【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于獸用生物制品，具體涉及一種豬流行性腹瀉病毒株新型變異毒株及其在制備豬流行性腹瀉疫苗中的應用。
技術介紹
1、全懸浮培養工藝是一種不依賴血清和載體的細胞培養工藝，目前主要用vero和st細胞進行培養，以vero細胞居多。st全懸浮細胞株較vero全懸浮細胞具有培養效率更高、成本更低、更能適應大體積培養等優勢特點。st細胞為豬睪丸細胞，體外培養呈貼壁生長，可進行連續傳代培養。st細胞培養成為病毒類疫苗的關鍵技術節點，直接影響到獸用疫苗質量和經濟效益。
2、豬流行性腹瀉(procine?epidemic?diarrhea,ped)首次在英國被報道，后續在美洲和亞洲被報道發現。2010年之前，ped在我國的流行形式主要以散發和地方流行為主，2010年10月新的ped疫情在南方爆發，在全國流行。豬流行性腹瀉是目前養豬業危害最嚴重的疾病之一，以嘔吐、腹瀉、厭食、脫水為主要發病特征，該病嚴重危害新生仔豬，死亡率高達100％，對養豬業造成了巨大的經濟損失。
3、豬流行性腹瀉主要是由豬流行性腹瀉病毒(pedv)引起豬的一種高度接觸性腸道傳染病，各日齡階段的豬均易感。豬流行性腹瀉病毒是一種具有囊膜的單股正鏈rna病毒，屬于冠狀病毒科、冠狀屬。pedv基因組包含7個開放閱讀框，分別編碼2個多聚蛋白orf1a和orf1b；4種結構蛋白包括纖突蛋白(s)、膜蛋白(m)、包膜蛋白(e)、核衣殼蛋白(n)。s蛋白是病毒進行靶細胞的關鍵蛋白，介導受體結合和病毒與細胞膜的融合。此外s蛋白通常用來表明冠狀病毒分離株的遺傳特征。
4、研究表明pedv只有一個血清型，但基于s基因n末端結構域的氨基酸差異，pedv可以分為基因組1(gia和gib)和2(g2a和g2b)型。在2010年之前，歐洲和亞洲流行的大多數ped病毒株屬于g1a型毒株，包括經典株和疫苗株，如cv777和dr-13。自2010年以來，我國又多次大規模暴發該病，我國405株pedv毒株中，84.2％(341/405)為新型pedv毒株，15.8％(64/405)為傳統pedv或傳統pedv來源的疫苗毒株。目前，經典毒株疫苗(如cv777、dr13等)對pedv新型變異毒株缺乏有效的交叉中和作用，并不能提供可靠的交叉保護。雖然疫苗在ped的防控中發揮了重要的作用，但越來越多的豬場在使用pedv疫苗后ped仍然會發生和流行，這說明pedv在環境壓力下一直處于變異的狀態，這可能是導致近年pedv大規模爆發，而不能以疫苗接種等措施控制此病流行的主要原因。
5、由于冠狀病毒易變異，導致目前已上市應用的豬流行性腹瀉類相關疫苗對疫病流行控制效果不理想。現有的pedv疫苗毒株多數從發病豬場分離毒株的方式獲取，由于pedv為冠狀病毒易變異，因此分離獲得變異pedv毒株變得尤為重要，對pedv變異毒株疫苗的制備和應用具有重要意義。新型變異毒株的出現給豬場的生物安全防控體系帶來更大的挑戰。因此，pedv疫苗毒株的更新迫在眉睫，疫苗毒株需要跟隨毒株變異的速度，制備變異毒株pedv疫苗，更好的為畜牧業提供免疫保護。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種豬流行性腹瀉病毒毒株及其在疫苗制備中的應用，所提供的豬流行性腹瀉病毒株的抗原蛋白基因發生變異，為一新型的變異病毒株，將該病毒株可作為抗原來制備疫苗。另外將制備的疫苗進行豬的安全性與效力檢驗，對疫苗進行評價。
2、本專利技術首先提供一種豬流行性腹瀉病毒pedv-wl20株，該病毒株于2021年8月5日保藏于中國武漢、武漢大學的中國典型培養物保藏中心，保藏編號為cctcc?no:v202162。
3、本專利技術所提供的豬流行性腹瀉病毒pedv-wl20變異株，其s基因的氨基酸序列為seq?id?no:1；
4、本專利技術所提供的豬流行性腹瀉病毒pedv-wl20株可用于制備疫苗；
5、所述的疫苗，作為實施例的一種具體記載，為滅活疫苗；
6、本專利技術再一個方面還提供一種滅活疫苗，其中所使用的抗原為滅活的豬流行性腹瀉病毒pedv-wl20株；
7、所述的滅活，作為實施例的一種記載，是使用甲醛進行滅活。
8、本專利技術的病毒株，其另一個用途是用于制備中和抗體。
9、本專利技術還提供一種擴繁所述的豬流行性腹瀉病毒pedv-wl20株的方法，是使用豬睪丸傳代細胞系懸浮適應株st-wl來繁殖所述的豬流行性腹瀉病毒pedv-wl20株；所述的豬睪丸傳代細胞系懸浮適應株st-wl，已于2021年8月5日保藏于中國武漢、武漢大學的中國典型培養物保藏中心，保藏編號為cctcc?no：c2021214。
10、本專利技術分離得到的豬流行性腹瀉病毒pedv-wl20株經鑒定為新型變異毒株，通過從濰坊某豬場發病豬群中分離得到，與現在流行毒株基因同源性99％以上。用新型變異毒株制成的滅活疫苗進行超劑量安全性檢驗，實驗組均無異常臨床反應。在效力檢驗方面，本專利技術分離得到的豬流行性腹瀉病毒pedv-wl20株制成的滅活疫苗能顯著降低仔豬的腹瀉率和死亡率。實驗組較市售同類產品在初乳和血清elisa抗體進行對比，結果表明實驗疫苗組在elisa抗體表現上優于市售競品組。以上安全與效力實驗證明用st-wl懸浮細胞培養的豬流行性腹瀉病毒新型變異株具有良好的臨床防護效果，有很好的免疫原性。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種豬流行性腹瀉病毒，其特征在于，所述的豬流行性腹瀉病毒的保藏編號為CCTCCNO:V202162。
2.如權利要求1所述的豬流行性腹瀉病毒，其特征在于，所述的豬流行性腹瀉病毒的S基因的氨基酸序列為SEQ?ID?NO:1。
3.權利要求1所述的豬流行性腹瀉病毒在制備疫苗中的應用。
4.如權利要求3所述的應用，其特征在于，所述的疫苗為滅活疫苗。
5.一種滅活疫苗，其特征在于，所述的滅活疫苗中所使用的抗原為滅活的權利要求1所述的豬流行性腹瀉病毒。
6.如權利要求5所述的滅活疫苗，其特征在于，所述的滅活是使用甲醛進行滅活。
7.權利要求1所述的豬流行性腹瀉病毒在制備中和抗體中的應用。
8.一種擴繁權利要求1所述的豬流行性腹瀉病毒的方法，其特征在于，所述的方法是使用保藏編號為CCTCC?NO：C2021214的豬睪丸傳代細胞系來懸浮繁殖。
【技術特征摘要】
1.一種豬流行性腹瀉病毒，其特征在于，所述的豬流行性腹瀉病毒的保藏編號為cctccno:v202162。
2.如權利要求1所述的豬流行性腹瀉病毒，其特征在于，所述的豬流行性腹瀉病毒的s基因的氨基酸序列為seq?id?no:1。
3.權利要求1所述的豬流行性腹瀉病毒在制備疫苗中的應用。
4.如權利要求3所述的應用，其特征在于，所述的疫苗為滅活疫苗。
5.一種滅活疫苗...
【專利技術屬性】
技術研發人員：高杰，徐宏軍，李義星，侯曉嵐，張艷平，董婷婷，楊杰華，趙玉惠，王麒文，王少沛，李文華，張孝智，王宗祥，韓娜，
申請(專利權)人：青島蔚藍動物保健集團有限公司，
類型：發明
國別省市：
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