【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
技術介紹
1、生物制劑諸如蛋白質、肽和核酸是用于治療多種疾病和障礙的有希望的方法。特別地，寡核苷酸諸如反義化合物的治療應用非常廣泛，因為這些化合物可用針對幾乎任何靶基因或基因組區段的任何核苷酸序列來合成。然而，質膜在藥物發現和治療中都提出了重大挑戰，尤其是對于治療劑諸如生物制劑。例如，有關在治療中使用基于寡核苷酸的生物制劑的主要問題是當全身施用時它們獲得進入細胞內區室的能力有限。寡核苷酸化合物的細胞內遞送可通過使用載體體系(諸如聚合物、陽離子脂質體)或通過構建體的化學修飾(例如通過膽固醇分子的共價附接)來促進。然而，細胞內遞送效率仍然很低。
2、一種破壞膜屏障并將治療劑諸如生物制劑遞送到細胞中的潛在策略是將它們附接到“細胞穿透肽(cpp)”上。經由內吞作用進入細胞的cpp必須從內吞囊泡中排出以便到達胞質溶膠。遺憾的是，已經證明內體膜是這些cpp向細胞質遞送的重要屏障；通常可忽略不計的部分肽逃逸進入細胞內部(參見例如，el-sayed,a等人，aaps?j.，2009年，第11卷：第13-22頁；varkouhi,a?k等人，j.controlled?release，2011年，第151卷：第220-228頁；appelbaum,j?s等人，chem.biol.，2012年，第19卷：第819-830頁)。具有改善特性的環狀cpp(ccpp)已經被描述用于貨物部分的細胞內遞送(美國專利公開號2017/0190743和2017/0355730)。
3、對用于細胞內遞送治療劑，特別是以允許調節該治療劑的組織分
技術實現思路
1、本文描述了用于調節細胞內治療劑的組織分布和/或保留的組合物和方法。已經發現，當包含與治療性部分(tm)連接的細胞穿透肽(cpp)的化合物還包含如本文所述的環外肽(ep)時，該化合物具有改變的組織分布和/或保留。ep通常是含賴氨酸的肽。ep已被鑒定為本領域中先前已知的“核定位信號”(nls)，諸如sv40病毒大t抗原的核定位序列，其最小功能單元是七個氨基酸序列pkkkrkv。在cpp-tm化合物中包含ep可例如改變tm在不同組織(諸如不同類型的肌肉組織或不同類型的中樞神經系統組織)中的表達水平、活性或功能(參見例如，實施例5和7)。在一個實施方案中，化合物鞘內施用，并且調節化合物在cns組織中的組織分布和/或保留。
2、在實施方案中，提供了包含以下部分的化合物：
3、(a)細胞穿透肽(cpp)；
4、(b)治療性部分(tm)；和
5、(c)環外肽(ep)，其中與包含cpp和tm但不含ep的化合物相比，化合物的組織分布或保留被調節。
6、在一個實施方案中，ep與cpp綴合。在一個實施方案中，ep與tm綴合。在一個實施方案中，cpp是環狀細胞穿透肽(ccpp)。在各種實施方案中，治療性部分是蛋白質、多肽、寡核苷酸或小分子。在一個實施方案中，寡核苷酸是反義化合物(ac)。在一個實施方案中，寡核苷酸不是反義化合物(ac)。
7、在實施方案中，治療性化合物包含調節dmd的外顯子2、8、11、17、19、23、29、40、41、42、43、44、45、46、48、49、50、51、52、53、55和59的剪接的ac。在實施方案中，化合物包含調節dmd的外顯子2、8、11、23、43、44、45、50、51、53和55的剪接的ac。在實施方案中，化合物包含調節dmd的外顯子2、23、44或51的剪接的ac。
8、在實施方案中，化合物包含調節cd33的外顯子1、外顯子2、外顯子3、外顯子4、外顯子5、外顯子6、外顯子7a和外顯子7b的剪接的ac。
9、在實施方案中，化合物選自eev-pmo-mdx23-1,2,3、eev-pmo-cd33-1和實施例5的表c中所示的具有本文所示結構的化合物。
10、在實施方案中，提供了包含本文所述的化合物和藥學上可接受的載體的藥物組合物。
11、在實施方案中，提供了包括本文所述的化合物的細胞。
12、本公開還涉及一種調節治療劑在有需要的受試者體內的組織分布或保留的方法，該方法包括施用本公開的化合物。在實施方案中，化合物鞘內施用于受試者，并且化合物調節治療劑在中樞神經系統(cns)組織中的組織分布或保留。在實施方案中，化合物調節治療劑在肌肉組織中的組織分布或保留。
13、本公開還涉及一種治療有需要的受試者的疾病或障礙的方法，該方法包括施用本公開的化合物。在實施方案中，治療劑是反義化合物(ac)，并且該化合物的施用調節靶基因的剪接或表達、降解mrna、穩定mrna或在空間上阻斷mrna。在實施方案中，化合物的施用調節靶前mrna的剪接。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種化合物，所述化合物包含：
2.根據權利要求1所述的化合物，其中所述EP與所述CPP綴合。
3.根據權利要求1所述的化合物，其中所述EP與所述TM綴合。
4.根據權利要求1至3中任一項所述的化合物，其中所述CPP是環狀細胞穿透肽(cCPP)。
5.根據權利要求1至4中任一項所述的化合物，其中所述EP包含至少一個帶正電的氨基酸殘基。
6.根據權利要求5所述的化合物，其中所述EP包含至少一個賴氨酸殘基和/或至少一個精氨酸殘基。
7.根據權利要求5所述的化合物，其中所述EP包含至少一個賴氨酸殘基。
8.根據權利要求5所述的化合物，其中所述EP包含序列PKKKRKV。
9.根據權利要求5所述的化合物，其中所述EP包含選自KK、KR、RR、KKK、KGK、KBK、KBR、KRK、KRR、RKK、RRR、KKKK、KKRK、KRKK、KRRK、RKKR、RRRR、KGKK、KKGK、KKKKK、KKKRK、KBKBK、KKKRKV、PGKKRKV、PKGKRKV、PKKGRKV、PKKKGK
10.根據權利要求1至4中任一項所述的化合物，其中所述EP是核定位信號(NLS)。
11.根據權利要求1至10中任一項所述的化合物，其中所述治療性部分是除反義化合物以外的蛋白質、多肽、小分子或寡核苷酸。
12.根據權利要求1至10中任一項所述的化合物，其中所述治療性部分是反義化合物(AC)。
13.根據權利要求12所述的化合物，其中所述AC包含選自硫代磷酸酯(PS)核苷酸、二氨基磷酸酯嗎啉代核苷酸、鎖核酸(LNA)、肽核酸(PNA)、包含2'-0-甲基(2'-OMe)修飾的主鏈的核苷酸、2'0-甲氧基-乙基(2'-MOE)核苷酸、2',4'-約束乙基(cEt)核苷酸和2'-脫氧-2'-氟-β-D-阿拉伯糖核酸(2'F-ANA)的至少一種修飾的核苷酸或核酸，并且
14.根據權利要求12所述的化合物，其中所述AC包含小干擾RNA(siRNA)、微小RNA(miRNA)、核酶、免疫刺激核酸、反義、antagomir、antimir、微小RNA模擬物、supermir、Ul銜接子、適體或CRISPR基因編輯機制。
15.根據權利要求12至14中任一項所述的化合物，其中所述環肽與所述AC的3'端綴合。
16.根據權利要求12至14中任一項所述的化合物，其中所述環肽與所述AC的5'端綴合。
17.根據權利要求12至14中任一項所述的化合物，其中所述環肽與所述AC的主鏈綴合。
18.根據權利要求12至17中任一項所述的化合物，所述化合物包含將所述環肽與所述AC綴合的接頭。
19.根據權利要求18所述的化合物，其中所述接頭與所述AC的所述5'端共價結合。
20.根據權利要求18所述的化合物，其中所述接頭與所述AC的所述3'端共價結合。
21.根據權利要求18所述的化合物，其中所述接頭與所述AC的所述主鏈共價結合。
22.根據權利要求18至21中任一項所述的化合物，其中所述接頭與所述環肽上的氨基酸殘基的側鏈共價結合。
23.根據權利要求18至22中任一項所述的化合物，其中所述接頭包含二價或三價C1-C50亞烷基，其中1-25個亞甲基基團任選地且獨立地被-N(H)-、-N(C1-C4烷基)-、-N(環烷基)-、-O-、-C(O)-、-C(O)O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(C1-C4烷基)-、-S(O)2N(環烷基)-、-N(H)C(O)-、-N(C1-C4烷基)C(O)-、-N(環烷基)C(O)-、-C(O)N(H)-、-C(O)N(C1-C4烷基)、-C(O)N(環烷基)、芳基、雜芳基、環烷基或環烯基替換。
24.根據權利要求18至22中任一項所述的化合物，其中所述接頭包含：
25.根據權利要求24所述的化合物，其中所述接頭包含：
26.根據權利要求24或25所述的化合物，其中每個R1和R2各自獨立地是亞烷基，每個J是O，每個x獨立地是1至20的整數，并且每個z獨立地是1至20的整數。
27.根據權利要求18所述的化合物，其中所述接頭包含：
28.根據權利要求18至27中任一項所述的化合物，其中所述接頭具有以下結構：
29.根據權利要求18至27中任一項所述的化合物，其中所述接頭具有以下結構：
30.根據權利要求29所述的化合物，其中M是：...
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】
1.一種化合物，所述化合物包含：
2.根據權利要求1所述的化合物，其中所述ep與所述cpp綴合。
3.根據權利要求1所述的化合物，其中所述ep與所述tm綴合。
4.根據權利要求1至3中任一項所述的化合物，其中所述cpp是環狀細胞穿透肽(ccpp)。
5.根據權利要求1至4中任一項所述的化合物，其中所述ep包含至少一個帶正電的氨基酸殘基。
6.根據權利要求5所述的化合物，其中所述ep包含至少一個賴氨酸殘基和/或至少一個精氨酸殘基。
7.根據權利要求5所述的化合物，其中所述ep包含至少一個賴氨酸殘基。
8.根據權利要求5所述的化合物，其中所述ep包含序列pkkkrkv。
9.根據權利要求5所述的化合物，其中所述ep包含選自kk、kr、rr、kkk、kgk、kbk、kbr、krk、krr、rkk、rrr、kkkk、kkrk、krkk、krrk、rkkr、rrrr、kgkk、kkgk、kkkkk、kkkrk、kbkbk、kkkrkv、pgkkrkv、pkgkrkv、pkkgrkv、pkkkgkv、pkkkrgv和pkkkrkg的序列。
10.根據權利要求1至4中任一項所述的化合物，其中所述ep是核定位信號(nls)。
11.根據權利要求1至10中任一項所述的化合物，其中所述治療性部分是除反義化合物以外的蛋白質、多肽、小分子或寡核苷酸。
12.根據權利要求1至10中任一項所述的化合物，其中所述治療性部分是反義化合物(ac)。
13.根據權利要求12所述的化合物，其中所述ac包含選自硫代磷酸酯(ps)核苷酸、二氨基磷酸酯嗎啉代核苷酸、鎖核酸(lna)、肽核酸(pna)、包含2'-0-甲基(2'-ome)修飾的主鏈的核苷酸、2'0-甲氧基-乙基(2'-moe)核苷酸、2',4'-約束乙基(cet)核苷酸和2'-脫氧-2'-氟-β-d-阿拉伯糖核酸(2'f-ana)的至少一種修飾的核苷酸或核酸，并且
14.根據權利要求12所述的化合物，其中所述ac包含小干擾rna(sirna)、微小rna(mirna)、核酶、免疫刺激核酸、反義、antagomir、antimir、微小rna模擬物、supermir、ul銜接子、適體或crispr基因編輯機制。
15.根據權利要求12至14中任一項所述的化合物，其中所述環肽與所述ac的3'端綴合。
16.根據權利要求12至14中任一項所述的化合物，其中所述環肽與所述ac的5'端綴合。
17.根據權利要求12至14中任一項所述的化合物，其中所述環肽與所述ac的主鏈綴合。
18.根據權利要求12至17中任一項所述的化合物，所述化合物包含將所述環肽與所述ac綴合的接頭。
19.根據權利要求18所述的化合物，其中所述接頭與所述ac的所述5'端共價結合。
20.根據權利要求18所述的化合物，其中所述接頭與所述ac的所述3'端共價結合。
21.根據權利要求18所述的化合物，其中所述接頭與所述ac的所述主鏈共價結合。
22.根據權利要求18至21中任一項所述的化合物，其中所述接頭與所述環肽上的氨基酸殘基的側鏈共價結合。
23.根據權利要求18至22中任一項所述的化合物，其中所述接頭包含二價或三價c1-c50亞烷基，其中1-25個亞甲基基團任選地且獨立地被-n(h)-、-n(c1-c4烷基)-、-n(環烷基)-、-o-、-c(o)-、-c(o)o-、-s-、-s(o)-、-s(o)2-、-s(o)2n(c1-c4烷基)-、-s(o)2n(環烷基)-、-n(h)c(o)-、-n(c1-c4烷基)c(o)-、-n(環烷基)c(o)-、-c(o)n(h)-、-c(o)n(c1-c4烷基)、-c(o)n(環烷基)、芳基、雜芳基、環烷基或環烯基替換。
24.根據權利要求18至22中任一項所述的化合物，其中所述接頭包含：
25.根據權利要求24所述的化合物，其中所述接頭包含：
26.根據權利要求24或25所述的化合物，其中每個r1和r2各自獨立地是亞烷基，每個j是o，每個x獨立地是1至20的整數，并且每個z獨立地是1至20的整數。
27.根據權利要求18所述的化合物，其中所述接頭包含：
28.根據權利要求18至27中任一項所述的化合物，其中所述接頭具有以下結構：
29.根據權利要求18至27中任一項所述的化合物，其中所述接頭具有以下結構：
30.根據權利要求29所述的化合物，其中m是：
31.根據權利要求30所述的化合物，其中m是-c(o)。
32.根據權利要求29至31中任一項所述的化合物，其中z是11。
33.根據權利要求29至32中任一項所述的化合物，其中x是1。
34.根據前述權利要求中任一項所述的化合物，所述化合物包含與根據權利要求中任一項所述的環肽或根據權利要求所述的接頭綴合的環外肽(ep)。
35.根據權利要求29至34中任一項所述的化合物，所述化合物包含與所述接頭的氨基基團綴合的環外肽(ep)。
36.根據權利要求34或35所述的化合物，其中所述ep包含2至10個氨基酸殘基。
37.根據權利要求34至36中任一項所述的化合物，其中所述ep包含4至8個氨基酸殘基。
38.根據權利要求34至37中任一項所述的化合物，其中所述ep包含1或2個氨基酸，所述氨基酸包含含有胍基或其質子化形式的側鏈。
39.根據權利要求34至38中任一項所述的化合物，其中所述ep包含1、2、3或4個賴氨酸殘基。
40.根據權利要求39所述的化合物，其中每個賴氨酸殘基的側鏈上的氨基基團被三氟乙酰基(-cocf3)基團、烯丙氧基羰基(alloc)、1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代亞環己基)乙基(dde)或(4,4-二甲基-2,6-二氧代環己-1-亞基-3)-甲基丁基(ivdde)基團取代。
41.根據權利要求34至40中任一項所述的化合物，其中所述ep包含至少2個具有疏水側鏈的氨基酸殘基。
42.根據權利要求41所述的化合物，其中所述具有疏水側鏈的氨基酸殘基是纈氨酸、脯氨酸、丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸或甲硫氨酸。
43.根據權利要求34至42中任一項所述的化合物，其中所述環外肽包含以下序列中的一者：pkkkrkv；kr；rr；kkk；kgk；kbk；kbr；krk；krr；rkk；rrr；kkkk；kkrk；krkk；krrk；rkkr；rrrr；kgkk；kkgk；kkkkk；kkkrk；kbkbk；kkkrkv；pgkkrkv；pkgkrkv；pkkgrkv；pkkkgkv；pkkkrgv；或pkkkrkg。
44.根據權利要求34至43中任一項所述的化合物，其中所述環外肽具有以下結構：ac-p-k-k-k-r-k-v-。
45.根據前述權利要求中任一項所述的化合物，所述化合物包含以下結構：
46.根據權利要求1至45中任一項所述的化合物，其中所述環肽在所述環肽中包含4至20個氨基酸殘基，其中至少兩個氨基酸殘基包含胍基或其質子化形式，并且至少兩個氨基酸殘基獨立地包含疏水側鏈。
47.根據權利要求1至46中任一項所述的化合物，其中所述環肽包含2、3或4個氨基酸殘基，所述氨基酸殘基包含胍基或其質子化形式。
48.根據權利要求46或47所述的化合物，其中所述環肽包含2、3或4個包含疏水側鏈的氨基酸殘基。
49.根據權利要求46至48中任一項所述的化合物，其中所述環肽包含至少一個氨基酸，所述氨基酸...
【專利技術屬性】
技術研發人員：錢自清，P·多爾蒂，M·凱拉巴迪，劉皓明，沈秀龍，
申請(專利權)人：恩特拉達治療學股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。