【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于化妝品檢測，特別涉及一種化妝品中吡咯里西啶生物堿的檢測方法。
技術介紹
1、吡咯里西啶生物堿(pas)是一類植物中天然存在的生物堿，是已知最有效的天然植物性防御毒素之一，被用于抵御昆蟲、食草動物等侵害，廣泛分布于6000多種植物中，并可經食物鏈傳遞。在我國藥典和《神農本草》中收錄的紫菀、款冬花、紫草、菊、三七等常用的中草藥中也含有pas。近年來，pas及其相應的氮氧化物(pan-oxides，panos)已被證明表現出多種毒理學效應，包括肝毒性、遺傳毒性和致癌性等。我國《化妝品安全技術規范》(2021版)規定了菊科千里光屬植物為化妝品禁用原料，菊科千里光屬植物的風險來源主要是pas，主要包括千里光菲靈、千里光寧、野百合堿、克氏千里光寧堿、倒千里光堿、立可沙明堿、天芥菜堿、毛果天芥菜堿、倒千里光裂堿、藍薊定等10種吡咯里西啶生物堿。隨著我國和世界其他國家草藥類化妝品的發展，一些草藥會將pas帶入到化妝品中從而對消費者帶來安全隱患。
2、然而，現有的吡咯里西啶生物堿的檢測方法多用于食物和植物等中的吡咯里西啶生物堿的檢測，pas在化妝品中的檢測方法還尚未見報到。且目前吡咯里西啶生物堿的檢測標準，也只有針對食品和植物中吡咯里西啶生物堿的檢測標準方法，例如深圳市分析測試協會團體標準t/sata035-2022《蜂蜜中21種生物堿的測定液相色譜—串聯質譜法》檢測了21種生物堿，其中千里光菲靈和倒千里光堿為吡咯里西啶生物堿；ny/t2769-2015《牧草中15種生物堿的測定液相色譜-串聯質譜法》檢測的吡咯里西啶生物
3、故而，獲得一種化妝品中吡咯里西啶生物堿的檢測方法是化妝品檢測領域的迫切需要研究的方向之一。
技術實現思路
1、為了解決上述技術問題，本專利技術提供一種化妝品中吡咯里西啶生物堿的檢測方法，該方法首次實現了多種基質化妝品中吡咯里西啶生物堿的檢測，且該方法具有分離度好，靈敏度、準確度和精密度高的優點。
2、為了實現上述專利技術目的，本專利技術提供以下技術方案：
3、本專利技術提供一種化妝品中吡咯里西啶生物堿的檢測方法，包括以下步驟：
4、(1)提取：稱取待測化妝品樣品，加入提取液，混合均勻，離心，取上清液；
5、(2)凈化：上清液用預處理后的固相萃取柱凈化，利用超純水和甲醇淋洗，用氨水甲醇溶液洗脫，然后利用氮氣吹干洗脫液得到待復溶樣品，將待復溶樣品溶解后過濾，得到待測液；
6、(3)檢測：用液相色譜-串聯質譜儀檢測待測液中的吡咯里西啶生物堿。
7、本專利技術提供的化妝品中吡咯里西啶生物堿(千里光菲靈、千里光寧、野百合堿、克氏千里光寧堿、倒千里光堿、立可沙明堿、天芥菜堿、毛果天芥菜堿、倒千里光裂堿、藍薊定)的檢測方法，樣品經提取液提取，經過固相萃取柱凈化后，再后處理得待測液，然后上機檢測。本專利技術統計結果表明，該檢測方法的平均回收率介于75-110％，相對標準偏差(rsd)標準偏差均小于10％，均滿足sn/t0001-2016的要求，且千里光菲靈、千里光寧、野百合堿、克氏千里光寧堿、倒千里光堿、立可沙明堿、天芥菜堿、毛果天芥菜堿、倒千里光裂堿、藍薊定10種吡咯里西啶生物堿的檢出限(lod)均為0.007mg/kg，定量限(loq)均為0.02mg/kg。
8、本專利技術首次建立進出口多種基質化妝品中吡咯里西啶生物堿的測定標準方法，填補《化妝品安全技術規范》中含該類化妝品禁用組分檢測方法的空白，為保障消費者安全，為進出口化妝品監管把關提供技術支持。
9、本專利技術提供的方法對吡咯里西啶生物堿的檢測方法的分離度好，靈敏度、準確度和精密度高，且前處理方法簡單、快速，該方法可用于化妝品中吡咯里西啶生物堿的風險評估和篩查監測，具有較廣的應用前景。
10、進一步地，所述固相萃取柱為混合型陽離子固相萃取柱(mcx，3ml/60mg)。
11、在本專利技術中，采用混合型陽離子固相萃取柱(mcx，3ml/60mg)進行凈化時，不同基質化妝品的吡咯里西啶生物堿的回收率均介于75.5％～106％，回收效果好。
12、進一步地，當化妝品樣品為非霜類樣品時，所述步驟(1)的具體提取步驟為：稱取待測化妝品樣品，加入體積分數為0.5％的甲酸乙腈，振蕩2min-2.5min，使樣品與提取液充分混勻，超聲提取10-20min，于9000-11000r/min下離心5min，取上清液。
13、進一步地，當化妝品樣品為霜類樣品時，所述步驟(1)的具體提取步驟為：稱取待測化妝品樣品，加入體積分數為0.5％的甲酸乙腈，同時加入1g氯化鈉，振蕩2min-2.5min，使樣品與提取液充分混勻，超聲提取10-20min，于9000-11000r/min下離心5min，取上清液。
14、當樣品為霜類樣品時，單純使用提取液可能無法將樣品充分分散，且霜類樣品容易乳化導致回收率下降，而分散劑穿透能力更強，會使樣品更為均勻，可以破乳，選擇氯化鈉使溶液分散，再使用提取液提取的方法，可以優化霜類化妝品中10種化合物的回收率。
15、更進一步地，所述步驟(1)的具體提取步驟為：稱取1.0g(精確到0.01g)待測化妝品樣品置于50ml離心管中，加入10ml體積分數0.5％的甲酸乙腈(霜類樣品需要另外加入1g氯化鈉)，渦旋2min，超聲提取20min，以10000r/min轉速離心5min，取上清液，待凈化。
16、進一步地，所述步驟(2)中預處理的固相萃取柱為依次采用甲醇和濃度為0.1mol/l鹽酸活化的固相萃取柱。
17、進一步地，所述步驟(2)中氨化甲醇為體積比為5:95的氨水和甲醇的混合物。
18、進一步地，所述步驟(2)中，使待復溶樣品溶解的溶液為1ml的體積分數10％甲醇水溶液。
19、更進一步地，所述步驟(2)的具體凈化步驟為：將固相萃取柱依次用3ml甲醇和3ml濃度為0.1mol/l鹽酸活化，然后把全部上清液過柱，再依次用3ml水和3ml甲醇淋洗，再用5ml氨水甲醇(5:95，v/v)洗脫，收集洗脫液，洗脫液于45℃水浴中氮氣吹干，加入1ml的10％甲醇水溶液復溶，混合均勻后，過0.22μm濾膜后，得到凈化液。
20、進一步地，所述液相色譜-串聯質譜儀的檢測條件為：色譜條件為：色譜柱：c18色譜柱(2.70μm，150mm×3.0mm)；流動本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種化妝品中吡咯里西啶生物堿的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述化妝品中吡咯里西啶生物堿的檢測方法，其特征在于，所述吡咯里西啶生物堿為千里光菲靈、千里光寧、野百合堿、克氏千里光寧堿、倒千里光堿、立可沙明堿、天芥菜堿、毛果天芥菜堿、倒千里光裂堿、藍薊定的至少一種。
3.根據權利要求1所述化妝品中吡咯里西啶生物堿的檢測方法，其特征在于，所述固相萃取柱為混合型陽離子固相萃取柱。
4.根據權利要求1所述化妝品中吡咯里西啶生物堿的檢測方法，其特征在于，當化妝品樣品為非霜類樣品時，所述步驟(1)的具體提取步驟為：稱取待測化妝品樣品，加入體積分數為0.5％的甲酸乙腈，振蕩2min-2.5min，使樣品與提取液充分混勻，超聲提取10-20min，于9000-11000r/min下離心5min，取上清液。
5.根據權利要求1所述化妝品中吡咯里西啶生物堿的檢測方法，其特征在于，當化妝品樣品為霜類樣品時，所述步驟(1)的具體提取步驟為：稱取待測化妝品樣品，加入體積分數為0.5％的甲酸乙腈，同時加入1g氯化鈉，振蕩2min-2
6.根據權利要求1所述化妝品中吡咯里西啶生物堿的檢測方法，其特征在于，所述步驟(2)中預處理的固相萃取柱為依次采用甲醇和濃度為0.1mol/L鹽酸進行活化的固相萃取柱。
7.根據權利要求1所述化妝品中吡咯里西啶生物堿的檢測方法，其特征在于，所述步驟(2)中，所述氨化甲醇為體積比為5:95的氨水和甲醇的混合物。
8.根據權利要求1所述化妝品中吡咯里西啶生物堿的檢測方法，其特征在于，所述步驟(2)中，使待復溶樣品溶解的溶液為1mL體積分數為10％的甲醇水溶液。
9.根據權利要求1所述化妝品中吡咯里西啶生物堿的檢測方法，其特征在于，所述液相色譜-串聯質譜儀的檢測條件為：色譜條件為：色譜柱：C18色譜柱(2.70μm，150mm×3.0mm)；流動相A：
10.根據權利要求1所述化妝品中吡咯里西啶生物堿的檢測方法，其特征在于，所述質譜條件為：
...【技術特征摘要】
1.一種化妝品中吡咯里西啶生物堿的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述化妝品中吡咯里西啶生物堿的檢測方法，其特征在于，所述吡咯里西啶生物堿為千里光菲靈、千里光寧、野百合堿、克氏千里光寧堿、倒千里光堿、立可沙明堿、天芥菜堿、毛果天芥菜堿、倒千里光裂堿、藍薊定的至少一種。
3.根據權利要求1所述化妝品中吡咯里西啶生物堿的檢測方法，其特征在于，所述固相萃取柱為混合型陽離子固相萃取柱。
4.根據權利要求1所述化妝品中吡咯里西啶生物堿的檢測方法，其特征在于，當化妝品樣品為非霜類樣品時，所述步驟(1)的具體提取步驟為：稱取待測化妝品樣品，加入體積分數為0.5％的甲酸乙腈，振蕩2min-2.5min，使樣品與提取液充分混勻，超聲提取10-20min，于9000-11000r/min下離心5min，取上清液。
5.根據權利要求1所述化妝品中吡咯里西啶生物堿的檢測方法，其特征在于，當化妝品樣品為霜類樣品時，所述步驟(1)的具體提取步驟為：稱取待測化妝品樣品，加入體積分數為0.5％的甲酸乙腈，同...
【專利技術屬性】
技術研發人員：曾廣豐，謝建軍，侯穎燁，張嘉俊，王璐，蔡翠玲，王志元，董潔，肖可茵，章海濤，
申請(專利權)人：廣州海關技術中心，
類型：發明
國別省市：
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