【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及動物疫苗生產，具體涉及一種無asfv及pcv-2的豬肺炎支原體培養基、其制備方法及應用。
技術介紹
1、豬支原體肺炎，又稱豬氣喘病、豬地方流行性肺炎、豬霉形體肺炎。豬支原體肺炎是由豬肺炎支原體引起豬的一種慢性呼吸道傳染病。臨床上以咳嗽、氣喘和肺部典型的“蝦肉”樣病變為特征，發病率高，死亡率低。本病廣泛分布于世界各地，在我國許多地區的豬場都有發生。由于帶菌病豬的存在和分布面較廣，除直接發生死亡外，病豬生長發育緩慢，生長率降低15％左右，飼料利用率降低20％，造成飼料和人力的浪費。有的成為僵豬或繼發感染死亡。所造成的經濟損失很大，是危害養豬業發展的重要疫病之一。
2、豬支原體肺炎等疾病有效的預防和控制方法是為豬只提供優良的生活環境，如保證圈舍內的空氣清新、通風條件良好、環境溫度適宜及豬只的數量適宜，豬場實施科學嚴謹的管理措施，如控制豬的進出流動、仔豬早期斷奶等。但是這些有效控制方法在國內豬場很難做到。目前豬場常使用的方法是藥物治療和疫苗防控。
3、不管是豬肺炎支原體滅活疫苗還是弱毒活疫苗，無細胞培養都需要培養基。豬肺炎支原體由于基因組小，基因數量有限，從而導致生物合成途徑缺乏，需要從生長環境中獲取糖、氨基酸、嘌呤、嘧啶和膜成分，這就要求豬肺炎支原體培養基中含有這些成分。從豬肺炎支原體分離、鑒定至今，已有不同配方的培養基，從最早的煮沸豬肺組織滅活細胞培養基、豬肺埋塊無細胞培養基，到后來的friis培養基、江蘇農科院的km2培養基、獸醫生物制品制造及檢驗規程中的豬肺炎支原體培養基，都可以培養出豬肺炎
技術實現思路
1、本專利技術旨在針對現有技術的技術缺陷，提供一種無asfv及pcv-2的豬肺炎支原體培養基、其制備方法及應用，以解決常規培養基中可能含有非洲豬瘟病毒和圓環病毒的技術問題。
2、本專利技術要解決的另一技術問題是，常規培養基對豬肺炎支原體的培養效率有待提升。
3、為實現以上技術目的，本專利技術采用以下技術方案：
4、無asfv及pcv-2的豬肺炎支原體培養基，其特征在于，包括：多價浸粉5-10g/l，酵母浸出液20-50ml/l，水解乳蛋白5-10g/l，l-精氨酸0.01-0.05g/l，l-賴氨酸0.01-0.05g/l，l-谷氨酰胺0.01-0.05g/l，甘氨酸0.01-0.05g/l，丙酮酸鈉1-2g/l，生長因子0.01-0.05g/l，植物提取物10-20g/l，青霉素20萬單位/l，10x?hank's液20-40ml/l，新生牛血清100-200ml/l，余量超純水。
5、作為優選，所述豬肺炎支原體培養基還包括ph指示劑。
6、作為優選，所述ph指示劑為酚紅。
7、在以上技術方案的基礎上，本專利技術進一步提供了上述豬肺炎支原體培養基的制備方法，包括以下步驟：將培養基的各成分溶于超純水，配制成1l?ph值為7.6-7.8的水溶液，再將水溶液用0.22μm濾膜過濾除菌；
8、作為優選，對ph的調整是利用1mol/l?naoh溶液實現的。
9、在以上技術方案的基礎上，本專利技術進一步提供了上述豬肺炎支原體培養基用于培養豬肺炎支原體的應用。
10、豬肺炎支原體培養，包括以下步驟：
11、1、將實驗室保存的豬肺炎支原體rm48株溶解后，以10％接種在所述培養基中，培養體系為2ml，于溫箱進行37℃靜置培養，培養基ph下降至6.8-7.0時，將菌液收獲作為一級種；
12、2、以10％接種量將一級種接種于10ml培養基中，于溫箱進行37℃擴增培養，培養基ph下降至6.8-7.0時，將菌液收獲作為二級種；
13、3、以10％接種量將二級種接種于50ml培養基中，于溫箱進行37℃擴增培養，培養基ph下降至6.8-7.0時，將菌液收獲，測定活菌滴度。
14、作為優選，所述豬肺炎支原體是豬肺炎支原體rm48株。
15、本專利技術公開了一種無asfv及pcv-2的豬肺炎支原體培養基、其制備方法及應用，屬于動物疫苗生產
在該技術方案中，基礎培養基主要成分有：多價浸粉、酵母浸出液、水解乳蛋白、10x?hank's液、l-精氨酸、l-賴氨酸、l-谷氨酰胺、甘氨酸、丙酮酸鈉、生長因子、青霉素、植物提取物、新生牛血清、超純水，培養基的所有成分過濾除菌。本專利技術培養基培養豬肺炎支原體rm48株的滴度達到1×1010ccu/ml，培養時間最低可至66h，降低了企業生產成本，而且培養基中不含非洲豬瘟病毒與豬圓環病毒2型，具有更好的安全性。本專利技術營養豐富、培養滴度高、安全性好，具有突出的技術優勢。
【技術保護點】
1.無ASFV及PCV-2的豬肺炎支原體培養基，其特征在于，包括：多價浸粉5-10g/L，酵母浸出液20-50mL/L，水解乳蛋白5-10g/L，L-精氨酸0.01-0.05g/L，L-賴氨酸0.01-0.05g/L，L-谷氨酰胺0.01-0.05g/L，甘氨酸0.01-0.05g/L，丙酮酸鈉1-2g/L，生長因子0.01-0.05g/L，植物提取物10-20g/L，青霉素20萬單位/L，10x?Hank's液20-40mL/L，新生牛血清100-200mL/L，余量超純水。
2.根據權利要求1所述的無ASFV及PCV-2的豬肺炎支原體培養基，其特征在于，所述豬肺炎支原體培養基還包括pH指示劑。
3.根據權利要求2所述的無ASFV及PCV-2的豬肺炎支原體培養基，其特征在于，所述pH指示劑為酚紅。
4.權利要求1、2、3任一項所述豬肺炎支原體培養基的制備方法，其特征在于包括以下步驟：將培養基的各成分溶于水，配制成1L?pH值為7.6-7.8的水溶液，再將水溶液用0.22μm濾膜過濾除菌。
5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在
6.權利要求1所述豬肺炎支原體培養基用于培養豬肺炎支原體的應用。
7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，包括以下步驟：
...【技術特征摘要】
1.無asfv及pcv-2的豬肺炎支原體培養基，其特征在于，包括：多價浸粉5-10g/l，酵母浸出液20-50ml/l，水解乳蛋白5-10g/l，l-精氨酸0.01-0.05g/l，l-賴氨酸0.01-0.05g/l，l-谷氨酰胺0.01-0.05g/l，甘氨酸0.01-0.05g/l，丙酮酸鈉1-2g/l，生長因子0.01-0.05g/l，植物提取物10-20g/l，青霉素20萬單位/l，10x?hank's液20-40ml/l，新生牛血清100-200ml/l，余量超純水。
2.根據權利要求1所述的無asfv及pcv-2的豬肺炎支原體培養基，其特征在于，所述豬肺炎支原體培養基...
【專利技術屬性】
技術研發人員：郇春燕，孫晉超，劉超，王宇，宋秀梅，楊飛，楊陽，李秀輝，張桐，陳坤，陳辰，
申請(專利權)人：中海生物技術棗莊有限公司，
類型：發明
國別省市：
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