【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及醫(yī)學(xué)和生物化學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及一種膽汁酸替代途徑中關(guān)鍵蛋白網(wǎng)絡(luò)作為nash和代謝綜合征生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)的研究及應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、非酒精性脂肪性肝炎(nash)是非酒精性脂肪肝病(nafld)的一種進(jìn)展形式，近年來成為全球流行的疾病。nash的特點(diǎn)是肝小葉炎癥、肝細(xì)胞氣球樣變性、脂肪變性和不同程度的纖維化，nafld的發(fā)展和進(jìn)展受到諸多異質(zhì)性因素的驅(qū)動(dòng)，包括胰島素抵抗、脂肪沉積、肝星狀細(xì)胞活化和炎癥，在nafld中，一個(gè)常見的代謝表型是血清膽汁酸組成的顯著變化。
2、膽汁酸是在肝臟中從膽固醇合成并分泌到膽汁中的，對(duì)于調(diào)節(jié)葡萄糖、脂質(zhì)和能量代謝至關(guān)重要，研究表明，血漿中次級(jí)膽汁酸減少，而總初級(jí)膽汁酸增加與nafld的組織學(xué)嚴(yán)重程度相關(guān)，膽汁酸通過兩條肝臟途徑在法尼索酮x受體(fxr)的調(diào)控下合成，經(jīng)典途徑(bcp)由關(guān)鍵酶cyp7a1啟動(dòng)，主要將膽固醇轉(zhuǎn)化為膽酸(ca)，而膽汁酸替代途徑(bap)，涉及cyp27a1和cyp7b1的作用，產(chǎn)生無12-羥基的膽汁酸衍生物，在nash患者中，研究指出共軛膽汁酸水平升高，初級(jí)膽汁酸濃度增加，特別是ca與cdca比例升高。
3、盡管有這些見解，但膽汁酸替代途徑在代謝調(diào)控中的復(fù)雜作用和異質(zhì)性尚未完全理解，當(dāng)前對(duì)nash的診斷和治療方法存在局限性，特別是在精確識(shí)別疾病發(fā)展階段和選擇有效治療策略方面，因此，開發(fā)新的診斷生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)對(duì)于改善nash和相關(guān)代謝綜合征的管理至關(guān)重要。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本
2、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)采用了如下技術(shù)方案：
3、一種膽汁酸替代途徑中關(guān)鍵蛋白網(wǎng)絡(luò)作為nash和代謝綜合征生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)的研究及應(yīng)用，包括雄性c57bl/6小鼠，所述雄性c57bl/6小鼠通過西方飲食和四氯化碳誘導(dǎo)(wd+ccl4)喂養(yǎng)10周建立非酒精性脂肪肝炎小鼠模型，所述模型包括模型組和對(duì)照組。
4、作為一種優(yōu)選方案，所述模型組(wd+ccl4)連續(xù)給予西方飲食飼料、含糖飲用水，每周每只小鼠腹腔注射一次玉米油溶液，所述對(duì)照組(con)給予spf維持飼料、普通飲用水，每周每只小鼠腹腔注射一次同體積玉米油。
5、作為一種優(yōu)選方案，所述西方飲食飼料包括27.4％脂肪，40.1％蔗糖和2％膽固醇，所述含糖飲用水包括含23.1g/l果糖和18.9g/l葡萄糖。
6、作為一種優(yōu)選方案，包括生化指標(biāo)測定，所述生化指標(biāo)測定包括利用血生化儀或商業(yè)試劑盒測定小鼠血漿和肝組織中生化指標(biāo)的含量和使用he染色，天狼猩紅染色和油紅o染色對(duì)模型小鼠肝臟進(jìn)行病理鑒定分析。
7、作為一種優(yōu)選方案，包括超高效液相色譜-質(zhì)譜(uplc-ms/ms)儀，所述超高效液相色譜-質(zhì)譜(uplc-ms/ms)儀上開發(fā)了能夠同時(shí)鑒定15種關(guān)鍵膽汁酸的靶向膽汁酸代謝組學(xué)方法，通過靶向代謝組學(xué)方法，在飲食和化學(xué)誘導(dǎo)的nash小鼠模型中，非12-oh膽汁酸，尤其是來自bap的tcdca水平受到抑制，與肝損傷標(biāo)志物(alt、ast和tc)的增加呈負(fù)相關(guān)。
8、作為一種優(yōu)選方案，所述膽汁酸的合成主要通過兩個(gè)途徑，所述途徑分為經(jīng)典途徑和替代途徑，所述經(jīng)典途徑主要由cyp7a1和cyp8b1催化，所述替代途徑主要由cyp27a1和cyp7b1催化。
9、作為一種優(yōu)選方案，包括納米液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(nanolc-ms/ms)和蛋白質(zhì)，所述蛋白質(zhì)提取與wd+ccl4模型及其對(duì)照組小鼠的肝組織，通過蛋白質(zhì)組學(xué)分析結(jié)合rt-qpcr和西方印跡法，發(fā)現(xiàn)小鼠肝臟中fxr、cyp27a1和cyp7b1的表達(dá)減少，而lxr和srebp-1c的表達(dá)上調(diào)，表明抑制的bap受到fxr和lxr信號(hào)的調(diào)控，從而增強(qiáng)了nash的易感性，此外，bap相互作用的網(wǎng)絡(luò)相關(guān)分析主要涉及胰島素抵抗、脂質(zhì)和氨基酸代謝障礙，涉及22個(gè)關(guān)鍵蛋白(尤其是hk1、acadsb、pklr、insr、ldlr、cyp27a1、cyp7b1)，為nash提供了有前景的治療靶點(diǎn)。
10、作為一種優(yōu)選方案，包括geo數(shù)據(jù)庫收集nash相關(guān)的數(shù)據(jù)集，其特征在于，所述geo數(shù)據(jù)庫收集nash相關(guān)的數(shù)據(jù)集，包含健康對(duì)照組和nash患者組，膽汁酸替代途徑中的關(guān)鍵蛋白，特別是cyp7b1及其共調(diào)節(jié)蛋白，可能在nash和代謝綜合征的發(fā)展中扮演重要角色，能夠作為生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。
11、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)的有益效果是：
12、1、發(fā)現(xiàn)hk1、acadsb、pklr、insr、ldlr、cyp27a1、cyp7b1等蛋白的表達(dá)量與非酒精性脂肪肝炎存在顯著相關(guān)性，并發(fā)現(xiàn)hk1、acadsb、pklr、insr、ldlr、cyp27a1、cyp7b1的基因和蛋白的過表達(dá)或低表達(dá)能夠顯著導(dǎo)致膽汁酸替代途徑失調(diào)并引起非酒精性脂肪肝炎，因此可知，hk1、acadsb、pklr、insr、ldlr、cyp27a1、cyp7b1等蛋白在促進(jìn)非酒精性脂肪肝炎發(fā)生發(fā)展的過程中具有重要的作用；
13、2、為非酒精性脂肪肝炎發(fā)病機(jī)制的研究和后續(xù)治療靶點(diǎn)提供了新的思路和參考依據(jù)。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種膽汁酸替代途徑中關(guān)鍵蛋白網(wǎng)絡(luò)作為NASH和代謝綜合征生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)的研究及應(yīng)用，包括雄性C57BL/6小鼠，其特征在于，所述雄性C57BL/6小鼠通過西方飲食和四氯化碳誘導(dǎo)(WD+CCl4)喂養(yǎng)10周建立非酒精性脂肪肝炎小鼠模型，所述模型包括模型組和對(duì)照組。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種膽汁酸替代途徑中關(guān)鍵蛋白網(wǎng)絡(luò)作為NASH和代謝綜合征生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)的研究及應(yīng)用，其特征在于，所述模型組(WD+CCl4)連續(xù)給予西方飲食飼料、含糖飲用水，每周每只小鼠腹腔注射一次玉米油溶液，所述對(duì)照組(CON)給予SPF維持飼料、普通飲用水，每周每只小鼠腹腔注射一次同體積玉米油。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種膽汁酸替代途徑中關(guān)鍵蛋白網(wǎng)絡(luò)作為NASH和代謝綜合征生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)的研究及應(yīng)用，其特征在于，所述西方飲食飼料包括27.4％脂肪，40.1％蔗糖和2％膽固醇，所述含糖飲用水包括含23.1g/L果糖和18.9g/L葡萄糖。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種膽汁酸替代途徑中關(guān)鍵蛋白網(wǎng)絡(luò)作為NASH和代謝綜合征生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)的研究及應(yīng)用，
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種膽汁酸替代途徑中關(guān)鍵蛋白網(wǎng)絡(luò)作為NASH和代謝綜合征生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)的研究及應(yīng)用，包括超高效液相色譜-質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)儀，其特征在于，所述超高效液相色譜-質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)儀上開發(fā)了能夠同時(shí)鑒定15種關(guān)鍵膽汁酸的靶向膽汁酸代謝組學(xué)方法。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種膽汁酸替代途徑中關(guān)鍵蛋白網(wǎng)絡(luò)作為NASH和代謝綜合征生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)的研究及應(yīng)用，其特征在于，所述膽汁酸的合成主要通過兩個(gè)途徑，所述途徑分為經(jīng)典途徑和替代途徑，所述經(jīng)典途徑主要由Cyp7a1和Cyp8b1催化，所述替代途徑主要由Cyp27a1和Cyp7b1催化。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種膽汁酸替代途徑中關(guān)鍵蛋白網(wǎng)絡(luò)作為NASH和代謝綜合征生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)的研究及應(yīng)用，包括納米液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(nanoLC-MS/MS)和蛋白質(zhì)，其特征在于，所述蛋白質(zhì)提取與WD+CCl4模型及其對(duì)照組小鼠的肝組織。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種膽汁酸替代途徑中關(guān)鍵蛋白網(wǎng)絡(luò)作為NASH和代謝綜合征生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)的研究及應(yīng)用，包括GEO數(shù)據(jù)庫收集NASH相關(guān)的數(shù)據(jù)集，其特征在于，所述GEO數(shù)據(jù)庫收集NASH相關(guān)的數(shù)據(jù)集，包含健康對(duì)照組和NASH患者組。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種膽汁酸替代途徑中關(guān)鍵蛋白網(wǎng)絡(luò)作為nash和代謝綜合征生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)的研究及應(yīng)用，包括雄性c57bl/6小鼠，其特征在于，所述雄性c57bl/6小鼠通過西方飲食和四氯化碳誘導(dǎo)(wd+ccl4)喂養(yǎng)10周建立非酒精性脂肪肝炎小鼠模型，所述模型包括模型組和對(duì)照組。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種膽汁酸替代途徑中關(guān)鍵蛋白網(wǎng)絡(luò)作為nash和代謝綜合征生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)的研究及應(yīng)用，其特征在于，所述模型組(wd+ccl4)連續(xù)給予西方飲食飼料、含糖飲用水，每周每只小鼠腹腔注射一次玉米油溶液，所述對(duì)照組(con)給予spf維持飼料、普通飲用水，每周每只小鼠腹腔注射一次同體積玉米油。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種膽汁酸替代途徑中關(guān)鍵蛋白網(wǎng)絡(luò)作為nash和代謝綜合征生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)的研究及應(yīng)用，其特征在于，所述西方飲食飼料包括27.4％脂肪，40.1％蔗糖和2％膽固醇，所述含糖飲用水包括含23.1g/l果糖和18.9g/l葡萄糖。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種膽汁酸替代途徑中關(guān)鍵蛋白網(wǎng)絡(luò)作為nash和代謝綜合征生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)的研究及應(yīng)用，包括生化指標(biāo)測定，其特征在于，所述生化指標(biāo)測定包括利用血生化儀或商業(yè)試劑盒測定小鼠血漿和肝組織中生化指標(biāo)的含量和使用he染色，天狼猩紅染色和油紅o染色對(duì)模型小鼠...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李大鵬，劉昌海，馮閆茹玉，張禾，干偉，楊倩，楊景濤，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：四川大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
還沒有人留言評(píng)論。發(fā)表了對(duì)其他瀏覽者有用的留言會(huì)獲得科技券。