【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及蛋白質工程領域，具體涉及一種利用5′utr在畢赤酵母表達系統中提高目的蛋白質表達量的方法。
技術介紹
1、微生物宿主細胞中如酶、抗體、受體等蛋白質的產生在生物
中是特別有意義的。畢赤酵母是一種甲醇營養型酵母，可以利用甲醇作為唯一碳源作為一種蛋白表達系統。相比原核表達系統，畢赤酵母具有糖基化修飾的優勢，但沒有釀酒酵母常見的過糖基化問題。畢赤酵母系統是近年來發展很快的真核表達系統，與原核表達系統相比，它可以對表達的蛋白質進行翻譯后加工、折疊和修飾，得到具有正確空間結構和較高生物學活性的重組蛋白。近年來，許多重組蛋白已在畢赤酵母中實現了高效表達，達到克級水平，但仍有多種蛋白表達量較低，提高畢赤酵母外源蛋白表達量成為降低工業化生產成本的關鍵。
2、畢赤酵母作為重要的工業應用菌株，提升其外源蛋白表達能力一直是研究的熱點與難點。提高菌株外源蛋白表達量常用的技術手段有基因的密碼子優化、信號肽優化、基因拷貝數優化和蛋白折疊分泌途徑優化等，而鮮有研究從菌株轉錄/翻譯水平出發來提高畢赤酵母的外源蛋白表達量。
3、目前提高基因轉錄的主要方式是使用強啟動子或利用增強子提高基因的轉錄水平。除了啟動子和增強子序列對基因轉錄的貢獻，5′非翻譯區(5′untranslatedregion，5′utr)也可以影響真核生物基因的表達量。5′utr具有穩定mrna、形成翻譯起始復合體和促進蛋白質合成等作用。外源蛋白在酵母中表達受mrna5'端和3'端的utr序列的核苷酸序列及長度的干擾比較大，為保證外源蛋白的成功表達,目的
4、在如今的工業生物技術環境中，當目的蛋白質以工業產量生產時，目的蛋白質產率的微小改善就具有重大意義。因此，科研工作者都在追尋構建新的或改善的畢赤酵母表達系統，以獲得增強的/增加的蛋白質表達/產生的能力。
技術實現思路
1、本專利技術旨在提供了一種利用5′utr在畢赤酵母表達系統中提高目的蛋白質表達量的方法。
2、本專利技術通過大量實驗及現象發現，對以下三組5′utr進行組合，得到全新的5′-utr核酸序列能有效實現本專利技術的目的。
3、人工設計的5′utr：gcacacgctggaattctagtatact(seq?id?no:1)
4、煙草花葉病毒(tmv)來源的5′utr：gcttacaattactatttacaattaca(seq?id?no:2)
5、紫花苜?；ㄈ~病毒(amv)來源的5′utr：tttttttatttttaattttctttcaaatacttccaccatgg(seq?id?no:3)
6、在本專利技術的一些實施例中，本專利技術利用5′utr在畢赤酵母表達系統中提高目的蛋白質表達量的方法，包括將5′-utr核酸序列功能性地連接到目的蛋白質編碼序列的5′端的步驟，其中，所述5′-utr核酸序列由seq?id?no:1-3所示三組5′utr中的任意兩組通過連接序列組合而成。
7、在本專利技術的一些實施例中，所述連接序列包括但不限于caacaa。
8、在本專利技術的一個具體實施例中，所述5′-utr核酸序列為seq?id?no:4、seq?id?no:5或seq?id?no:6所示。
9、seq?id?no:4：gcacacgctggaattctagtatactcaacaagcttacaattactatttacaattaca。
10、seq?id?no:5：gcttacaattactatttacaattacacaacaagcacacgctggaattctagtatact。
11、seq?id?no:6：tttttttatttttaattttctttcaaatacttccaccatggca?acaagcttacaattactatttacaattaca。
12、根據本專利技術的利用5′utr在畢赤酵母表達系統中提高目的蛋白質表達量的方法，其中，所述目的蛋白質為磷脂酶、木聚糖酶或植酸酶。
13、根據本專利技術的利用5′utr在畢赤酵母表達系統中提高目的蛋白質表達量的方法，其中，所述磷脂酶a的氨基酸序列如seq?id?no:7，所述磷脂酶c的氨基酸序列如seq?id?no:8所示，所述木聚糖酶的氨基酸序列如seq?id?no:9，所述植酸酶的氨基酸序列如seq?idno:10所示。
14、seq?id?no:7,
15、wsaedkhkegvnshlwivnraidimsrnttlvkqdrvaqlnewrtelengiyaadyenpyydnstfashfydpdngktyipfakqaketgakyfklagesyknkdmkqaffylglslhylgdvnqpmhaanftnlsypqgfhskyenfvdtikdnykvtdgngywnwkgtnpeewihgaavvakqdysgivndntkdwfvkaavsqeyadkwraevtpmtgkrlmdaqrvtagyiqlwfdtygdr。
16、seq?id?no:8，
17、apadkpqvlasftqtsassqnawlaanrnqsawaayefdwstdlcsqapdn?pfgfpfntacarhdfgyrnykaagsfdanksridsafyedmkrvctgytgeknt?acnstawtyyqavkil。
18、seq?id?no:9，
19、qsfcssashsgqsvkvtgnkvgtiggvgyelwadsgnnsatfysdgsfsctfqnagdylcrsglsfdstktpsqigrmkadfklvkqnssnvgysyvgvygwtrsplveyyivdnwlspfppgdwvgnkkhgsftidgaqytvyentrtgpsidgdttfnqyfsirqqardcgtidisahfdqweklgmtmgklheakvlgeagnvnggasgtadfpyakvyigd。
20、seq?id?no:10，
21、qsepelklesvvivsrhgvraptkatqlmqdvtpdawptwpvklgwltprggeliaylghyqrqrlvadgllakkgcpqsgqvaiiadvdertrktgeafaaglapdcaitvhtqadtsspdplfnplktgvcqldnanvtdailsraggsiadftghrqtafrelervlnfpqsnlcfkrekqdescsltqalpselkvsadnvsltgavslasmlteifllqqaqgmpepgwgritdshqwntllslhnaqfyllqrtpevarsratplldliktaltphppqkqaygvtlptsvlf本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種利用5-′UTR在畢赤酵母表達系統中提高目的蛋白質表達量的方法，其特征在于，所述方法包括將5′-UTR核酸序列功能性地連接到目的蛋白質編碼序列的5′端的步驟，其中，所述5′-UTR核酸序列由SEQ?ID?NO:1、SEQ?ID?NO:2和SEQ?ID?NO:3中任意兩個通過連接序列連接組成。
2.根據權利要求1所述的利用5′-UTR在畢赤酵母表達系統中提高目的蛋白質表達量的方法，其特征在于，所述連接序列為CAACAA。
3.根據權利要求1所述的利用5′-UTR在畢赤酵母表達系統中提高目的蛋白質表達量的方法，其特征在于，所述5′-UTR核酸序列如SEQ?ID?NO:4、SEQ?ID?NO:5或SEQ?ID?NO:6所示。
4.根據權利要求1所述的利用5′-UTR在畢赤酵母表達系統中提高目的蛋白質表達量的方法，其特征在于，所述目的蛋白質為磷脂酶、木聚糖酶或植酸酶。
5.根據權利要求4所述的利用5′-UTR在畢赤酵母表達系統中提高目的蛋白質表達量的方法，其特征在于，所述磷脂酶的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:7或SEQ?ID?NO
...【技術特征摘要】
1.一種利用5-′utr在畢赤酵母表達系統中提高目的蛋白質表達量的方法，其特征在于，所述方法包括將5′-utr核酸序列功能性地連接到目的蛋白質編碼序列的5′端的步驟，其中，所述5′-utr核酸序列由seq?id?no:1、seq?id?no:2和seq?id?no:3中任意兩個通過連接序列連接組成。
2.根據權利要求1所述的利用5′-utr在畢赤酵母表達系統中提高目的蛋白質表達量的方法，其特征在于，所述連接序列為caacaa。
3.根據權利要求1所述的利用5′-utr在畢赤酵母表達系統中提高目的蛋白質表達量的方法，其特征在于，...
【專利技術屬性】
技術研發人員：金星，李陽源，梁偉凡，張智良，譚姚姚，劉龍，林鴻杰，
申請(專利權)人：廣東溢多利生物科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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