【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及醫藥，具體是用于檢測馬爾堡病毒的高效引物組、試劑盒及方法。
技術介紹
1、馬爾堡病毒是一種毒力較強的病毒，可引起病毒性出血熱。這種病毒可以通過蝙蝠傳播，也可以通過猴子來傳染給人類。當人體被感染后，身體中的體液和分泌物都有可能帶有病毒，因而會傳播給其他的人。被這種病毒感染后，可能會出現一系列臨床癥狀，其中主要為發熱，并且以高熱為主，伴有頭痛癥狀，而且疼痛非常劇烈，還會有肌肉疼痛，病情嚴重的患者可以有出血的表現。
2、現有技術中，馬爾堡病毒病的檢查項目包括：血涂片、淀粉酶、凝血酶原時間(pt)、白細胞數、血液電解質檢查、間接免疫熒光試驗。其中，白細胞數明顯降低，血涂片中可見不典型的漿細胞樣淋巴細胞和多形核白細胞并伴有獲得性pelger?huet細胞核異常。血小板減少，血沉降低。天冬氨酸轉氨酶、丙氨酸轉氨酶和淀粉酶可升高。尿素氮升高，蛋白和鉀降低。凝血酶原時間延長。還可以用細胞培養和動物接種分離馬爾堡病毒。用免疫熒光法檢測特異性抗體。也有用雙抗夾心法檢測病毒抗原和pcr技術檢測病毒核酸，但這些檢查必須在p4級實驗室進行，以防止感染擴散。
技術實現思路
1、本專利技術提供了用于檢測馬爾堡病毒的高效引物組、試劑盒及方法，通過臨床樣本驗證了本專利技術提供的引物組擴增效率為122.2％，對于優化馬爾堡病毒的臨床篩查或科學研究，具有重要的意義和應用價值。
2、為達此目的，本專利技術提供如下的技術方案：
3、本專利技術的第一個方面，提供了一種用于檢測
4、本專利技術中，
5、f1(seq?id?no.5)：atgatgaggacctcgcaacat；
6、r1(seq?id?no.6)：tgggtggcattgttgatgaa；
7、p1(seq?id?no.7)：tccggagaacgagaaccccacaca。
8、優選的，在反應體系中，正向引物序列、反向引物序列或探針序列的濃度均為0.1-1μmol/l。
9、本專利技術的第二個方面，提供了一種用于檢測馬爾堡病毒的試劑盒，包括：正向引物序列seq?id?no.5、反向引物序列seq?id?no.6和探針序列seq?id?no.7。
10、優選的，還包括5*buffer、mg2+、dntp、taq酶和逆轉錄體系。
11、優選的，正向引物序列seq?id?no.5、反向引物序列seq?id?no.6和探針序列seqid?no.7的初始濃度均為10um。
12、本專利技術的第三個方面，提供了一種非診斷目的檢測馬爾堡病毒的方法，包括以下步驟：
13、s1、提取樣本總dna；
14、s2、加入5*buffer、mg2+、dntp、taq酶、逆轉錄體系、水、正向引物、反向引物和探針，其中，正向引物序列seq?id?no.5、反向引物序列seq?id?no.6和探針序列seq?id?no.7的濃度均為10um；
15、s3、將反應體系進行qpcr擴增。
16、優選的，步驟s2中，正向引物序列、反向引物序列或探針序列的終濃度均為0.1-1μmol/l。
17、優選的，步驟s3中，qpcr擴增的反應條件為：熱蓋100-105℃、逆轉錄40-42℃、預熱90-95℃、變性90-95℃、退火55-60℃、延伸70-72℃，變性、退火和延伸共循環40次。
18、優選的，步驟s2中的反應體系為5*buffer?5ul、mg2+1.25ul、dntp?0.5ul、f引物(10um)0.3ul、r引物(10um)0.35ul、探針(10um)0.3ul、taq酶0.35ul、逆轉錄體系1ul、h2o10.35ul、樣本5ul。
19、優選的，步驟s3中，qpcr擴增的反應條件為：
20、
21、
22、循環變性、退火和延伸共循環40次。
23、與現有技術相比，本專利技術有益效果及顯著進步在于：本專利技術篩選了大量用于檢測馬爾堡病毒的引物組，最終篩選出了擴增效率為122.2％、擁有更為標準的擴增曲線、更高的靈敏度和低限檢測的引物組。
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1.一種用于檢測馬爾堡病毒的高效引物組，其特征在于，包括：正向引物序列SEQ?IDNO.5、反向引物序列SEQ?ID?NO.6和探針序列SEQ?ID?NO.7。
2.如權利要求1所述的一種用于檢測馬爾堡病毒的高效引物組，其特征在于，在反應體系中，正向引物序列、反向引物序列或探針序列的濃度均為0.1-1μmol/L。
3.一種用于檢測馬爾堡病毒的試劑盒，其特征在于，包括：正向引物序列SEQ?ID?NO.5、反向引物序列SEQ?ID?NO.6和探針序列SEQ?ID?NO.7。
4.如權利要求3所述的一種用于檢測馬爾堡病毒的試劑盒，其特征在于，還包括5*buffer、Mg2+、dNTP、Taq酶和逆轉錄體系。
5.如權利要求3所述的一種用于檢測馬爾堡病毒的試劑盒，其特征在于，正向引物序列SEQ?ID?NO.5、反向引物序列SEQ?ID?NO.6和探針序列SEQ?ID?NO.7的初始濃度均為10uM。
6.一種非診斷目的檢測馬爾堡病毒的方法，其特征在于，包括以下步驟：
7.如權利要求6所述的一種非診斷目的檢測馬爾堡病
8.如權利要求6所述的一種非診斷目的檢測馬爾堡病毒的方法，其特征在于，步驟S3中，qPCR擴增的反應條件為：熱蓋100-105℃、逆轉錄40-42℃、預熱90-95℃、變性90-95℃、退火55-60℃、延伸70-72℃，變性、退火和延伸共循環40次。
...【技術特征摘要】
1.一種用于檢測馬爾堡病毒的高效引物組，其特征在于，包括：正向引物序列seq?idno.5、反向引物序列seq?id?no.6和探針序列seq?id?no.7。
2.如權利要求1所述的一種用于檢測馬爾堡病毒的高效引物組，其特征在于，在反應體系中，正向引物序列、反向引物序列或探針序列的濃度均為0.1-1μmol/l。
3.一種用于檢測馬爾堡病毒的試劑盒，其特征在于，包括：正向引物序列seq?id?no.5、反向引物序列seq?id?no.6和探針序列seq?id?no.7。
4.如權利要求3所述的一種用于檢測馬爾堡病毒的試劑盒，其特征在于，還包括5*buffer、mg2+、dntp、taq酶和逆轉錄體系。
5.如權利要求3所述的一...
【專利技術屬性】
技術研發人員：龍翔，譚淼，馬小娟，袁青，
申請(專利權)人：蘇州海苗生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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