一種從鳳仙花中提取分離山奈酚的方法技術(shù)

一種從鳳仙花中提取分離山奈酚的方法。該方法是關(guān)于中藥有效成分的提取分離方法，具體涉及一種山奈酚的提取分離方法。該方法是針對(duì)目前山奈酚制備過(guò)程復(fù)雜、成本較高的現(xiàn)狀而建立的。該方法具體步驟為首先將鳳仙花提取得到的總提取物，然后經(jīng)過(guò)大孔樹(shù)脂純化得到山奈酚粗品，最后用柱層析和重結(jié)晶方法制備得到山奈酚的純品。該方法能有效從鳳仙花中分離得到山奈酚單體，為含山奈酚中成藥的質(zhì)量檢測(cè)提供對(duì)照品，并有利于山奈酚活性的開(kāi)發(fā)。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)是關(guān)于中藥有效成分的提取分離方法，具體涉及一種山奈酚的提取分離方法。
技術(shù)介紹
山奈酚為一種黃酮醇類化合物。該化合物具有多種藥理活性，如抗氧化作用、抗炎 作用等，存在于多種中藥及其相關(guān)制劑中，如銀杏及其提取物和制劑、桑葉、白蕊草、石韋、 菟絲子、羅漢果、金錢(qián)通淋顆粒等。山奈酚的含量是上述中藥和制劑質(zhì)量的重要檢測(cè)指標(biāo)， 因此，在實(shí)際工作中需要提取分離純度高的山奈酚作為對(duì)照品。同時(shí)，山奈酚作為一種具有 多種藥理活性的成分，在對(duì)于其活性進(jìn)行深入研究的過(guò)程中，如何簡(jiǎn)化山奈酚的提取制備 工藝、提高分離純度，是制劑工藝研究過(guò)程的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。目前，報(bào)道的山奈酚的制備方法有如下方法1)國(guó)際專利 TO2006/093368A1 MANUFACTURING METHOD 0FKAEMPFER0L”，公開(kāi)了 從茶葉的種子和葉子中提取山奈酚的方法，該方法主要公開(kāi)了主要采用酸、堿或酶對(duì)茶葉 種子和葉子中含量較高的兩種山奈酚的糖苷，即camelliaside A、camelliaside B，進(jìn)行水 解得到山奈酚的方法。2)文獻(xiàn)報(bào)道以銀杏為原料制備山奈酚的方法(蘇靜、談鋒、謝峻等，循環(huán)高速逆 流色譜從銀杏葉提取物中制備異鼠李素和山奈酚，西南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2009， 31 (10) 96-100)。該方法的主要過(guò)程是銀杏葉超聲提取、提取液氯仿凈化、樹(shù)脂富集黃酮成 分、總黃酮用甲醇-25%鹽酸(4 1)混合液水解、3次HSCCC(高速逆流色譜)分離，得到 山奈酚。3)文獻(xiàn)報(bào)道的另外一種以銀杏為原料制備山奈酚的方法(徐濤、潘見(jiàn)、袁傳勛等， 液相色譜法制備山柰酚單體，安徽化工，2005，(2) :54-55)。該方法取銀杏提取物，正丁醇萃 取、正丁醇萃取液濃縮、濃縮物用3M的鹽酸水解、水解液離心、上清液用樹(shù)脂富集、得到山 奈酚的粗品、粗品再用制備高效液相色譜法進(jìn)行分離、冷凍干燥得到山奈酚。可見(jiàn)，上述山奈酚的制備方法較為繁瑣，具體體現(xiàn)在1)需要采用水解方法使山 奈酚的糖苷轉(zhuǎn)變?yōu)樯侥畏樱?)山奈酚的制備中對(duì)設(shè)備的要求嚴(yán)格，使山奈酚的制備成本上 升。因此，需要尋找一種更為方便快捷的制備山奈酚的方法。鳳仙花為鳳仙花屬植物鳳仙花Impatiens balsamina L.的干燥花瓣，具有活血 通經(jīng)、利尿止痛的作用，其中含有多種黃酮類化合物，文獻(xiàn)顯示山奈酚為其中含量較高的 黃酮類成分(胡喜蘭、韓照祥、劉玉芬等，鳳仙花不同提取物中山奈酚的測(cè)定，分析實(shí)驗(yàn)室， 2007,26(5) :33-35)。因此以鳳仙花的干燥花瓣為原料分離制備山奈酚，相對(duì)于上述采用 水解的方法，方法簡(jiǎn)便。基于此，文獻(xiàn)報(bào)道了相應(yīng)的從鳳仙花中制備山奈酚的方法(胡喜 蘭、程青芳、尹福軍等，鳳仙花中山萘酚的提取、分離與純化，時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010，21 (4) 932-933)。該方法的具體步驟是1)取鳳仙花的干燥花瓣，置于索式提取器中，石油醚浸泡過(guò)夜，后回流至提取液無(wú) 色；2)再將提取過(guò)的花瓣，置于索式提取器中，乙酸乙酯浸泡過(guò)夜，后回流至提取液無(wú) 色；3)乙酸乙酯提取液回收溶劑，得山奈酚的粗提物；4)采用葡聚糖凝膠(LH-20)進(jìn)行分離，收集含山奈酚的流分，并濃縮得相應(yīng)山奈 酚精提物；5)采用制備高效液相色譜對(duì)山奈酚精提物進(jìn)行分離制備山奈酚。該方法山奈酚制備成本較高，不合適大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。原因有1)葡聚糖凝膠 (LH-20)價(jià)格較貴；2)制備高效液相儀器昂貴，同時(shí)制備山奈酚的量有限。另外，該方法步 驟較多，過(guò)程較為復(fù)雜。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種以鳳仙花為原料，提取分離山 奈酚的方法。該方法相對(duì)于已有方法更為簡(jiǎn)便，適合工業(yè)化生產(chǎn)。本專利技術(shù)的目的是通過(guò)如下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)A 取干燥的鳳仙花花瓣，適當(dāng)粉碎，加入10 100%乙醇或甲醇進(jìn)行提取，提取液 濃縮回收溶劑，得總提取物；B 總提取物加水適當(dāng)分散，上大孔樹(shù)脂吸附柱，先用水溶液洗脫除雜，再用10 40%乙醇洗脫除雜，最后用40 100%的乙醇洗脫并收集該部分洗脫液，濃縮回收溶劑，得 山奈酚粗品；C 取聚酰胺濕法裝柱，將30 100%乙醇溶解的山奈酚粗品溶液加入柱頂，用 30 100%乙醇洗脫，收集洗脫液，薄層檢識(shí)，合并含有山奈酚的流份，回收溶劑，得山奈酚 的精品；D 取山奈酚的精品，于甲醇或乙醇與水組成的混合溶劑中重結(jié)晶，過(guò)濾，干燥，得 山奈酚純品。上述方法中步驟A中的提取方式為煎煮、加熱回流、超聲提取、微波提取、高壓提 取中的任意一種。上述方法中步驟A的方法為取干燥的鳳仙花花瓣25重量份，加入濃度為40 100%的乙醇或甲醇400 900體積份，加熱回流提取0. 5 2小時(shí)，過(guò)濾，藥渣以同樣的方 法先后提取2 5次，合并提取液，藥渣棄去；提取液回收乙醇，得稠膏，即總提取物。上述方法中步驟A的優(yōu)選方法為取干燥的鳳仙花花瓣25重量份，加入濃度為 80%的乙醇750體積份，加熱回流提取1小時(shí)，過(guò)濾，藥渣以同樣的方法先后提取3次，合并 提取液，藥渣棄去，提取液回收乙醇，得稠膏，即總提取物，6. 8重量份。上述方法中步驟B中大孔吸附樹(shù)脂為非極性、弱極性或中等極性中的任意一種。上述方法中步驟B的方法為取總提取物，加藥材量5 9倍體積份的水稀釋，上 非極性、弱極性或中等極性中的任意一種大孔吸附樹(shù)脂柱，樹(shù)脂量為藥材量的6 10倍體 積份，徑高比為1 5 8，吸附流速2 4BV/h ；先用水洗脫5 13BV，流速2 5BV/h，再用10 40%的乙醇洗脫5 10BV，流速2 5BV/h;最后用40 100%的乙醇洗脫2 5BV,流速2 5BV/h，收集40 100%的乙醇洗脫液，回收溶劑，得山奈酚粗品。上述方法中步驟B的優(yōu)選方法為取上述總提取物6. 8重量份，加藥材量6倍體積 份的水稀釋，上DlOl型大孔吸附樹(shù)脂柱，樹(shù)脂量為藥材量的8倍體積份，徑高比為1 6， 吸附流速3BV/h，先用水洗脫9BV，流速3BV/h，再用30%的乙醇洗脫9BV，流速3BV/h，最后 用50%的乙醇洗脫4BV，流速2BV/h，收集50%的乙醇洗脫液，回收溶劑，得0. 55重量份山 奈酚粗品。上述方法中步驟C的方法為取山奈酚粗品，用藥材量0. 1 1倍體積份50 90 %的乙醇充分溶解，得上樣液，另取聚酰胺濕法裝柱，將上樣液加入柱頂，徑高比為 1 8 15，以50 100%的乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，薄層檢識(shí)，合并含有山奈酚的流 份，回收溶劑得山奈酚的精品。上述方法中步驟C優(yōu)選的方法為取山奈酚粗品0. 55重量份，用藥材量0. 2倍體 積份70%的乙醇充分溶解，得上樣液，另取藥材量0. 4倍重量份的80 100目聚酰胺，用 70%乙醇濕法裝柱，徑高比為1 10，將上樣液加入柱頂，以70%的乙醇水溶液洗脫，收集 洗脫液，薄層檢識(shí)，合并含有山奈酚的流份，回收溶劑得0. 25重量份山奈酚的精品。上述方法中步驟D的方法為取山奈酚的精品，于2 8 4 9甲醇-水或2 8 4 9乙醇-水的混合溶劑中進(jìn)行重結(jié)晶，過(guò)濾，干燥得山奈酚純品。上述方法中步驟D優(yōu)選的方法為取0.25重量份山奈酚的精品，于3 7乙醇-水 混合溶劑中重結(jié)晶，過(guò)濾，干燥得0. 15重量份山奈酚純品。采用本方法提取制備山奈酚，提取工藝本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種山奈酚的提取分離方法，其特征在于包括如下步驟：　　Ａ：取干燥的鳳仙花花瓣，適當(dāng)粉碎，加入１０～１００％乙醇或甲醇進(jìn)行提取，提取液濃縮回收溶劑，得總提取物；　　Ｂ：總提取物加水適當(dāng)分散，上大孔樹(shù)脂吸附柱，先用水溶液洗脫除雜，再用１０～４０％乙醇洗脫除雜，最后用４０～１００％的乙醇洗脫并收集４０～１００％的乙醇洗脫液，濃縮回收溶劑，得山奈酚粗品；　　Ｃ：取聚酰胺濕法裝柱，將３０～１００％乙醇溶解的山奈酚粗品溶液加入柱頂，用３０～１００％乙醇洗脫，收集洗脫液，薄層檢識(shí)，合并含有山奈酚的流份，回收溶劑，得山奈酚的精品；　　Ｄ：取山奈酚的精品，于甲醇或乙醇與水組成的混合溶劑中重結(jié)晶，過(guò)濾，干燥，得山奈酚純品。

【技術(shù)特征摘要】
一種山奈酚的提取分離方法，其特征在于包括如下步驟A取干燥的鳳仙花花瓣，適當(dāng)粉碎，加入10～100％乙醇或甲醇進(jìn)行提取，提取液濃縮回收溶劑，得總提取物；B總提取物加水適當(dāng)分散，上大孔樹(shù)脂吸附柱，先用水溶液洗脫除雜，再用10～40％乙醇洗脫除雜，最后用40～100％的乙醇洗脫并收集40～100％的乙醇洗脫液，濃縮回收溶劑，得山奈酚粗品；C取聚酰胺濕法裝柱，將30～100％乙醇溶解的山奈酚粗品溶液加入柱頂，用30～100％乙醇洗脫，收集洗脫液，薄層檢識(shí)，合并含有山奈酚的流份，回收溶劑，得山奈酚的精品；D取山奈酚的精品，于甲醇或乙醇與水組成的混合溶劑中重結(jié)晶，過(guò)濾，干燥，得山奈酚純品。2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的提取分離方法，其特征是所述步驟A中提取方式為煎煮、 加熱回流、超聲提取、微波提取、高壓提取中的任意一種。3.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的提取分離方法，其特征是所述步驟B中大孔吸附樹(shù)脂為 非極性、弱極性或中等極性中的任意一種。4.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的提取分離方法，其特征是該方法包括如下步驟A 取干燥的鳳仙花花瓣25重量份，加入濃度為40 100%的乙醇或甲醇400 900 體積份，加熱回流提取0. 5 2小時(shí)，過(guò)濾，藥渣以同樣的方法先后提取2 5次，合并提取 液，藥渣棄去；提取液回收乙醇，得稠膏，即總提取物；B 取總提取物，加藥材量5 9倍體積份的水稀釋，上AB-8、DlOl、D4020、HPD100中 的任意一種大孔吸附樹(shù)脂柱，樹(shù)脂量為藥材量的6 10倍體積份，徑高比為1 5 8，吸 附流速2 4BV/h，先用水洗脫5 13BV，流速2 5BV/h，再用10 40%的乙醇洗脫5 10BV,流速2 5BV/h，最后用40 100%的乙醇洗脫2 5BV，流速2 5BV/...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：姜華，李軍，柴元武，劉璐，李曉明，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：河南科技大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：41[中國(guó)|河南]