【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于微生物發酵，具體涉及一種短小芽孢桿菌的高密度發酵培養方法與應用。
技術介紹
1、土壤鹽漬化導致的耕地退化是全球農業最具破壞的非生物脅迫之一。鹽脅迫對農作物生長的影響體現在農作物生長勢下降、衰老甚至死亡。短小芽孢桿菌作為一種在自然界廣泛存在的革蘭氏陽性菌，它可以產生多種激素及抗菌肽等活性物質，具有較強的抗逆性，在植物耐鹽堿方面表現出了一定的優勢。其抗菌譜廣泛，可抑制多種病原微生物。此外，短小芽孢桿菌還可以促進植物的生長，且具有低溫生長繁殖的能力，在農業領域應用廣泛。
2、目前短小芽孢桿菌發酵方法存在的芽孢數低，代謝產物中活性物質含量低，發酵成本高等問題，嚴重限制了短小芽孢桿菌的應用。若能提高短小芽孢桿菌芽孢發酵水平及活性物質含量，將極大促進短小芽孢桿菌工業化生產，提高其應用價值。
技術實現思路
1、為了提高短小芽孢桿菌芽孢發酵水平及活性物質含量，本專利技術提供了一種針對短小芽孢桿菌的發酵培養方法，該方法操作簡單，所用原材料廉價易得，可以快速促進短小芽孢桿菌的生長，且提高發酵液中活性物質的含量。
2、為解決上述技術問題，實現相應的技術效果，本專利技術提供了如下技術方案：
3、本專利技術的第一個目的是提供一種短小芽孢桿菌的發酵培養方法，所述發酵培養方法包括將短小芽孢桿菌接種于發酵培養基，在發酵20-24h營養細胞大部分形成芽胞囊并開始形成芽孢時，補加葡萄糖，讓芽孢萌發形成營養體，進行二次生長；然后繼續發酵至36-40h大部分營養細胞再次形
4、在本專利技術的一種實施方式中，所述短小芽孢桿菌為短小芽孢桿菌(bacilluspumilus)kn-601，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為cctcc?no：m20221316，保藏日期為2022年8月24日，保藏單位地址為中國，武漢，武漢大學。
5、在本專利技術的一種實施方式中，所述發酵培養基的氮源為豆粕酶解液，碳源為葡萄糖。
6、在本專利技術的一種實施方式中，所述發酵培養基的組成為：豆粕酶解液15％，葡萄糖4％，酵母粉0.5％，玉米漿1.2％、磷酸二氫鉀0.1％、氯化鈣0.03％、硫酸鎂0.15％、氯化錳0.02％，余量為水，ph為7.2。
7、在本專利技術的一種實施方式中，所述豆粕酶解液的制備方法為將豆粕與水按1：4的質量比混合，按照豆粕質量的0.1％加入復合蛋白酶，在ph?8-8.5、溫度50-60℃條件下酶解24h；所述復合蛋白酶由堿性蛋白酶和木瓜蛋白酶按照1:1的質量比混合而成，堿性蛋白酶的酶活為200000u/ml，木瓜蛋白酶的酶活為8000u/ml。
8、在本專利技術的一種實施方式中，所述補加葡萄糖的量為培養基重量的1％-4％。
9、在本專利技術的一種實施方式中，所述補加葡萄糖的量為培養基重量的3％，采取一次性補料方式。
10、在本專利技術的一種實施方式中，所述升溫處理是指發酵溫度相比初始發酵溫度提高3-5℃。
11、在本專利技術的一種實施方式中，所述升溫處理后繼續發酵4-6h。
12、本專利技術的第二個目的是提供上述發酵培養方法制備獲得的短小芽孢桿菌發酵液。
13、本專利技術的第三個目的是提供上述發酵培養方法在增加短小芽孢桿菌發酵液中的活芽孢數中的應用。
14、本專利技術的第四個目的是提供上述發酵培養方法在提高短小芽孢桿菌發酵液中脫落酸含量中的應用。
15、本專利技術的有益效果：
16、本專利技術提供的發酵培養方法，采用豆粕酶解液為氮源，可以快速促進短小芽孢桿菌的生長，進行補料發酵后，在發酵后期采取升溫處理，可以實現短小芽孢桿菌在短時間內的高密度發酵。同時，本專利技術的方法還可以大幅度提高發酵液中脫落酸的含量，從而增強短小芽孢桿菌菌劑在植物抗逆性方面的應用效果。
17、本專利技術提供的發酵培養方法簡單易行，所用原材料簡單易得，可以快速促進短小芽孢桿菌的生長，且發酵液中活性物質(脫落酸)含量高，在降低生產成本的同時，提高了其應用效果，具有顯著地經濟效益。
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1.一種短小芽孢桿菌的發酵培養方法，其特征在于，包括將短小芽孢桿菌接種于發酵培養基，在發酵20-24h時補加葡萄糖繼續發酵，并于發酵36-40h時進行升溫處理。
2.根據權利要求1所述發酵培養方法，其特征在于，短小芽孢桿菌為短小芽孢桿菌(Bacilluspumilus)KN-601，保藏編號為CCTCC?NO：M20221316。
3.根據權利要求1所述發酵培養方法，其特征在于，發酵培養基的氮源為豆粕酶解液，碳源為葡萄糖。
4.根據權利要求1所述發酵培養方法，其特征在于，補加葡萄糖的量為培養基重量的1％-4％。
5.根據權利要4所述發酵培養方法，其特征在于，補加葡萄糖的量為培養基重量的3％，采取一次性補料方式。
6.根據權利要求1所述發酵培養方法，其特征在于，升溫處理是指發酵溫度相比初始發酵溫度提高3-5℃。
7.根據權利要求6所述發酵培養方法，其特征在于，升溫處理后繼續發酵4-6h。
8.權利要求1-7任意一項所述發酵培養方法制備獲得的短小芽孢桿菌發酵液。
9.權利要求1-7任意一項
10.權利要求1-7任意一項所述發酵培養方法在提高短小芽孢桿菌發酵液中脫落酸含量中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種短小芽孢桿菌的發酵培養方法，其特征在于，包括將短小芽孢桿菌接種于發酵培養基，在發酵20-24h時補加葡萄糖繼續發酵，并于發酵36-40h時進行升溫處理。
2.根據權利要求1所述發酵培養方法，其特征在于，短小芽孢桿菌為短小芽孢桿菌(bacilluspumilus)kn-601，保藏編號為cctcc?no：m20221316。
3.根據權利要求1所述發酵培養方法，其特征在于，發酵培養基的氮源為豆粕酶解液，碳源為葡萄糖。
4.根據權利要求1所述發酵培養方法，其特征在于，補加葡萄糖的量為培養基重量的1％-4％。
5.根據權利要...
【專利技術屬性】
技術研發人員：熊圓圓，劉華梅，周華眾，程治國，馬朋，黃芳，潘渝，王曉輝，周莉，劉守德，徐廣，曾凡強，李高峰，
申請(專利權)人：武漢科諾生物科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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