【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于植株組織培養，具體涉及一種本生煙草葉片愈傷組織誘導及懸浮細胞培養方法。
技術介紹
1、本生煙(nicotianabenthamiana)原產于澳洲，與辣椒、番茄、馬鈴薯及栽培煙草等一樣，歸屬于茄科，因其在植物-微生物互作，鑒定蛋白質相互作用及亞細胞定位，代謝調控，疫苗生產及合成生物學方面的廣泛應用，本生煙被認為是除擬南芥之外的重要模式植物。本生煙是植物生物學研究中的重要研究對象，具有易于遺傳操作的特點，其懸浮細胞也被廣泛應用于各種植物生理學、植物分子生物學以及植物細胞生物學等領域的研究中。
2、目前報道中，本生煙草愈傷組織誘導和懸浮細胞培養均采用了細胞分離素與細胞生長素配合的培養基，需用兩種或兩種以上的植物激素，還需額外加入肌醇和酪蛋白水解物等功能性組分，以上培養基配置麻煩且成本更高。同時研究指出，培養基中不同激素種類和相同激素不同用量的添加對愈傷組織誘導和懸浮細胞的培養均有顯著影響。對于使用激素種類少且易配置的本生煙草葉片愈傷組織誘導及懸浮細胞培養的培養基并未見相關報道。
技術實現思路
1、本專利技術提供了一種本生煙草葉片愈傷組織誘導及懸浮細胞培養方法，該方法獲得的本生煙草懸浮細胞具有分散性良好、生長快速、細胞呈現鏈條狀等特點，可用于植物生理學、細胞學、分子生物學研究。
2、為解決上述技術問題，本專利技術提供了以下技術方案：
3、本專利技術提供一種本生煙草葉片愈傷組織誘導及懸浮細胞培養方法，包括以下步驟：將本生煙草葉片接種至誘導培
4、優選的，所述本生煙草葉片為本生煙草無菌苗葉片。
5、優選的，所述本生煙草葉片需剪切成0.5～3cm2的小塊。
6、優選的，本生煙草葉片接種至誘導培養基中的培養溫度為25～30℃，相對濕度為55～65％，黑暗培養，培養28～32天。
7、優選的，在獲得愈傷組織后進行繼代培養，繼代培養周期為28～32天/次，繼代1～3次。
8、優選的，選擇形態疏松、生長狀態良好的愈傷組織接種至懸浮培養基中。
9、優選的，于懸浮培養基中的培養溫度為25～30℃，相對濕度為55～65％，轉速100～120rpm，黑暗培養，培養15～20天。
10、優選的，在獲得懸浮細胞后可進行繼代培養，懸浮細胞的繼代培養周期為15～20天/次，繼代1～3次。
11、本專利技術提供所述的培養方法獲得的懸浮細胞在植物生理學、細胞學、分子生物學研究中的應用。
12、與現有技術相比，本專利技術具有如下有益效果：
13、本專利技術公開了一種本生煙草葉片愈傷組織誘導及懸浮細胞培養方法，此方法相比其他以本生煙草為來源的懸浮細胞創制方法，具有操作簡單、維護成本低的特點。該專利技術方法獲得的懸浮細胞生長周期短且生長量大，獲得的懸浮細胞可應用于多個用途，例如生理學、細胞學、生物化學、發育生物學及遺傳學、分子生物學的研究，大大縮短實驗材料生長時間。
14、本專利技術所述的誘導培養基對本生煙草無菌葉片誘導率高，且愈傷組織形態好，無褐化現象；所述懸浮培養基中加入適量的vb1后，培養的懸浮細胞生長狀態良好，穩定性高，細胞分散性好且呈現出鏈狀，細胞核清晰可見。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種本生煙草葉片愈傷組織誘導及懸浮細胞培養方法，其特征在于，包括以下步驟：將本生煙草葉片接種至誘導培養基中培養，形成愈傷組織；將愈傷組織接種至懸浮培養基中培養，得懸浮細胞；
2.如權利要求1所述的培養方法，其特征在于，所述本生煙草葉片為本生煙草無菌苗葉片。
3.如權利要求1所述的培養方法，其特征在于，所述本生煙草葉片需剪切成0.5～3cm2的小塊。
4.如權利要求1所述的培養方法，其特征在于，本生煙草葉片接種至誘導培養基中的培養溫度為25～30℃，相對濕度為55～65％，黑暗培養，培養28～32天。
5.如權利要求1所述的培養方法，其特征在于，在獲得愈傷組織后可進行繼代培養，繼代培養周期為28～32天/次，繼代1～3次。
6.如權利要求1所述的培養方法，其特征在于，選擇形態疏松、生長狀態良好的愈傷組織接種至懸浮培養基中。
7.如權利要求1所述的培養方法，其特征在于，于懸浮培養基中的培養溫度為25～30℃，相對濕度為55～65％，轉速100～120rpm，黑暗培養，培養15～20天。
8.如權利
9.如權利要求1～8任意一項所述的培養方法獲得的懸浮細胞在植物生理學、細胞學、分子生物學研究中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種本生煙草葉片愈傷組織誘導及懸浮細胞培養方法，其特征在于，包括以下步驟：將本生煙草葉片接種至誘導培養基中培養，形成愈傷組織；將愈傷組織接種至懸浮培養基中培養，得懸浮細胞；
2.如權利要求1所述的培養方法，其特征在于，所述本生煙草葉片為本生煙草無菌苗葉片。
3.如權利要求1所述的培養方法，其特征在于，所述本生煙草葉片需剪切成0.5～3cm2的小塊。
4.如權利要求1所述的培養方法，其特征在于，本生煙草葉片接種至誘導培養基中的培養溫度為25～30℃，相對濕度為55～65％，黑暗培養，培養28～32天。
5.如權利要求1所述的培養方法，其特征在于，在獲得愈傷組織...
【專利技術屬性】
技術研發人員：楊鑫，陳庭倬，葉云天，張秀民，趙文娟，任丹，何其明，
申請(專利權)人：成都新朝陽作物科學股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。