【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于中藥領域，具體涉及一種白毛銀露梅的指紋圖譜和含量檢測方法及其在中藥質量控制中的應用。
技術介紹
1、白毛銀露梅(dasiphora?mandshurica(maxim.)juz.)，又名藥王茶，華西銀臘梅、華西銀露梅等，原為薔薇科委陵菜屬植物，近年來被植物學家重新劃分為薔薇科金露梅屬植物，其資源豐富，廣泛分布于我國陜西、甘肅、青海等各地的干旱山坡、溝谷、巖石坡、灌叢及雜木林中，生長海拔為1200-3400米，陜西境內主要野生于秦嶺太白山海拔3000米左右的高山草甸。白毛銀露梅以藥王茶之名在《太白本草》及《秦嶺植物志》記載：“清暑熱，益腦清心”，現代臨床主要用于治療糖尿病、高血壓、高血脂、失眠、抑郁癥等，可長期代茶飲，也可組方治療糖尿病等代謝性疾病，是一種集治療、保健、養生作用于一體的藥食同源性植物。由于不同地區白毛銀露梅中各化學成分含量有明顯差異，進而影響其質量效果。目前，國內尚無白毛銀露梅質量評價的統一標準，為了彌補白毛銀露梅質量評價的空白，防止以次充好等亂象，本專利技術提出一種白毛銀露梅的指紋圖譜和含量檢測方法及其在中藥質量控制中的應用。
技術實現思路
1、本專利技術提供一種白毛銀露梅藥材的hplc指紋圖譜，其特征在于當hplc色譜條件如下時，所述白毛銀露梅藥材的hplc指紋圖譜基本與圖1r或圖2b一致；
2、hplc色譜條件如下：
3、色譜柱為agilent?poroshell?120sb-c18，規格：150mm×4.6mm，2.7μm
4、流動相：乙腈為a相，甲醇為b相，0.1wt％磷酸水溶液為c相；
5、梯度洗脫條件：
6、
7、流速：0.5ml·min-1；柱溫：25℃；檢測波長：254nm；進樣量10μl。
8、本專利技術的另一實施方案提供上述白毛銀露梅藥材的hplc指紋圖譜，其特征在于所述白毛銀露梅藥材的hplc指紋圖譜基本與圖1或圖2b一致，具有不少于16個特征指紋色譜峰，其中峰7為仙鶴草素，峰9為異槲皮苷，峰10為鞣花酸，峰11為槲皮苷，峰12為萹蓄苷。
9、本專利技術的另一實施方案提供上述白毛銀露梅藥材的hplc指紋圖譜在白毛銀露梅藥材質量控制、成分分析中的應用。
10、本專利技術的另一實施方案提供上述白毛銀露梅藥材的hplc指紋圖譜在白毛銀露梅藥材質量控制中的應用，其特征在于所述應用包括如下步驟：
11、(1)將白毛銀露梅藥材粉碎后超聲提取，配制成供試品溶液；
12、(2)取步驟(1)得到的供試品溶液，經hplc檢測，得供試品的hplc圖，其中色譜條件如下：
13、色譜柱為agilent?poroshell?120sb-c18，規格：150mm×4.6mm，2.7μm；
14、流動相：乙腈為a相，甲醇為b相，0.1wt％磷酸水溶液為c相；
15、梯度洗脫條件：
16、
17、流速：0.5ml·min-1；柱溫：25℃；檢測波長：254nm；進樣量10μl；
18、(3)將步驟(2)得到的供試品的hplc圖與本專利技術所述的白毛銀露梅藥材的hplc指紋圖譜比較，相似度在0.90以上(優選相似度在0.95、0.98以上)的白毛銀露梅藥材為合格產品。
19、其中步驟(1)所述的供試品溶液的制備方法如下：將白毛銀露梅藥材粉碎，過50目篩，稱取0.2g，置具塞錐形瓶中，精密加入體積分數75％甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率300w，頻率50khz)45分鐘，放冷(恢復至室溫)，再稱定重量，用體積分數75％甲醇補足減失的重量，搖勻，用0.45μm微孔有機濾膜濾過，即得。
20、本專利技術的另一實施方案提供一種測定白毛銀露梅藥材中仙鶴草素、異槲皮苷、鞣花酸、槲皮苷和/或萹蓄苷含量的方法，其特征在于所述方法包括如下步驟：
21、(1)將白毛銀露梅藥材粉碎后超聲提取，配制成供試品溶液；
22、(2)取步驟(1)得到的供試品溶液，經hplc檢測，根據仙鶴草素、異槲皮苷、鞣花酸、槲皮苷和/或萹蓄苷的峰面積代入相應的線性方程，仙鶴草素：y＝11467.78x+704.70、異槲皮苷：y＝51371.76x-178.05、鞣花酸：y＝123235.14x+59520.84、槲皮苷：y＝47720.46x+80.43、萹蓄苷：y＝62818.88x-635.79，即可得出仙鶴草素、異槲皮苷、鞣花酸、槲皮苷和/或萹蓄苷的含量。
23、其中步驟(1)所述的供試品溶液的制備方法如下：將白毛銀露梅藥材粉碎，過50目篩，稱取0.2g，置具塞錐形瓶中，精密加入體積分數75％甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率300w，頻率50khz)45分鐘，放冷(恢復至室溫)，再稱定重量，用體積分數75％甲醇補足減失的重量，搖勻，用0.45μm微孔有機濾膜濾過，即得。
24、步驟(2)中hplc檢測的色譜條件如下：
25、色譜柱為agilent?poroshell?120sb-c18，規格：150mm×4.6mm，2.7μm；
26、流動相：乙腈為a相，甲醇為b相，0.1wt％磷酸水溶液為c相；
27、梯度洗脫條件：
28、
29、流速：0.5ml·min-1；柱溫：25℃；檢測波長：254nm；進樣量10μl。
30、與現有技術相比，本專利技術的優點在于：(1)本專利技術通過對不同采集時間的白毛銀露梅藥材樣品hplc分析，首次建立白毛銀露梅藥材指紋圖譜，為白毛銀露梅藥材的質量控制提供了有效方法；(2)通過中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(2012版)，確定了白毛銀露梅藥材的hplc指紋圖譜共有模式，標定了16個共有峰，除s7樣品不合格(相似度0.817)外，其余9批樣品(s1～s6、s8～s10)的相似度均大于0.986相似度，均大于0.900(合格產品)，并測定峰7為仙鶴草素，峰9為異槲皮苷，峰10為鞣花酸，峰11為槲皮苷，峰12為萹蓄苷，并建立相應的標準曲線，可以測定其成分含量；(3)由于白毛銀露梅中成分眾多，各成分溶解性、分離度不同，考察了多個色譜條件，最終選擇本專利技術的色譜條件；分別考察了提取溶劑(30％、50％、75％、100％甲醇)、溶劑量(10ml、25ml、50ml)以及超聲提取時間(15、30、45、60min)對待測成分提取率的影響，比較不同提取條件下的色譜峰的峰面積及分離度，最終選擇以75％甲醇為溶劑，溶劑量為25ml，超聲45min進行提取。流動相分別考察了甲醇-水、甲醇-0.1％磷酸水、乙腈-0.1％磷酸水、甲醇-0.5％磷酸水、甲醇-0.1％甲酸水和乙腈-甲醇-0.1％磷酸水，結果以乙腈-甲醇-0.1％磷酸三相系統進行梯度洗脫分離效果最佳；分別考察了agilent?tc-5c18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)kromasil?100-3.5-c18(150mm×4本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種白毛銀露梅藥材的HPLC指紋圖譜，其特征在于當HPLC色譜條件如下時，所述白毛銀露梅藥材的HPLC指紋圖譜基本與圖1R或圖2B一致；
2.權利要求1所述的白毛銀露梅藥材的HPLC指紋圖譜，其特征在于所述白毛銀露梅藥材的HPLC指紋圖譜基本與圖1或圖2B一致，具有不少于16個特征指紋色譜峰，其中峰7為仙鶴草素，峰9為異槲皮苷，峰10為鞣花酸，峰11為槲皮苷，峰12為萹蓄苷。
3.權利要求1-2任一項所述的白毛銀露梅藥材的HPLC指紋圖譜在白毛銀露梅藥材質量控制、成分分析中的應用。
4.權利要求1-2任一項所述的白毛銀露梅藥材的HPLC指紋圖譜在白毛銀露梅藥材質量控制中的應用，其特征在于所述應用包括如下步驟：
5.一種測定白毛銀露梅藥材中仙鶴草素、異槲皮苷、鞣花酸、槲皮苷和/或萹蓄苷含量的方法，其特征在于所述方法包括如下步驟：
【技術特征摘要】
1.一種白毛銀露梅藥材的hplc指紋圖譜，其特征在于當hplc色譜條件如下時，所述白毛銀露梅藥材的hplc指紋圖譜基本與圖1r或圖2b一致；
2.權利要求1所述的白毛銀露梅藥材的hplc指紋圖譜，其特征在于所述白毛銀露梅藥材的hplc指紋圖譜基本與圖1或圖2b一致，具有不少于16個特征指紋色譜峰，其中峰7為仙鶴草素，峰9為異槲皮苷，峰10為鞣花酸，峰11為槲皮苷，峰12為萹蓄苷。...
【專利技術屬性】
技術研發人員：崔小敏，陳志永，張紅，任慧，魯文靜，胡靜，李寧，曲彤，
申請(專利權)人：陜西省中醫藥研究院，
類型：發明
國別省市：
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