【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物，尤其涉及一種蛋白s試劑和蛋白s活性檢測試劑盒。
技術介紹
1、蛋白s(protein?s,ps)是20世紀70年代新發現的維生素k依賴的血漿糖蛋白，主要由肝臟，血管內皮，單核細胞和巨核細胞產生。ps作為抗凝血酶活化蛋白c(apc)的輔因子，參與活性促凝物質fva和fviiia的蛋白水解過程。蛋白c本身是無活性的酶原，當其被內皮細胞表面的凝血酶和血栓調節蛋白復合物激活后，成為活化蛋白c(apc)，這個過程使pc的活性增加20000倍。ps是apc發揮抗凝作用時的重要輔助因子，在ps存在時，apc與ps形成apc/ps復合體，其通過選擇性地降解fva和fviiia，使二者失活，喪失其促凝作用。因此apc抗凝血系統僅在凝血酶原被活化形成凝血酶后才能發揮作用。這使得apc系統的抗凝活性與凝血系統的活性表現為成比例地調節。蛋白s在人血漿中有兩種存在形式：一種是有活性的蛋白s，通常為游離型，占40％；另一種是無活性的結合型，約占其總量的60％。ps的本質是單鏈蛋白質，由676個氨基酸組成，含有g-羧基谷氨酸結構域、凝血酶敏感區、四個表位生長因子樣結構域以及和性激素結合球蛋白同源的羧基末端區。在正常情況下，約60％的ps與補體系統的調節成分c4b結合蛋白相結合形成復合物，其余40％作為apc的輔因子發揮作用。ps具有依賴于apc的抗凝血活性，此外，ps還能夠通過直接抑制凝血酶原酶和液化酶的活性而發揮獨立于apc的抗凝血功能。綜上所述ps作為抗凝血蛋白，其自身的缺陷使機體發生靜脈血栓栓塞的幾率明顯增加。
2、遺傳
3、蛋白s缺乏癥的診斷完全依賴于蛋白s的檢測。臨床上常用的實驗室方法為蛋白s活性檢測和蛋白s抗原檢測，后者又包括游離蛋白s抗原和總蛋白s抗原。目前，市場上以蛋白s活性檢測試劑為主，采用的方法為凝固法，然而，這類試劑普遍價格較高去，且重復性和穩定性也不夠理想。
技術實現思路
1、有鑒于此，本專利技術提供了一種蛋白s試劑和蛋白s活性檢測試劑盒。將該蛋白s試劑及試劑盒用于檢測血漿中s蛋白的活性，具有準確度高、穩定性高，重復性好、線性范圍較寬，且試劑價格低廉的優點。
2、為了實現上述專利技術目的，本專利技術提供以下技術方案：
3、蛋白s試劑，包括磷脂、三(羥甲基)氨基甲烷、組織因子、活化蛋白c、凍干保護劑和防腐劑；
4、所述磷脂為兔腦磷脂；
5、所述凍干保護劑選自聚乙二醇6000、甘氨酸、蔗糖中的至少一種。
6、一些實施方案中，所述蛋白s試劑，由水和如下濃度的組分組成：
7、兔腦磷脂0.04～0.08g/l、三(羥甲基)氨基甲烷3.029～6.057g/l、組織因子0.06～0.08g/l、活化蛋白c0.01～0.05g/l、聚乙二醇600010～20g/l、甘氨酸10～50g/l、蔗糖10～15g/l和防腐劑2～3g/l。
8、本專利技術所述的蛋白s試劑及試劑盒用于體外定量檢測人血漿中蛋白s的活性。用于蛋白s缺乏癥的輔助診斷。蛋白s水平降低從而導致靜脈血栓風險增加,主要為下肢深靜脈血栓形成及肺栓塞,部分報道提示其也會增加動脈栓塞如腦梗死及心肌梗死等風險。血栓性疾病,如dvt、dic、暴發性紫癜等；心腦血管疾病，如心梗塞,腦梗塞等；而許多常見疾病,如肝病、腎病、心腦血管疾病等,都會影響血液中ps的活性,因此測定血漿中ps對上述疾病的預防診斷、觀察病情及判斷預后都有重要價值。
9、檢驗原理：將稀釋后的樣本加入到含有組織因子、磷脂、氯化鈣、活化的蛋白c和乏蛋白s血漿的混合試劑中，測得血漿凝固時間來確定蛋白s的活性。蛋白s(ps)作為抗凝血酶活化蛋白c的輔因子，參與活性促凝物質fva和fviiia的蛋白水解過程。ps是apc發揮抗凝作用時的重要輔助因子，在蛋白s存在時，apc與ps形成apc/ps復合體，其通過選擇性地降解fva和fviiia，使二者失活，喪失其促凝作用。
10、一些實施方案中，所述蛋白s試劑中，凍干保護劑由聚乙二醇6000、甘氨酸和蔗糖組成。本專利技術使用該凍干保護劑制備蛋白s試劑，明顯提高了試劑的穩定性，且試劑表面光滑。
11、本專利技術中，所述磷脂為兔腦磷脂，相比于植物磷脂(大豆磷脂)和合成磷脂，兔腦磷脂更接近人體內所需磷脂(動物磷脂)，與其他試劑組分合理搭配，最終使得檢測更加準確。
12、本專利技術中，所述蛋白s試劑中，緩沖液為三(羥甲基)氨基甲烷緩沖液，相較于其它緩沖液，三(羥甲基)氨基甲烷緩沖液具有更強的緩沖能力。
13、本專利技術中，所述蛋白s試劑中，所使用的組織因子為重組人組織因子，充分還原人體反應體系。
14、本專利技術所述蛋白s試劑中，對防腐劑的種類沒有特殊限制，所述防腐劑包括但不限于苯甲酸鈉。在本專利技術的具體實施例中，所述防腐劑為苯甲酸鈉。
15、一些具體實施例中，本專利技術蛋白s試劑具體為：
16、兔腦磷脂0.08g/l、三(羥甲基)氨基甲烷6.057g/l、組織因子0.08g/l、活化蛋白c0.05g/l、聚乙二醇600020g/l、甘氨酸30g/l、蔗糖15g/l、苯甲酸鈉3g/l，ph為8.0(即a13所示的蛋白s試劑)。
17、本專利技術還提供了用于血漿中蛋白s活性檢測的試劑盒，包括本專利技術所述的蛋白s試劑、氯化鈣試劑、蛋白s乏血漿試劑和稀釋液。
18、一些實施方案中，所述蛋白s乏血漿試劑為包含苯甲酸鈉和甘露醇的蛋白s活性小于1％的血漿，ph為7.5～8。進一步的，所述蛋白s乏血漿試劑為包含苯甲酸鈉2～3g/l和甘露醇1～3.5g/l的蛋白s含量小于1％的血漿。一些具體實施例中，所述蛋白s乏血漿試劑選自如下之一：
19、蛋白s乏血漿試劑配方c1：苯甲酸鈉3g/l和甘露醇1g/l，ph為8.0。
20、蛋白s乏血漿試劑配方c2：苯甲酸鈉3g/l和甘露醇3.5g/l，ph為8.0。
21、一些實施方案中，所述稀釋液包括水、氯化鈉和苯甲酸鈉，ph為7.5～8。進一步的，所述稀釋液包括水、氯化鈉5～9g/l和苯甲酸鈉2～5g/l。具體的，所述苯甲酸鈉的濃度具體可為2g/l、3g/l、4g/l、5g/l；一些具體實施例中，所述稀釋液選自如下之一：
22、稀釋液配方d1：氯化鈉5g/l、苯甲酸鈉3g/l，ph為8.0。
23、稀釋液配方d2：本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.蛋白S試劑，其特征在于，包括磷脂、三(羥甲基)氨基甲烷、組織因子、活化蛋白C、凍干保護劑和防腐劑；
2.根據權利要求1所述的蛋白S試劑，其特征在于，由水和如下濃度的組分組成：
3.根據權利要求2所述的蛋白S試劑，其特征在于，所述組織因子為重組人組織因子；所述活化蛋白C為人源純化的活化蛋白C；所述防腐劑為苯甲酸鈉。
4.根據權利要求1～3任一項所述的蛋白S試劑，其特征在于，由水和如下組分組成：
5.根據權利要求1～4任一項所述的蛋白S試劑，其特征在于，其pH為7.0～8.5。
6.一種用于血漿中蛋白S活性檢測的試劑盒，其特征在于，包括權利要求1～4任一項所述的蛋白S試劑、氯化鈣試劑、蛋白S乏血漿試劑和稀釋液。
7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，
8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，
9.權利要求1～5任一項所述的蛋白S試劑和權利要求6～8任一項所述的試劑盒在血漿中蛋白S活性檢測中的應用。
10.一種檢測血漿中S蛋白活性的方法，其特征在于，利用權利要求1～
...【技術特征摘要】
1.蛋白s試劑，其特征在于，包括磷脂、三(羥甲基)氨基甲烷、組織因子、活化蛋白c、凍干保護劑和防腐劑；
2.根據權利要求1所述的蛋白s試劑，其特征在于，由水和如下濃度的組分組成：
3.根據權利要求2所述的蛋白s試劑，其特征在于，所述組織因子為重組人組織因子；所述活化蛋白c為人源純化的活化蛋白c；所述防腐劑為苯甲酸鈉。
4.根據權利要求1～3任一項所述的蛋白s試劑，其特征在于，由水和如下組分組成：
5.根據權利要求1～4任一項所述的蛋白s試劑，其特征在于，其ph為7.0～8.5。
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【專利技術屬性】
技術研發人員：崔莎莎，吳小云，叢海燕，趙玉燕，陸露，
申請(專利權)人：創凝生物技術北京有限公司，
類型：發明
國別省市：
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