肉類中旋毛蟲成囊前期幼蟲的檢疫方法技術

本發明專利技術公開了一種肉類中旋毛蟲成囊前期幼蟲的檢疫方法，１、從待檢動物胴體的不同部位采集肉樣，置４℃預冷；２、將漏斗下端連接軟管，用夾子將其末端夾緊；取醫用紗布塊平鋪漏斗中，用生理鹽水浸沒紗布塊；３、將漏斗下部插入３７℃水浴鍋中，保持水面低于紗布塊底層２ｃｍ；４、將預冷后的待檢肉樣絞碎置于漏斗中的紗布塊上，加入生理鹽水；５、３０ｍｉｎ后，將漏斗取出，打開軟管上夾子，將其中的液體收集到離心管中；６、將離心管中液體離心或沉淀后棄上清，取沉渣置于光學顯微鏡下鏡檢。本發明專利技術的優點在于利用成囊前期感染性幼蟲具有向溫移行的生理特征，將待檢肉樣中的成囊前期感染性幼蟲直接分離出來，實現對成囊前期感染性幼蟲的可靠檢疫。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及生物技術及肉類檢疫
，尤其是涉及一種肉類中旋毛蟲成囊前 期幼蟲的檢疫方法。
技術介紹
旋毛蟲病主要因生食或半生食含有旋毛蟲感染性幼蟲的肉類及肉制品所致，該病 不僅嚴重危害人體健康，對畜牧養殖業也可造成巨大經濟損失。隨著人們飲食習慣的改變， 因食生或半生動物肉類而引起旋毛蟲病的暴發逐漸增多；此外，由于國際貿易的全球化、旅 游事業的發展及人口的大規模流動，均增加了旋毛蟲病傳播的機會。據估計，目前全世界大 約有1100萬旋毛蟲病患者，現已將其列為再次出現的疾病(re-emerging disease)。血清 學調查顯示，目前我國約有2 000萬旋毛蟲感染者，感染率遠高于世界平均水平。因此，加 強肉類旋毛蟲檢疫已是刻不容緩的艱巨任務。許多國家已經立法，規定應使用直接法(旋毛蟲鏡檢法或人工消化法)進行肉類中 的旋毛蟲檢疫。國內目前常采用膈肌壓片鏡檢法檢查旋毛蟲，但鏡檢法的敏感性較低，尤 其是對含有低密度幼蟲的肌肉樣本檢查時，其假陰性率可高達52%，達不到對肉類安全的要 求。國際旋毛蟲病委員會推薦使用人工消化法進行肉類檢疫，理論上，只要肉類或肉制品樣 品中含有1條或1條以上旋毛蟲幼蟲(對公共衛生構成威脅的最低感染水平)，如果操作方 法正確，即可被檢出。但是，在實際應用過程中，消化法的檢疫效果受樣本的制備方法、消化 液的組成、胃蛋白酶和鹽酸的濃度、消化的溫度和持續時間、回收幼蟲的過濾和沉淀方法等 多種因素影響，實際上的敏感性是每克肌肉含3 5條幼蟲才能被檢出，此時被檢樣本中已 含有足以引起人體旋毛蟲病的幼蟲，但檢疫時卻會出現假陰性的結果。如1985-1986年在 前南斯拉夫發生的15次旋毛蟲病暴發，均是食入了經過檢疫合格的豬肉所致，2001-2002 年在Kumane市發生的暴發也是由于食入了漏檢的豬肉所致。因此，檢驗結果的可靠性對于 保證食品安全與人民健康是非常重要的。傳統觀點普遍認為，只有成囊期幼蟲才是旋毛蟲(除偽旋毛蟲等不成囊的旋毛蟲 外)的感染階段，目前應用的多種肉類旋毛蟲檢疫技術都是針對成囊期幼蟲進行觀察的結 果。隨著研究的深入，現已證實旋毛蟲感染宿主后18天的成囊前期幼蟲對新宿主已具有感 染性，即成囊前期感染性幼蟲。對含有旋毛蟲成囊前期感染性幼蟲的肉類進行檢疫時，由于 此期旋毛蟲幼蟲多呈圓柱狀或棒狀，且沒有典型的旋毛蟲幼蟲囊包，混雜在肌纖維之中較 難分辨，導致鏡檢的難度加大，非專業人員很難檢測出來，檢出率大大降低；此外，成囊前期 感染性幼蟲由于沒有囊包的保護作用，其抵抗消化的能力明顯低于成囊期幼蟲，不能耐受 常規配方人工消化液的消化作用，在使用人工消化法對含有成囊前期感染性幼蟲的肉類進 行檢疫時，幼蟲常被消化斷裂成數段，部分幼蟲甚至會被消化掉，與肉樣中未消化完全的肌 纖維混在一起，極難分辨，嚴重影響肉類旋毛蟲的檢疫效果，導致假陰性結果的出現，對公 眾健康構成威脅。故不能將檢疫旋毛蟲成囊期幼蟲的方法直接用于成囊前期感染性幼蟲的 檢疫。3由此可見，旋毛蟲鏡檢法和人工消化法的敏感性在實際應用中并不能完全達到對 肉類安全的要求，尤其是對旋毛蟲輕度感染和/或成囊前期感染性幼蟲檢疫時，更不能滿 足公共衛生需要。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種具有高檢出率且可廣泛應用于肉類中旋毛蟲成囊前 期幼蟲的檢疫方法。為實現上述目的，本專利技術可采取下述技術方案本專利技術所述的，包括下述步驟 第一步，從待檢動物酮體的不同部位采集總重2g 5g的待檢肉樣，在潔凈平皿中置 4°C 預冷 20min ；第二步，取漏斗一只，將漏斗下端連接上軟管，用夾子將軟管末端夾緊；取醫用紗布折 疊成4層以上后平鋪在漏斗中，先用生理鹽水將紗布潤濕，之后向漏斗中緩慢加入生理鹽 水，使其浸沒紗布塊底部即可；第三步，將恒溫水浴鍋溫度調整至37°C后，將漏斗下部插入水浴鍋中，保持水面低于紗 布塊底層2cm ；第四步，將第一步預冷后的待檢肉樣置于攪拌器中絞碎后，置于漏斗中的醫用紗布塊 上，加入生理鹽水，使生理鹽水液面浸沒待檢肉樣即可；第五步，30min后，將漏斗從水浴鍋中取出，打開軟管末端的夾子，將軟管中的液體收集 到離心管中；第六步，將上述離心管置于離心機中500g離心5min或自然沉淀20 30min后，棄上清，取沉渣置于光學顯微鏡下鏡檢。若鏡檢發現旋毛蟲幼蟲，則判定該肉樣為旋毛蟲陽性肉樣；若鏡檢未發現旋毛蟲 幼蟲，則需再收集2次分離液體，連續3次收集結果均為陰性時，則可判定該肉樣不含有旋 毛蟲成囊前期幼蟲。由于成囊前期感染性幼蟲具有向溫移行的生理特征，利用此特性可將待檢肉樣中 的成囊前期感染性幼蟲直接分離出來，從而實現對成囊前期感染性幼蟲的檢疫。本專利技術的優點在于規范了對肉類中成囊前期幼蟲檢疫的操作技術及要求，為保證 肉類食品安全、旋毛蟲病的預防提供了一種新的檢疫方法，在很大程度上彌補了現行肉類 旋毛蟲檢疫方法的不足，與現有檢測方法聯用可使肉類旋毛蟲的檢疫更為全面，檢疫結果 更加可靠，對于保證肉類食品安全、保障人民身體健康和國際肉類貿易均具有重要意義。本 專利技術所涉及旋毛蟲成囊前期幼蟲分離方法還可作為旋毛蟲成囊前期幼蟲收集方法，可從旋 毛蟲感染動物模型中分離出成囊前期幼蟲，為科研提供旋毛蟲特定生長階段的幼蟲。本專利技術的有益效果主要體現在1、本專利技術所使用的分離裝置取材方便，制作簡單，造價低廉，適合在各級檢疫部門推廣 普及；2、本專利技術所涉及肉類中旋毛蟲成囊前期幼蟲檢疫方法原理簡單，操作方便，易于掌握；3、本專利技術所涉及集樣分離檢疫法可同時對100份待檢肉樣進行檢疫，大大提高了檢疫4效率；4、本專利技術所涉及肉類中旋毛蟲成囊前期幼蟲檢疫方法彌補了現行肉類旋毛蟲檢疫方 法的不足，與現行肉類旋毛蟲檢疫方法聯用可使肉類旋毛蟲的檢疫更為全面，結果更加可罪；5、本專利技術所涉及肉類旋毛蟲成囊前期幼蟲分離方法尚可作為一種旋毛蟲成囊前期幼 蟲收集方法為科研提供旋毛蟲特定生長時期的幼蟲。具體實施例方式術語定義a、新生幼蟲是指旋毛蟲雌成蟲有宿主腸道內剛產出的幼蟲；b、成囊前期幼蟲旋毛蟲新生幼蟲侵入腸粘膜后隨血流或淋巴侵入骨骼肌細胞后發 育，但還沒有形成囊包的幼蟲，即感染后5 26d在宿主骨骼肌內的幼蟲；c、成囊前期感染性幼蟲對新宿主已有感染性的成囊前期幼蟲，即感染后18 26d在 宿主骨骼肌內的幼蟲；d、成囊期幼蟲侵入骨骼肌后形成完整囊包并具有感染性的旋毛蟲幼蟲，即感染后 26d至數年在宿主骨骼肌內的幼蟲。本專利技術所述的，包括下述步驟第一步，從待檢動物酮體的不同部位采集總重2g 5g的待檢肉樣，在潔凈平皿中置 4°C預冷20min ；其目的是使肉樣溫度降低，增大溫度差，有利于幼蟲的分離；第二步，取漏斗一只，將漏斗下端連接上20cm 30cm的橡膠軟管，用夾子將軟管末端 夾緊；取醫用紗布折疊成4層(既可以使幼蟲通過又能有效阻止肌纖維透過紗布塊，避免肌 纖維過多而干擾幼蟲檢疫效果)后平鋪在漏斗中，使用膠頭滴管先將平鋪的紗布塊用生理 鹽水潤濕，之后向漏斗中緩慢加入適量生理鹽水，加入量使生理鹽水剛剛浸沒紗布塊底部 為宜；第三步，將恒溫水浴鍋內的水溫調整至37°C后，將帶有橡膠軟管的漏斗下部插入恒溫 水浴鍋中，保持水面低于紗布塊底層2cm，以便在紗布塊上下形成一個明顯的溫度梯度；本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種肉類中旋毛蟲成囊前期幼蟲的檢疫方法，其特征在于：包括下述步驟：第一步，從待檢動物酮體的不同部位采集總重２ｇ～５ｇ的待檢肉樣，在潔凈平皿中置４℃預冷２０ｍｉｎ；第二步，取漏斗一個，將漏斗下端連接上軟管，用夾子將軟管末端夾緊；取醫用紗布折疊成４層以上后平鋪在漏斗中，先用生理鹽水將紗布潤濕，之后向漏斗中緩慢加入生理鹽水，使其浸沒紗布塊底部即可；第三步，將恒溫水浴鍋溫度調整至３７℃后，將漏斗下部插入水浴鍋中，保持水面低于紗布塊底層２ｃｍ；第四步，將第一步預冷后的待檢肉樣置于攪拌器中絞碎后，置于漏斗中的醫用紗布塊上，加入生理鹽水，使生理鹽水液面浸沒待檢肉樣即可；第五步，３０ｍｉｎ后，將漏斗從水浴鍋中取出，打開軟管末端的夾子，將軟管中的液體收集到離心管中；第六步，將上述離心管置于離心機中５００ｇ離心５ｍｉｎ或自然沉淀２０～３０ｍｉｎ后，棄上清，取沉渣置于光學顯微鏡下鏡檢。

【技術特征摘要】
一種肉類中旋毛蟲成囊前期幼蟲的檢疫方法，其特征在于包括下述步驟第一步，從待檢動物酮體的不同部位采集總重2g～5g的待檢肉樣，在潔凈平皿中置4℃預冷20min；第二步，取漏斗一個，將漏斗下端連接上軟管，用夾子將軟管末端夾緊；取醫用紗布折疊成4層以上后平鋪在漏斗中，先用生理鹽水將紗布潤濕，之后向漏斗中緩慢加入生理鹽水，使其浸沒紗布塊底部即可；第三步，將恒溫水浴鍋溫度調整至37℃后，將漏...

【專利技術屬性】
技術研發人員：王中全，崔晶，姜鵬，王燁，張璽，王莉，李峰，王書偉，
申請(專利權)人：鄭州大學，
類型：發明
國別省市：41[中國|河南]