本發(fā)明專利技術(shù)提供一種用于時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物的噴膜保護液及其應(yīng)用，所述保護液包括以下濃度的組分：0.05%?1%的小分子封閉劑、1%?15%的穩(wěn)定劑、0.1%?5%的表面活性劑、0.1%?0.5%的信號增強劑，余量為pH在7.0?8.5的緩沖液。該保護液成分簡單、用量小，擺脫了對結(jié)合墊與樣品墊種類以及阻斷劑和惰性蛋白的依賴；該保護液有助于乳膠在保存體系中處于均一分散的狀態(tài)，有助于精密度的改善；同時還能使噴涂在結(jié)合墊上的乳膠很好地釋放，降低結(jié)合墊上的乳膠殘留，在層析過程中，展層均勻，基線平整，大幅提升精密度與準(zhǔn)確度；該保護液能夠保護乳膠表面的抗體活性，且乳膠噴膜后，有助于提升噴膜的穩(wěn)定性和抗破壞性；該保護液還能夠抗樣本基質(zhì)干擾，樣本適用范圍更加廣泛。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及醫(yī)學(xué)免疫診斷，特別是涉及一種用于時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物的噴膜保護液及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、時間分辨熒光免疫分析法是上世紀(jì)70年代由芬蘭的soini和hemmia提出的一種新型的檢測手段，與化學(xué)發(fā)光、電化學(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)并稱為三大超靈敏檢測技術(shù)，在食品檢測、醫(yī)學(xué)臨床檢測、環(huán)境檢測以及生物學(xué)科研檢測等方面廣泛應(yīng)用。
2、基于時間分辨熒光納米微球的免疫層析快速定量檢測技術(shù)，因其具有靈敏度高、定量范圍寬、準(zhǔn)確度和精密度高、樣本適應(yīng)性強、操作快速簡便等優(yōu)點，被業(yè)界譽為第四代熒光定量免疫層析技術(shù)中“皇冠上的明珠”，正快速替代膠體金和酶聯(lián)免疫等傳統(tǒng)快速檢測產(chǎn)品，引領(lǐng)快速檢測從粗略定性到準(zhǔn)確定量的升級換代。
3、時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物是最核心的組分，其噴涂于結(jié)合墊上的工藝好壞將對產(chǎn)品的準(zhǔn)確度、精確度、穩(wěn)定性和抗破壞性產(chǎn)生直接的影響，而這其中，時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物的噴膜保護液所采用的配方非常關(guān)鍵。不適合的保護液配方可能會產(chǎn)生以下問題：①無法很好的將微球進行非常均勻的分散，導(dǎo)致測定結(jié)果精密度差；②干燥后釋放不均勻、不干凈，導(dǎo)致基線不平，測定結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度均差；③對不同樣品基質(zhì)的抗干擾能力差，導(dǎo)致基質(zhì)效應(yīng)明顯，樣品適用范圍窄；④保護能力差，時間分辨熒光納米微球抗體標(biāo)記物噴涂于結(jié)合墊后，一般需要在37℃-45℃的環(huán)境中干燥12-24h，不合適的保護液配方可能導(dǎo)致在干燥過程中抗體失活，效價下降明顯，同時也會影響產(chǎn)品的長期穩(wěn)定性；⑤不適合的保護液會抑制抗原抗體反應(yīng)，使效價降低。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)的缺點，本專利技術(shù)的目的在于提供一種用于時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物的噴膜保護液，用于解決現(xiàn)有技術(shù)中噴膜保護液的準(zhǔn)確度、精確度、穩(wěn)定性和抗破壞性差的問題，同時，本專利技術(shù)還將提供一種時間分辨熒光免疫層析試紙條。
2、為實現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，
3、本專利技術(shù)的第一方面，提供一種用于時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物的噴膜保護液，所述保護液包括以下濃度（體積或質(zhì)量體積比）的組分：0.05%-1%的小分子封閉劑、1%-15%的穩(wěn)定劑、0.1%-5%的表面活性劑、0.1%-0.5%的信號增強劑，余量為ph在7.0-8.5的緩沖液。
4、采用上述技術(shù)方案，所述保護液有助于時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物（簡稱：乳膠）在保存體系中處于均一分散的狀態(tài)，呈現(xiàn)膠體狀，不易聚集，有助于精密度的改善；同時還能使噴涂在結(jié)合墊上的乳膠很好地釋放，降低結(jié)合墊上的乳膠殘留，在層析過程中，展層均勻，熒光基線平整，對精密度與準(zhǔn)確度都大有幫助；該保護液還能夠抗樣本基質(zhì)干擾，樣本適用范圍更加廣泛；最后保護液有助于乳膠的噴膜穩(wěn)定性，在高溫的老化下，乳膠上標(biāo)記的抗體依舊保持高活性、高性能。
5、進一步的，所述緩沖液用于保持保護液在一定的ph范圍，保證乳膠的表面價電荷，保護抗體活性，還能緩沖一些特殊樣本的ph。具體的，所述緩沖液包括hepes、硼酸-硼酸鈉、tris-hcl中的一種或幾種的組合。其中，所述緩沖液的濃度為40mm-60mm，優(yōu)選為50mm。
6、進一步，所述小分子封閉劑用于封閉微球表面未結(jié)合的羧基位點以及偶聯(lián)的抗體上的部分羧基位點，減少乳膠聚集帶來的顆粒不均，以及抗原抗體反應(yīng)過程中出現(xiàn)的跳值等，也可替代牛血清白蛋白等惰性蛋白起到邊層析邊封閉，擺脫了對蛋白類物質(zhì)的依賴，降低了成本。具體的，所述小分子封閉劑包括甘氨酸、賴氨酸中的一種或兩種的組合。
7、進一步的，所述穩(wěn)定劑用于消除單體間相互作用，降低非共價二聚體形成，并起到穩(wěn)定蛋白單體形態(tài)及蛋白構(gòu)象的作用，還能起到促進乳膠復(fù)溶與降低乳膠殘留，延長干燥后乳膠的噴膜穩(wěn)定性。具體的，所述穩(wěn)定劑包括異丙醇、甘露醇中的一種或兩種的組合。
8、進一步，所述表面活性劑用于提高親水性，有助于乳膠釋放的均一，防止抗原抗體等蛋白質(zhì)在nc膜表面吸附。具體的，所述表面活性劑包括吐溫20、ohodasurf?on-870、igepal?ca210的一種或幾種的組合。
9、進一步的，所述信號增強劑用于抑制蛋白質(zhì)的非特異性吸附，增強蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，進而大大提高效價。具體的，所述信號增強劑包括po-5。
10、于本專利技術(shù)優(yōu)選的實施方式中，所述保護液包括以下濃度（體積或質(zhì)量體積比）的組分：0.08%的小分子封閉劑、13%的穩(wěn)定劑、1%的表面活性劑、0.3%的信號增強劑，余量為ph在7.5的緩沖液。
11、本專利技術(shù)的第二方面，提供一種時間分辨熒光免疫層析試紙條，包括：底板，和沿層析方向依次固定于所述底板上的樣品墊、結(jié)合墊、nc膜和吸水墊，且所述樣品墊、結(jié)合墊、nc膜和吸水墊順次接觸；所述結(jié)合墊上噴涂有上述保護液，所述保護液中包含時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物，所述時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物為偶聯(lián)了抗體的時間分辨熒光微球。
12、進一步的，所述時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物包括偶聯(lián)了嘔吐毒素抗體、黃曲霉毒素b1抗體或玉米赤霉烯酮抗體等的時間分辨熒光微球。
13、進一步的，所述保護液的制備方法具體包括以下步驟：
14、s1、按比例稱取穩(wěn)定劑和信號增強劑，加入緩沖液中；
15、s2、再取表面活性劑加入混合溶液，攪拌溶解；
16、s3、再加入小分子封閉劑混合均勻；
17、s4、最后將時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物加入，混合均勻，得到配置好的保護液，保存?zhèn)溆谩?/p>
18、在步驟s2中，攪拌溶解的時間至少1小時。
19、在步驟s4中，加入的時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物的濃度（體積或質(zhì)量體積比）為0.01％～2％。
20、在步驟s4中，保護液的保存溫度為2℃-8℃，保存期限為7-15天。
21、進一步的，所述噴涂的具體步驟包括：將配制好的保護液噴涂于未處理的結(jié)合墊上，37℃-45℃的環(huán)境中干燥12-24h，得到所述結(jié)合墊。其中，所述處理液的噴涂量為1.5~2.0μl/cm。所述結(jié)合墊的保存溫度為15℃-30℃，保存期限為1-2年。
22、現(xiàn)有的時間分辨熒光免疫層析試紙條，需要篩選結(jié)合墊、樣品墊的原料，來改善免疫層析過程中的展層均一性差的問題，甚至需要加入一些阻斷劑、惰性蛋白等來改善樣本基質(zhì)效應(yīng)，且標(biāo)記后的乳膠，需要當(dāng)天標(biāo)完立馬噴涂，不然乳膠易聚沉，無法做到長時間保存。
23、但是，本專利技術(shù)無需要依賴墊紙材料、阻斷劑、惰性蛋白等，通過配方成分及配比的調(diào)整，使標(biāo)記后的乳膠在保護液中可以維持7-15天，在噴涂于結(jié)合墊后可以37℃-45℃維持2-3個月、或是15℃-30℃維持1-2年，不影響抗體的活性。同時，本專利技術(shù)的保護液中的成分簡單、廉價、安全，降低了產(chǎn)品的成本。
24、如上所述，本專利技術(shù)的用于時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物的噴膜保護液及其應(yīng)用，具有以下有益效果：
25、1、本專利技術(shù)的噴膜保護液成分簡單、廉價、環(huán)保，用量小，配制簡單、批間差小，且擺脫了對結(jié)合墊與樣品墊種類以及阻本文檔來自技高網(wǎng)
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【技術(shù)保護點】
1.一種用于時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物的噴膜保護液，其特征在于，所述保護液包括以下濃度的組分：0.05%-1%的小分子封閉劑、1%-15%的穩(wěn)定劑、0.1%-5%的表面活性劑、0.1%-0.5%的信號增強劑，余量為pH在7.0-8.5的緩沖液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物的噴膜保護液，其特征在于：所述緩沖液包括HEPES、硼酸-硼酸鈉、Tris-Hcl中的一種或幾種的組合。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物的噴膜保護液，其特征在于：所述緩沖液的濃度為40mM-60mM。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物的噴膜保護液，其特征在于：所述小分子封閉劑包括甘氨酸、賴氨酸中的一種或兩種的組合。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物的噴膜保護液，其特征在于：所述穩(wěn)定劑包括異丙醇、甘露醇中的一種或兩種的組合。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物的噴膜保護液，其特征在于：所述表面活性劑包括吐溫20、OHODASURF?ON-870、IGEPAL?CA210的一種或幾種的組合。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物的噴膜保護液，其特征在于：所述信號增強劑包括PO-5。
8.一種時間分辨熒光免疫層析試紙條，其特征在于，包括：底板，和沿層析方向依次固定于所述底板上的樣品墊、結(jié)合墊、NC膜和吸水墊，且所述樣品墊、結(jié)合墊、NC膜和吸水墊順次接觸；所述結(jié)合墊上噴涂有如權(quán)利要求1-7任一項所述的用于時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物的噴膜保護液，所述保護液中包含時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物，所述時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物為偶聯(lián)了抗體的時間分辨熒光微球。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述時間分辨熒光免疫層析試紙條，其特征在于：所述時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物包括偶聯(lián)了嘔吐毒素抗體、黃曲霉毒素B1抗體或玉米赤霉烯酮抗體的時間分辨熒光微球。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述時間分辨熒光免疫層析試紙條，其特征在于：所述保護液的制備方法具體包括以下步驟：
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【技術(shù)特征摘要】
1.一種用于時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物的噴膜保護液，其特征在于，所述保護液包括以下濃度的組分：0.05%-1%的小分子封閉劑、1%-15%的穩(wěn)定劑、0.1%-5%的表面活性劑、0.1%-0.5%的信號增強劑，余量為ph在7.0-8.5的緩沖液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物的噴膜保護液，其特征在于：所述緩沖液包括hepes、硼酸-硼酸鈉、tris-hcl中的一種或幾種的組合。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物的噴膜保護液，其特征在于：所述緩沖液的濃度為40mm-60mm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物的噴膜保護液，其特征在于：所述小分子封閉劑包括甘氨酸、賴氨酸中的一種或兩種的組合。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物的噴膜保護液，其特征在于：所述穩(wěn)定劑包括異丙醇、甘露醇中的一種或兩種的組合。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于時間分辨熒光微球抗體標(biāo)記物的噴膜保護液，...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：肖理文，談婷，丁麗，趙皖，王海宇，
申請(專利權(quán))人：南京微測生物科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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