【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物免疫治療，具體涉及抗cd70納米抗體及其用途。
技術(shù)介紹
1、cd70屬于腫瘤壞死因子(tnf)超家族成員，正常組織中cd70是一種ii型跨膜糖蛋白，僅僅短暫地表達(dá)在活化的t細(xì)胞、b細(xì)胞及成熟的樹突狀細(xì)胞中，cd27是其受體。在病理狀態(tài)下，研究發(fā)現(xiàn)cd70高表達(dá)于多種腫瘤細(xì)胞中。目前以cd70為靶點(diǎn)的免疫治療藥物已經(jīng)在臨床前期研究中應(yīng)用。
2、研究表明cd70在多種惡性腫瘤中表達(dá)均異常升高，包括腎細(xì)胞癌、急性骨髓性白血病、非霍奇金淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、套細(xì)胞淋巴瘤、彌漫性大細(xì)胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、胰腺癌、乳腺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤及其它腫瘤等，是一個(gè)有前景的腫瘤免疫治療靶標(biāo)。
3、嵌合抗原受體t細(xì)胞(chimeric?antigen?receptor-t?cell，car-t)是一種針對(duì)腫瘤細(xì)胞表面特異性抗原的新型免疫治療方法?，F(xiàn)在，許多研究人員正在開發(fā)治療實(shí)體瘤的car-t細(xì)胞。
4、抗體作為car中重要的組成部分，其對(duì)于car-t發(fā)揮特異性高效殺傷作用、降低毒性具有決定性影響。因此能夠以高特異性結(jié)合目標(biāo)抗原、同時(shí)具有低免疫原性的抗體是開發(fā)car-t產(chǎn)品的重點(diǎn)。羊駝體內(nèi)能夠產(chǎn)生特異性、親和力高的vhh抗體，同時(shí)由于vhh抗體本身的特性使其能夠識(shí)別傳統(tǒng)scfv抗體不能識(shí)別的抗原表位，另外羊駝vhh基因與人vh基因具有較高的同源性，所以免疫原性比較低也利于人源化改造。本領(lǐng)域尚無含抗cd70納米抗體的car-t細(xì)胞報(bào)道。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
2、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述抗cd70納米抗體的重鏈可變區(qū)序列如seq?id?no:21-28中任一所示。
3、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述抗cd70納米抗體的fr1可選自seq?id?no:21-28中任一所示的vhh的fr1，fr2可選自seq?id?no:21-28中任一所示的vhh的fr2，fr3可選自seqid?no:21-28中任一所示的vhh的fr3，fr4可選自seq?id?no:21-28中任一所示的vhh的fr4，
4、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述cd70結(jié)合分子是包含一條、兩條或多條抗cd70納米抗體或其抗原結(jié)合片段的單價(jià)或多價(jià)納米抗體或單域抗體、或多特異性納米抗體或單域抗體。
5、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述多價(jià)結(jié)合分子或多特異性結(jié)合分子通過連接子連接多個(gè)抗cd70納米抗體或其抗原結(jié)合片段。所述連接子由選自g和s的1-15個(gè)氨基酸組成。
6、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述納米抗體是駱駝重鏈抗體或軟骨魚重鏈抗體。
7、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述納米抗體還包含重鏈恒定區(qū)。
8、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述重鏈恒定區(qū)是駱駝重鏈抗體的恒定區(qū)，包含ch2和ch3。在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述ch2和ch3是人igg?fc的ch2和ch3，例如igg1的ch2和ch3。優(yōu)選地，所述重鏈恒定區(qū)如seq?id?no:37所示。
9、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述重鏈恒定區(qū)是軟骨魚重鏈抗體的恒定區(qū)，包含ch1、ch2、ch3、ch4和ch5。
10、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，本專利技術(shù)任一實(shí)施方案所述的cd70結(jié)合分子為嵌合抗體或完全人抗體；優(yōu)選為完全人抗體。
11、本專利技術(shù)另一方面提供一種嵌合抗原受體，包含任選的信號(hào)肽序列、本文任一實(shí)施方案所述的cd70結(jié)合分子、鉸鏈區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)。
12、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，胞內(nèi)區(qū)包括胞內(nèi)共刺激域和/或胞內(nèi)信號(hào)域。
13、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，從n端到c端，該嵌合抗原受體依次含有信號(hào)肽、本文任一實(shí)施方案所述的cd70結(jié)合分子、鉸鏈區(qū)、跨膜區(qū)、胞內(nèi)共刺激域和胞內(nèi)信號(hào)域。
14、本專利技術(shù)還提供核酸分子，其具有選自以下任一項(xiàng)的序列：
15、(1)本文任一實(shí)施方案所述cd70結(jié)合分子或嵌合抗原受體的編碼序列；
16、(2)(1)的互補(bǔ)序列；
17、(3)(1)或(2)中任一序列的5-50bp的片段。
18、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述片段是引物。
19、本專利技術(shù)還提供一種核酸構(gòu)建物，包含本文所述的核酸分子。
20、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述核酸構(gòu)建物是克隆載體、表達(dá)載體或整合載體。
21、本專利技術(shù)還提供一種宿主細(xì)胞，選自：
22、(1)表達(dá)和/或分泌本文任一實(shí)施方案所述cd70結(jié)合分子或嵌合抗原受體；
23、(2)包含本文所述的核酸分子；和/或
24、(3)包含本文所述的核酸構(gòu)建物。
25、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述宿主細(xì)胞是免疫效應(yīng)細(xì)胞，優(yōu)選t細(xì)胞。
26、本專利技術(shù)還提供一種產(chǎn)生本文任一實(shí)施方案cd70結(jié)合分子的方法，包括：在適合產(chǎn)生cd70結(jié)合分子(例如納米抗體或其抗原結(jié)合片段，單價(jià)或多價(jià)納米抗體或單域抗體、或多特異性納米抗體或單域抗體)的條件下培養(yǎng)本文所述的宿主細(xì)胞，和任選的從培養(yǎng)物中純化所述cd70結(jié)合分子。
27、本專利技術(shù)還提供一種藥物組合物，包含本文任一實(shí)施方案所述cd70結(jié)合分子、核酸分子、核酸構(gòu)建物或宿主細(xì)胞，和藥學(xué)上可接受的輔料。
28、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物組合物用于治療cd70表達(dá)相關(guān)的疾病或病況。
29、本專利技術(shù)還提供本文任一實(shí)施方案所述cd70結(jié)合分子、嵌合抗原受體、核酸分子、核酸構(gòu)建物或宿主細(xì)胞在制備活化的免疫細(xì)胞(例如t細(xì)胞)中的用途。
30、本專利技術(shù)還提供本文任一實(shí)施方案所述cd70結(jié)合分子、嵌合抗原受體、核酸分子、核酸構(gòu)建物或宿主細(xì)胞在制備用于預(yù)防或治療cd70表達(dá)相關(guān)的疾病或病況的藥物中的用途。
31、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述疾病或病況選自以下的一種或多種：腎細(xì)胞癌、急性骨髓性白血病、非霍奇金淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、套細(xì)胞淋巴瘤、彌漫性大細(xì)胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、胰腺癌、乳腺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤。
32、本專利技術(shù)還提供一種治療或預(yù)防cd70表達(dá)相關(guān)的疾病或病況的方法，所述方法包括給予需要的患者治療有效量的本專利技術(shù)任一實(shí)施方案所述的cd70結(jié)合分子或宿主細(xì)胞，或本專利技術(shù)任一實(shí)施方案所述的藥物組合物。
33、本專利技術(shù)還提供一種檢測(cè)cd70的試劑盒，用于例如評(píng)估藥物治療效果或診斷癌癥，所述的試劑盒包含本文任一實(shí)施方案所述cd70結(jié)合分子、核酸分子、核酸構(gòu)建物或宿主細(xì)胞。
34、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述試劑盒還包括用于檢測(cè)cd70與所述cd70結(jié)合分子的結(jié)合的試本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種CD70結(jié)合分子，包含抗CD70納米抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗CD70納米抗體的互補(bǔ)決定區(qū)CDR包含CDR1、CDR2和CDR3，其中CDR1包括SEQ?ID?NO:1、2、3和5中任一所示的序列、CDR2包括SEQ?ID?NO:8和10中任一所示的序列、和CDR3包括SEQ?ID?NO:14和15中任一所示的序列，
2.一種嵌合抗原受體，包含任選的信號(hào)肽序列、權(quán)利要求1所述的CD70結(jié)合分子、鉸鏈區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)，
3.一種核酸分子，其具有選自以下任一項(xiàng)的序列：
4.一種核酸構(gòu)建物，包含權(quán)利要求3所述的核酸分子，
5.一種宿主細(xì)胞，選自：
6.一種產(chǎn)生權(quán)利要求1所述的CD70結(jié)合分子或權(quán)利要求2所述的嵌合抗原受體的方法，包括：在適合產(chǎn)生CD70結(jié)合分子的條件下培養(yǎng)權(quán)利要求5所述的宿主細(xì)胞，和任選的從培養(yǎng)物中純化所述CD70結(jié)合分子或嵌合抗原受體。
7.一種藥物組合物，包含權(quán)利要求1所述CD70結(jié)合分子、權(quán)利要求2所述的嵌合抗原受體、權(quán)利要求3所述的核酸分子、權(quán)利要求4所述的核酸構(gòu)建物或權(quán)利要求5
8.權(quán)利要求1所述CD70結(jié)合分子、權(quán)利要求2所述的嵌合抗原受體、權(quán)利要求3所述的核酸分子、權(quán)利要求4所述的核酸構(gòu)建物或權(quán)利要求5所述的宿主細(xì)胞在制備活化的免疫細(xì)胞中的用途，或在制備用于預(yù)防或治療CD70表達(dá)相關(guān)的疾病或病況的藥物中的用途，
9.一種檢測(cè)CD70的試劑盒，所述的試劑盒包含權(quán)利要求1所述CD70結(jié)合分子、權(quán)利要求3所述的核酸分子、權(quán)利要求4所述的核酸構(gòu)建物或權(quán)利要求5所述的宿主細(xì)胞，
10.權(quán)利要求1所述CD70結(jié)合分子在制備用于檢測(cè)樣品中CD70、評(píng)估藥物治療效果或診斷癌癥的試劑盒中的用途。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種cd70結(jié)合分子，包含抗cd70納米抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗cd70納米抗體的互補(bǔ)決定區(qū)cdr包含cdr1、cdr2和cdr3，其中cdr1包括seq?id?no:1、2、3和5中任一所示的序列、cdr2包括seq?id?no:8和10中任一所示的序列、和cdr3包括seq?id?no:14和15中任一所示的序列，
2.一種嵌合抗原受體，包含任選的信號(hào)肽序列、權(quán)利要求1所述的cd70結(jié)合分子、鉸鏈區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)，
3.一種核酸分子，其具有選自以下任一項(xiàng)的序列：
4.一種核酸構(gòu)建物，包含權(quán)利要求3所述的核酸分子，
5.一種宿主細(xì)胞，選自：
6.一種產(chǎn)生權(quán)利要求1所述的cd70結(jié)合分子或權(quán)利要求2所述的嵌合抗原受體的方法，包括：在適合產(chǎn)生cd70結(jié)合分子的條件下培養(yǎng)權(quán)利要求5所述的宿主細(xì)胞，和任選的從培養(yǎng)物中純...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：黃慧，彭濤，胡紅明，劉翔，陳燕，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：上海恒潤達(dá)生生物科技股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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