的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括原位電離試劑盒、同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液；所述同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液以體積比為100：（5-10）：（1-5）的乙腈、異丙醇、醋酸銨作為稀釋液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述三唑類(lèi)抗真菌藥物的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述稀釋液為體積比為100：（7-10）：（1-3）的乙腈、異丙醇、醋酸銨。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述三唑類(lèi)抗真菌藥物的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述原位電離試劑盒包括殼體、紙芯、毛細(xì)管、鋼珠；所述鋼珠內(nèi)嵌在上殼體的凹槽中；所述毛細(xì)管插在所述紙芯中間，紙芯發(fā)揮載樣功能；所述紙芯由含有卡扣設(shè)計(jì)的上下殼體夾緊固定。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述三唑類(lèi)抗真菌藥物的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述毛細(xì)管插在所述紙芯中間的深度為0.8-1.2mm。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述三唑類(lèi)抗真菌藥物的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述三唑類(lèi)抗真菌藥物選自伏立康唑、氟康唑...
【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張男，趙健，卜杰洵，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：清譜科技蘇州有限公司，
類(lèi)型：發(fā)明
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