【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于藥物殘留快速檢測領域，涉及一種磷酸三苯酯半抗原及其制備方法和應用。
技術介紹
1、有機磷酸酯類(organophosphate?esters,opes)是重要且典型的新污染物，在世界范圍內生產和使用量巨大，是全球使用最為廣泛的阻燃劑。磷酸三苯酯(tphp)是應用最廣泛的機磷酸酯類阻燃劑之一，已被用于玩具、紡織品、家具、汽車和電子產品中。tphp容易從消費品遷移到環境中，據報道，tphp已在水、土壤、粉塵、人體等中檢測到。現有研究表明，tphp可誘導神經毒性、發育毒性、代謝紊亂、內分泌紊亂和生殖毒性。美國、歐盟陸續限制部分opes的使用；2019年美國《有毒物質控制法》提議對磷酸三苯酯(tphp)進行優先風險評估。
2、磷酸三苯酯在環境中的遷移主要通過生物積累和食物鏈放大進行。它具有較低的生物降解性和中等程度的持久性，可以在土壤和沉積物中長時間存在，并通過食物鏈向上傳遞，最終對人類和動物造成潛在的健康風險。目前關于動物性食品中tphp的檢測主要采用復雜的前處理技術，包括液液萃取、固相萃取、基質固相分散萃取和凝膠滲透色譜等，結合氣相色譜-質譜(gc-ms)、液相色譜-質譜(lc-ms)等大型儀器設備開展，樣品前處理復雜，且由于沒有特異性手段，基質干擾強；另一方面，復雜的大型儀器需要專業的技術人員，無法滿足企業快速自查和大規模樣本檢測的需求。因此，亟需建立針對復雜的動物性食品基質的特異性快速篩查技術。
技術實現思路
1、本專利技術的目的是提供一種磷酸三苯酯半抗原
2、本專利技術的一個目的是提供一種磷酸三苯酯半抗原化合物，其結構式如式ⅰ所示：
3、
4、本專利技術所提供的制備所述磷酸三苯酯半抗原的方法，具體可包括如下步驟：
5、50ml反應瓶中投入378.5mg?4-(n叔丁氧羰基氨基)-1-丁醇，加入二氯甲烷20ml，攪拌至溶解后加入三乙胺245mg，室溫攪拌10min后加入591mg二苯基氯化磷，40℃回流攪拌反應16小時，降溫至室溫過濾除去副產物，濾液減壓濃縮，二氯甲烷溶解，加入2500mg?100-200目硅膠拌樣，200-300目硅膠裝柱層析，石油醚：乙酸乙酯＝2:1洗脫，收集主產物得632mg二苯基磷酸-4-(n-boc氨基)-1-丁醇酯。
6、50ml反應瓶中投入632mg二苯基磷酸-4-(n-boc氨基)-1-丁醇酯，加入乙酸乙酯10ml，攪拌至溶解后加入4m鹽酸乙酸乙酯溶液10ml，室溫攪拌120min后過濾收集固體，乙酸乙酯淋洗固體，40℃鼓風干燥，得到430mg二苯基磷酸-4-氨基-1-丁醇酯鹽酸鹽白色固體粉末，即式i所示磷酸三苯酯半抗原。
7、本專利技術還提供了一種磷酸三苯酯抗原，為將所述磷酸三苯酯半抗原(式i)與載體蛋白偶聯所得的抗原，所述載體蛋白具體為牛甲狀腺球蛋白(btg)或牛血清白蛋白(bsa)。
8、所述磷酸三苯酯抗原具體是按照包括如下步驟的方法制備獲得的：
9、(1)稱取磷酸三苯酯半抗原9.59mg，加入2ml?dmf攪拌至全部溶解。用5ml?cb液充分溶解20mg?btg蛋白后，加入上述活化液，加入新配1％戊二醛134.3μl，反應過夜；用10mmpbs透析7次，獲得磷酸三苯酯抗原，稱為免疫原。
10、(2)稱取磷酸三苯酯半抗原24mg，加入2mldmf攪拌至全部溶解。用5ml?cb液充分溶解50mg?bsa蛋白后，加入上述活化液，加入新配1％戊二醛335.8μl，反應過夜；用10mm?pbs透析7次，獲得另一種磷酸三苯酯抗原，稱為包被原。
11、其中，所述磷酸三苯酯半抗原(式i)與所述載體蛋白偶聯的摩爾比為11.76。
12、本專利技術還提供了一種磷酸三苯酯抗體，是由上述磷酸三苯酯抗原免疫動物得到，所述抗體可為單克隆抗體、多克隆抗體或抗血清。
13、本專利技術還提供了所述磷酸三苯酯半抗原或所述磷酸三苯酯抗原在定性或定量檢測磷酸三苯酯中的應用。
14、本專利技術還要求保護一種用于檢測食品中磷酸三苯酯的方法，包括：用所述磷酸三苯酯抗原或所述抗體對動物源食品進行檢測，所述方法包括酶聯免疫分析法、膠體金免疫層析法、熒光定量免疫層析法、化學發光免疫分析法。
15、本專利技術依靠免疫學、免疫化學基本原理和殘留分析技術手段，設計、合成磷酸三苯酯半抗原，并與載體蛋白偶聯，制備有效人工抗原，合成方法簡單、純度高、產率高，對于磷酸三苯酯抗體的制備，以及磷酸三苯酯殘留檢測具有重大價值。
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1.一種磷酸三苯酯半抗原，其特征在于，其結構如式I所示：
2.制備權利要求1所述化合物的方法，包括步驟為：
3.一種磷酸三苯酯抗原，其特征在于，為式I所示磷酸三苯酯半抗原與載體蛋白偶聯得到的。
4.根據權利要求3所述的磷酸三苯酯抗原，其特征在于，其制備方法包括如下步驟：
5.根據權利要求3或4所述的磷酸三苯酯抗原，其特征在于，所述磷酸三苯酯半抗原與所述載體蛋白偶聯的摩爾比為11.76。
6.一種磷酸三苯酯抗體，其特征在于，由權利要求3或4所述磷酸三苯酯抗原作為免疫原制得的。
7.根據權利要求6所述的壬基酚抗體，其特征在于，所述抗體選自單克隆抗體、多克隆抗體或抗血清。
8.根據權利要求6所述的壬基酚抗體，其特征在于，所述抗體為磷酸三苯酯單克隆抗體；所述磷酸三苯酯單克隆抗體的重鏈可變區的氨基酸序列為序列表的序列1所示；所述磷酸三苯酯單克隆抗體的輕鏈可變區的氨基酸序列為序列表的序列2所示。
9.一種檢測磷酸三苯酯的試劑盒，其特征在于，包括權利要求4所述磷酸三苯酯抗原和權利要求6所述抗體。p>
10.根據權利要求9所述的檢測磷酸三苯酯的試劑盒，其特征在于，所述酶聯免疫試劑盒對豬肉、牛肉、魚肉和牛奶進行檢測，所述檢測上述樣本中磷酸三苯酯的檢測限為0.10?μg/kg。
...【技術特征摘要】
1.一種磷酸三苯酯半抗原，其特征在于，其結構如式i所示：
2.制備權利要求1所述化合物的方法，包括步驟為：
3.一種磷酸三苯酯抗原，其特征在于，為式i所示磷酸三苯酯半抗原與載體蛋白偶聯得到的。
4.根據權利要求3所述的磷酸三苯酯抗原，其特征在于，其制備方法包括如下步驟：
5.根據權利要求3或4所述的磷酸三苯酯抗原，其特征在于，所述磷酸三苯酯半抗原與所述載體蛋白偶聯的摩爾比為11.76。
6.一種磷酸三苯酯抗體，其特征在于，由權利要求3或4所述磷酸三苯酯抗原作為免疫原制得的。
7.根據權利要求6所述的壬基酚抗體，其...
【專利技術屬性】
技術研發人員：馬立才，丁亞芳，秦譽，劉薇，賈良曦，楊柳，邢維維，金興，
申請(專利權)人：北京維德維康生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：
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