【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于生物，涉及一種干細(xì)胞無(wú)血清無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)基、制備方法及應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、多能干細(xì)胞(pluripotency?stem?cell，psc)是一類具有自我更新、自我復(fù)制能力的多潛能細(xì)胞。在一定條件下，它可以分化成多種apsc多能細(xì)胞。維持多能干細(xì)胞多能性和自我更新并不容易，常需要多種細(xì)胞因子和化合物才能達(dá)到一定的效果。相應(yīng)地，出現(xiàn)了多種含有這些細(xì)胞因子和化合物的培養(yǎng)基。傳統(tǒng)的多能干細(xì)胞培養(yǎng)基往往需要引入小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(mef)作為滋養(yǎng)層細(xì)胞和血清作為多能干細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)成分，然而其批間差、動(dòng)物源性、各類感染源性、成分不確定性等影響實(shí)驗(yàn)研究的判斷和進(jìn)一步深入地應(yīng)用研究。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題，提供以下技術(shù)方案：
2、本專利技術(shù)第一方面提供了一種干細(xì)胞培養(yǎng)的體系，所述體系命名為hpsm，所述hpsm由基礎(chǔ)培養(yǎng)基和培養(yǎng)基添加物組成，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基命名為hpsm1，所述培養(yǎng)基添加物命名為hpsm2；
3、所述hpsm1包括l-丙氨酸、l-精氨酸、l-精氨酸·鹽酸、l-天冬氨酸、l-天冬酰胺·水、l-半胱氨酸·鹽酸、l-半胱氨酸·2鹽酸、l-谷氨酸、谷氨酰胺、l-組氨酸、l-羥脯氨酸、l-異亮氨酸、l-亮氨酸、l-賴氨酸、l-蛋氨酸、l-苯丙氨酸、l-脯氨酸、l-絲氨酸、l-蘇氨酸、l-色氨酸、l-酪氨酸、l-纈氨酸、谷胱甘肽、d-生物素、d-泛酸、氯化膽堿、葉酸、肌醇、煙酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黃素、鹽酸硫胺、維生素b12
4、所述hpsm2亞硒酸鈉、維生素c、肝素鈉、胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、fgf2-g3、tgfβ3、nrg1中的至少一種。
5、進(jìn)一步，所述hpsm1為l-丙氨酸、l-精氨酸、l-精氨酸·鹽酸、l-天冬氨酸、l-天冬酰胺·水、l-半胱氨酸·鹽酸、l-半胱氨酸·2鹽酸、l-谷氨酸、谷氨酰胺、l-組氨酸、l-羥脯氨酸、l-異亮氨酸、l-亮氨酸、l-賴氨酸、l-蛋氨酸、l-苯丙氨酸、l-脯氨酸、l-絲氨酸、l-蘇氨酸、l-色氨酸、l-酪氨酸、l-纈氨酸、谷胱甘肽、d-生物素、d-泛酸、氯化膽堿、葉酸、肌醇、煙酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黃素、鹽酸硫胺、維生素b12、硫辛酸、氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、磷酸二氫鈉、碳酸氫鈉、硝酸鈣、磷酸氫鈉、硫酸鎂、酚紅、硫酸亞鐵、硝酸鐵、硫酸銅、硫酸鋅、丙酮酸鈉、葡萄糖、硫酸卡那霉素、腐胺·2鹽酸、對(duì)氨基苯甲酸、亞油酸、次黃嘌呤、胸腺嘧啶的組合。
6、進(jìn)一步，所述hpsm2為亞硒酸鈉、維生素c、肝素鈉、胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、fgf2-g3、tgfβ3、nrg1的組合。
7、進(jìn)一步，所述hpsm1包括l-丙氨酸2.225mg/l、l-精氨酸50mg/l、l-精氨酸·鹽酸94.75mg/l、l-天冬氨酸8.325mg/l、l-天冬酰胺·水16.2525mg/l、l-半胱氨酸·鹽酸7.88mg/l、l-半胱氨酸·2鹽酸45.5725mg/l、l-谷氨酸8.675mg/l、谷氨酰胺549.65mg/l、l-組氨酸19.375mg/l、l-羥脯氨酸23.165mg/l、l-異亮氨酸5mg/l、l-亮氨酸65.935mg/l、l-賴氨酸68.225mg/l、l-蛋氨酸92.175mg/l、l-苯丙氨酸19.87mg/l、l-脯氨酸37.99mg/l、l-絲氨酸13.625mg/l、l-蘇氨酸55.525mg/l、l-色氨酸9.76mg/l、l-酪氨酸42.36mg/l、l-纈氨酸54.825mg/l、谷胱甘肽0.25mg/l、d-生物素0.05185mg/l、d-泛酸2.1825mg/l、氯化膽堿6.24mg/l、葉酸2.575mg/l、肌醇16.85mg/l、煙酰胺2.25925mg/l、吡哆醛2mg/l、吡哆醇0.2655mg/l、核黃素0.2595mg/l、鹽酸硫胺2.335mg/l、維生素b12?0.34125mg/l、硫辛酸0.0525mg/l、氯化鈉6599.75mg/l、氯化鉀355.9mg/l、氯化鎂30.515mg/l、磷酸二氫鈉62.5mg/l、碳酸氫鈉3000mg/l、硝酸鈣25mg/l、磷酸氫鈉235.51mg/l、硫酸鎂61.055mg/l、酚紅6.56mg/l、硫酸亞鐵0.2085mg/l、硝酸鐵0.005mg/l、硫酸銅0.000625mg/l、硫酸鋅0.216mg/l、丙酮酸鈉110mg/l、葡萄糖2500mg/l、硫酸卡那霉素100mg/l、腐胺·2鹽酸0.04025mg/l、對(duì)氨基苯甲酸0.25mg/l、亞油酸0.021mg/l、次黃嘌呤1.02mg/l、胸腺嘧啶0.1825mg/l中的至少一種。
8、進(jìn)一步，所述hpsm2包括亞硒酸鈉14μg/l、維生素c?64mg/l、肝素鈉100μg/l、胰島素19.4mg/l、轉(zhuǎn)鐵蛋白10.7mg/l、fgf2-g?340μg/l、tgfβ3?0.1μg/l、nrg1?0.1μg/l中的至少一種。
9、進(jìn)一步，所述hpsm1為l-丙氨酸2.225mg/l、l-精氨酸50mg/l、l-精氨酸·鹽酸94.75mg/l、l-天冬氨酸8.325mg/l、l-天冬酰胺·水16.2525mg/l、l-半胱氨酸·鹽酸7.88mg/l、l-半胱氨酸·2鹽酸45.5725mg/l、l-谷氨酸8.675mg/l、谷氨酰胺549.65mg/l、l-組氨酸19.375mg/l、l-羥脯氨酸23.165mg/l、l-異亮氨酸5mg/l、l-亮氨酸65.935mg/l、l-賴氨酸68.225mg/l、l-蛋氨酸92.175mg/l、l-苯丙氨酸19.87mg/l、l-脯氨酸37.99mg/l、l-絲氨酸13.625mg/l、l-蘇氨酸55.525mg/l、l-色氨酸9.76mg/l、l-酪氨酸42.36mg/l、l-纈氨酸54.825mg/l、谷胱甘肽0.25mg/l、d-生物素0.05185mg/l、d-泛酸2.1825mg/l、氯化膽堿6.24mg/l、葉酸2.575mg/l、肌醇16.85mg/l、煙酰胺2.25925mg/l、吡哆醛2mg/l、吡哆醇0.2655mg/l、核黃素0.2595mg/l、鹽酸硫胺2.335mg/l、維生素b12?0.34125mg/l、硫辛酸0.0525mg/l、氯化鈉6599.75mg/l、氯化鉀355.9mg/l、氯化鎂30.515mg/l、磷酸二氫鈉62.5mg/l、碳酸氫鈉3000mg/l、硝酸鈣25mg/l、磷酸氫鈉235.51mg/l、硫酸鎂61.055mg/l、酚紅6.56mg/l、硫酸亞鐵0.2085mg/l、硝酸鐵0.005mg/l、硫酸銅0.000625mg/l、硫酸鋅0.216mg/l、丙酮酸鈉110mg/l、葡萄糖2500mg/l、硫酸卡那霉素1本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種干細(xì)胞培養(yǎng)的體系，其特征在于，所述體系命名為hPSM，所述hPSM由基礎(chǔ)培養(yǎng)基和培養(yǎng)基添加物組成，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基命名為hPSM1，所述培養(yǎng)基添加物命名為hPSM2；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的體系，其特征在于，所述hPSM1包括L-丙氨酸2.225mg/L、L-精氨酸50mg/L、L-精氨酸·鹽酸94.75mg/L、L-天冬氨酸8.325mg/L、L-天冬酰胺·水16.2525mg/L、L-半胱氨酸·鹽酸7.88mg/L、L-半胱氨酸·2鹽酸45.5725mg/L、L-谷氨酸8.675mg/L、谷氨酰胺549.65mg/L、L-組氨酸19.375mg/L、L-羥脯氨酸23.165mg/L、L-異亮氨酸5mg/L、L-亮氨酸65.935mg/L、L-賴氨酸68.225mg/L、L-蛋氨酸92.175mg/L、L-苯丙氨酸19.87mg/L、L-脯氨酸37.99mg/L、L-絲氨酸13.625mg/L、L-蘇氨酸55.525mg/L、L-色氨酸9.76mg/L、L-酪氨酸42.36mg/L、L-纈氨酸54.825mg/L、谷胱甘肽0.25mg/L、D-生物素0.05
3.一種無(wú)血清無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括將權(quán)利要求1或2所述的hPSM2添加到已溶解于水的權(quán)利要求1或2所述的hPSM1中，混勻后調(diào)整pH值與滲透壓，最后滅菌獲得最終產(chǎn)物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述混勻溫度為25℃；
5.一種由權(quán)利要求3或4所述的制備方法制備出的無(wú)血清無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)基。
6.權(quán)利要求1或2所述的體系、權(quán)利要求3或4所述的制備方法在制備細(xì)胞培養(yǎng)基中的應(yīng)用；
7.權(quán)利要求1或2所述的體系、權(quán)利要求3或4所述的制備方法、權(quán)利要求5所述的無(wú)血清無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)基在培養(yǎng)干細(xì)胞中的應(yīng)用；
8.一種體外培養(yǎng)干細(xì)胞的方法，其特征在于，所述方法包括使用權(quán)利要求5所述的無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)干細(xì)胞的步驟；
9.一種培養(yǎng)干細(xì)胞的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權(quán)利要求1或2所述的體系，配制說(shuō)明書；
10.權(quán)利要求1或2所述的體系、權(quán)利要求3或4所述的制備方法在制備自動(dòng)化生產(chǎn)無(wú)血清無(wú)飼養(yǎng)層的系統(tǒng)或裝置中的應(yīng)用；
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種干細(xì)胞培養(yǎng)的體系，其特征在于，所述體系命名為hpsm，所述hpsm由基礎(chǔ)培養(yǎng)基和培養(yǎng)基添加物組成，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基命名為hpsm1，所述培養(yǎng)基添加物命名為hpsm2；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的體系，其特征在于，所述hpsm1包括l-丙氨酸2.225mg/l、l-精氨酸50mg/l、l-精氨酸·鹽酸94.75mg/l、l-天冬氨酸8.325mg/l、l-天冬酰胺·水16.2525mg/l、l-半胱氨酸·鹽酸7.88mg/l、l-半胱氨酸·2鹽酸45.5725mg/l、l-谷氨酸8.675mg/l、谷氨酰胺549.65mg/l、l-組氨酸19.375mg/l、l-羥脯氨酸23.165mg/l、l-異亮氨酸5mg/l、l-亮氨酸65.935mg/l、l-賴氨酸68.225mg/l、l-蛋氨酸92.175mg/l、l-苯丙氨酸19.87mg/l、l-脯氨酸37.99mg/l、l-絲氨酸13.625mg/l、l-蘇氨酸55.525mg/l、l-色氨酸9.76mg/l、l-酪氨酸42.36mg/l、l-纈氨酸54.825mg/l、谷胱甘肽0.25mg/l、d-生物素0.05185mg/l、d-泛酸2.1825mg/l、氯化膽堿6.24mg/l、葉酸2.575mg/l、肌醇16.85mg/l、煙酰胺2.25925mg/l、吡哆醛2mg/l、吡哆醇0.2655mg/l、核黃素0.2595mg/l、鹽酸硫胺2.335mg/l、維生素b12?0.34125mg/l、硫辛酸0.0525mg/l、氯化鈉6599.75mg/l、氯化鉀355.9mg/l、氯化鎂30.515mg/l、磷酸二氫鈉62.5mg/l、碳酸氫...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：劉文斌，徐榕，王志榮，賈立昆，金威，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：北京同立海源生物科技有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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