【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物檢測領域，尤其涉及激活試劑、顯色試劑、纖溶酶原活性檢測試劑和/或試劑盒及其應用。
技術介紹
1、纖維蛋白溶解系統是凝血系統的重要組成部分，對于維持血液的流動性和血管的完整性起著至關重要的作用。纖溶酶原(以下簡稱plg)是溶解纖維蛋白和溶解血栓過程中關鍵的酶原前體之一，通過纖溶酶原激活劑激活而形成纖溶酶，進而發揮纖溶和栓溶作用。生理狀態下，纖溶酶原是由肝臟合成的，以兩種形式存在于人體內，即以谷氨酸為啟始氨基酸的谷氨酸型纖溶酶原(glu-plg)和以賴氨酸為啟始氨基酸的賴氨酸型纖溶酶原(lys-plg)，是由791個氨基酸組成的單鏈絲氨酸蛋白酶，相對分子量為84000～92000，包括7個結構域：n-端多肽區、5個環狀結構域、絲氨酸蛋白酶結構域。plg激活因子分為兩種，一種是內源性激活因子，包括組織型纖溶酶原激活劑(t-pa)、尿激酶型纖溶酶原激活劑，是存在于血液中并切割plg的arg561～val562肽鍵生成由二硫鍵連接的一條重鏈和一條輕鏈的蛋白酶，即雙鏈形式的具有活性的纖溶酶，這種激活因子極易被纖維蛋白凝塊所吸附，不利于血栓的溶解。另一種是外源性激活因子，如鏈激酶、葡激酶等，是有細菌產生的，它們的激活機理與t-pa不同。外源性激活因子本身不是蛋白酶，不裂解切割纖溶酶原肽鏈，而是必須與plg以1:1分子比結合成復合物，兩者結合速度迅速且穩定，進而將plg活性位點暴露出來，轉化為具有活性的纖溶酶。纖溶酶在溶解纖維蛋白和溶栓等方面發揮著重要作用。
2、研究表明，纖溶酶原缺乏包括遺傳性缺乏和獲得性缺乏。遺
3、目前檢測纖溶酶原的方法有兩種，一種為定量檢測plg抗原的含量，如免疫分析法，此法方法比較特異和靈敏，但是操作繁瑣、耗時，而且無法測定ii型plg缺乏；另一種為定量檢測plg的活性，如發色底物法。目前，市場銷售的同類產品試劑盒均采用發色底物法測定血漿plg活性，此法具有靈敏度高、準確性好、檢測時間短等特點，且能夠適用于多種自動化分析儀器，被醫院認可為檢測纖溶酶原活性的首選篩查實驗。此外，此類產品試劑盒均為進口產品，且價格昂貴，限制了此項目在臨床的廣泛應用。
4、發色底物法的原理：纖溶酶原以無活性的酶原形式循環于血漿，在纖溶酶原激活劑激活下，血漿中纖溶酶原被激活，轉化為具有活性的纖溶酶，纖溶酶作用于特異的發色底物，將底物裂解產生4-硝基苯胺(4-nitroaniline，pna)顯色基團，4-硝基苯胺量和405nm處吸光度的變化呈正相關，所以產生的4-硝基苯胺的量和纖溶酶原活性成正相關。因此，利用測量405nm處吸光度的變化，可計算出血漿中纖溶酶原的活性水平。
5、為了解決此項目難以在醫院推廣應用的問題，基于發色底物法，開發一種纖溶酶原活性測定試劑盒及其制備方法尤為重要。
技術實現思路
1、有鑒于此，本專利技術提供了激活試劑、顯色試劑、纖溶酶原活性檢測試劑和/或試劑盒及其應用。本專利技術試劑盒組成簡單，易于制備，生產成本較低。本專利技術試劑盒針對鏈激酶和發色底物在水溶液中通常不穩定，不能長時間保存的問題，采用特定的穩定劑，能夠有效地提高鏈激酶和發色底物在水溶液中的穩定性，并且以干粉型外觀形態存在，將更有利于增強其穩定性。
2、為了實現上述專利技術目的，本專利技術提供以下技術方案：
3、本專利技術提供了激活試劑，包括：
4、
5、
6、在本專利技術的一些實施方案中，上述激活試劑，包括：
7、
8、在本專利技術的一些實施方案中，上述激活試劑中，濃度為終濃度。
9、本專利技術還提供了顯色試劑，包括：
10、發色底物???????????????????????????????????????????1.0～3.0mg/ml
11、甘露醇?????????????????????????????????????????????5.0～9.0w/v％。
12、在本專利技術的一些實施方案中，上述顯色試劑，包括：
13、發色底物?????????????????????????????????2.0mg/ml或3.0mg/ml
14、甘露醇???????????????????????????????????5.0w/v％、7.0w/v％或9.0w/v％。
15、在本專利技術的一些實施方案中，上述顯色試劑中，濃度為終濃度。
16、本專利技術還提供了纖溶酶原的活性的檢測試劑，包括：上述激活試劑和/或上述顯色試劑。
17、在本專利技術的一些實施方案中，上述檢測試劑，還包括：50～100mmol/lhepes-naoh的緩沖液。
18、在本專利技術的一些實施方案中，上述檢測試劑，還包括：30mmol/l、50mmol/l、80mmol/l或100mmol/l?hepes-naoh的緩沖液。
19、在本專利技術的一些實施方案中，上述檢測試劑中，所述緩沖液的ph值為7.2～8.0。
20、在本專利技術的一些實施方案中，上述檢測試劑中，所述緩沖液的ph值為7.2。
21、在本專利技術的一些實施方案中，上述檢測試劑，包括：
22、
23、
24、和/或
25、發色底物??????????????????????????????????????????1.0～3.0mg/ml
26、甘露醇????????????????????????????????????????????5.0～9.0w/v％
27、30mmol/l緩沖液????????????????????????????????????余量。
28、本專利技術還提供了上述檢測試劑的制備方法，取所述激活試劑和所述顯色試劑分別與所述緩沖液混合后，冷凍干燥，獲得所述檢測試劑。
29、本專利技術還提供了上述激活試劑、上述顯色試劑、上述檢測試劑和/或上述制備方法獲得的檢測試劑在制備檢測纖溶酶原活性的試劑盒中的應用。
30、在本專利技術的一些實施方案中，上述應用中，所述檢測包括如下步驟：取預處理的樣本與所述激活試劑混合后，再與所述顯色試劑混合，顯色反應后，根據od值，獲得所述纖溶酶原的活性。
31、在本專利技術的一些實施方案中本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.激活試劑，其特征在于，包括：
2.顯色試劑，其特征在于，包括：
3.纖溶酶原活性的檢測試劑，其特征在于，包括：如權利要求1所述的激活試劑和/或如權利要求2所述的顯色試劑。
4.如權利要求3所述的檢測試劑，其特征在于，還包括：30～100mmol/L?HEPES-NaOH的緩沖液。
5.如權利要求4所述的檢測試劑的制備方法，其特征在于，取所述激活試劑和所述顯色試劑分別與所述緩沖液混合后，冷凍干燥，獲得所述檢測試劑。
6.如權利要求1所述的激活試劑、如權利要求2所述的顯色試劑、如權利要求3或4所述的檢測試劑和/或如權利要求5所述制備方法獲得的檢測試劑在制備檢測纖溶酶原活性的試劑盒中的應用。
7.如權利要求6所述的應用，其特征在于，所述檢測包括如下步驟：取預處理的樣本與所述激活試劑混合后，再與所述顯色試劑混合，顯色反應后，根據OD值，獲得所述纖溶酶原的活性。
8.如權利要求7所述的應用，其特征在于，所述激活試劑與所述顯色試劑的體積比為：1:1。
9.如權利要求7或8所述的應用，其特征在于
10.纖溶酶原活性檢測試劑盒，其特征在于，包括：如權利要求1所述的激活試劑、如權利要求2所述的顯色試劑、如權利要求3或4所述的檢測試劑和/或如權利要求5所述制備方法獲得的檢測試劑以及可接受的助劑或載體。
...【技術特征摘要】
1.激活試劑，其特征在于，包括：
2.顯色試劑，其特征在于，包括：
3.纖溶酶原活性的檢測試劑，其特征在于，包括：如權利要求1所述的激活試劑和/或如權利要求2所述的顯色試劑。
4.如權利要求3所述的檢測試劑，其特征在于，還包括：30～100mmol/l?hepes-naoh的緩沖液。
5.如權利要求4所述的檢測試劑的制備方法，其特征在于，取所述激活試劑和所述顯色試劑分別與所述緩沖液混合后，冷凍干燥，獲得所述檢測試劑。
6.如權利要求1所述的激活試劑、如權利要求2所述的顯色試劑、如權利要求3或4所述的檢測試劑和/或如權利要求5所述制備方法獲得的檢測試劑在制備檢測纖溶酶原活性的試劑盒中的應用。<...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張瀟鐿，徐麗秀，劉鵬，穆文超，
申請(專利權)人：創凝生物技術北京有限公司，
類型：發明
國別省市：
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