【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及電化學生物傳感器領域，具體涉及化學改性dnazyme探針介導的多組分活性氧生物傳感器的構建方法、構建結構及應用。
技術介紹
1、活性氧（ros）是一類具有高活性的小分子，它們密切參與細胞免疫、遷移、分化和信號轉導，常見的有單線態氧（1o2）、超氧自由基（o2?-）、次氯酸/次氯酸鹽（hocl/clo?）和過氧化氫（h2o2）。其中，hclo是髓過氧化物酶催化反應產生的ros，是一種強大的親核非自由基氧化劑，它對于免疫系統和抵抗入侵微生物至關重要。hclo被用作生活用水和食品生產的消毒劑，但其過量存在會導致多種生物機體的氧化損傷，誘發氧化應激和細胞損傷。此外，過表達的h2o2與許多病理性疾病有關，如心血管病、神經退行性疾病、糖尿病等。因此，構建高效的ros檢測策略具有重要的生物醫學意義。
2、電化學技術因其靈敏度高、成本低、響應快、使用方便而受到越來越多的關注。在檢測ros方面，電化學體系可分為酶生物傳感器和無酶傳感器。前者利用血紅蛋白、過氧化氫酶和辣根過氧化物酶等蛋白酶催化劑來檢測ros發生氧化還原反應的電子轉移；然而，蛋白酶的催化活性會受到反應溫度、ph值和反應緩沖的影響，限制了它們在復雜基質中的應用。基于納米材料獨特的電學、催化和機械性能，無酶傳感器利用納米材料來修飾傳感界面，進行電催化檢測ros的氧化還原反應信號。例如，我們制備了一種三金屬雜化納米花/mos2納米復合材料用于原位檢測h2o2，得到檢測限為0.3?nm，且檢測到每個癌細胞分泌的h2o2的平均數量為1011。但是，由于ros具有高的反
技術實現思路
1、本專利技術所要解決的技術問題是提供一種化學改性dnazyme探針介導的多組分活性氧生物傳感器的構建方法、構建結構及應用，利用化學改性的dnazyme探針進行ros的特異性識別，結合mof的高負載量實現信號放大，引入互不干擾的電活性物質進行信號輸出，實現h2o2和hclo的同時檢測。
2、為解決上述技術問題，本專利技術的技術方案為：化學改性dnazyme探針介導的多組分活性氧生物傳感器，其創新點在于：所述化學改性dnazyme探針介導的多組分活性氧生物傳感器包括以下步驟：
3、步驟s1：通過溶劑熱法制備金屬有機框架材料uio?mof，并將ra-sp組裝到uio?mof表面；
4、其中，所述ra-sp的序列為5’-sh-(ch2)6-actcactat/ra/ggaagag?atg-3’；
5、步驟s2：分別將多柔比星（dox）和亞甲基藍（mb）負載到uio?mof材料中，設計硫代磷酸脂（ps）和苯硼酸（bo）修飾的dnazyme探針ps-dp1和bo-dp2，將dnazyme探針與ra-sp雜交進行封孔，得到(dna-dox)/uio和(dna-mb)/uio；
6、其中，所述ps-dp1的序列為5’-catctcttctccgagccggtcgaaatagtgagtapsaaactcactat-3’；所述bo-dp2的序列為5’-catctcttctccgboabogboccggtcgaaatagtgagt-3’；
7、步驟s3：將(dna-dox)/uio和(dna-mb)/uio與不同濃度的h2o2和hclo反應，隨后進行電化學測試；
8、優選的，所述步驟s1中合成納米材料的操作為，將四價鋯的無機鹽（如氯化鋯）和2-氨基對苯二甲酸溶解到二甲基甲酰胺中，于120?°c下反應24小時；冷卻至室溫后，離心洗滌干燥，獲得uio?mof材料；隨后與4-（n-馬來酰亞胺甲基）環己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亞胺酯鈉鹽（sulfo-smcc）混合兩小時，并加入ra-sp孵育5小時，得到ra-sp/uio。
9、優選的，所述步驟s2中封孔的實驗操作為，將dox與ra-sp/uio混合并持續攪拌12小時，之后加入ps-dp1孵育4小時進行雜交封孔；將ra-sp/uio依次與mb和bo-dp2按照相同的方式混合反應，得到(dna-mb)/uio。
10、優選的，所述步驟s3中電化學檢測的操作為，向(dna-mb)/uio和(dna-dox)/uio的溶液中加入不同濃度的hclo和h2o2，在室溫下緩慢攪拌50分鐘，隨后通過三電極體系（金工作電極、鉑絲輔助電極、ag/agcl參比電極）進行差分脈沖伏安法（dpv）檢測。
11、化學改性dnazyme探針介導的多組分活性氧生物傳感器的構建結構，應用所述的化學改性dnazyme探針介導的多組分活性氧生物傳感器的構建方法，所述化學改性dnazyme探針介導的多組分活性氧生物傳感器的構建結構為采用化學改性dnazyme探針介導的多組分活性氧生物傳感器的構建方法得到的電化學傳感器。
12、化學改性dnazyme探針介導的多組分活性氧生物傳感器的應用，采用所述化學改性dnazyme探針介導的多組分活性氧生物傳感器的應用為所述電化學傳感器在檢測細胞樣品中h2o2和hclo含量方面的應用。
13、本專利技術的優點在于：與現有技術相比，本專利技術利用化學改性的dnazyme探針進行ros的特異性識別，結合mof的高負載量實現信號放大，引入互不干擾的電活性物質進行信號輸出，實現h2o2和hclo的同時檢測，提供了一種同時檢測多組分ros的高效電化學傳感器的構建方法、構建結構及應用，對相關疾病的臨床診斷和藥物開發具有重要的指導意義和應用價值。
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1.化學改性DNAzyme探針介導的多組分活性氧生物傳感器，其特征在于：所述化學改性DNAzyme探針介導的多組分活性氧生物傳感器包括以下步驟：
2.?如權利要求1所述的化學改性DNAzyme探針介導的多組分活性氧生物傳感器，其特征在于：所述步驟S1中合成納米材料的操作為，將四價鋯的無機鹽（如氯化鋯）和2-氨基對苯二甲酸溶解到二甲基甲酰胺中，于120?°C下反應24小時；冷卻至室溫后，離心洗滌干燥，獲得UiO?MOF材料；隨后與4-（N-馬來酰亞胺甲基）環己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亞胺酯鈉鹽（Sulfo-SMCC）混合兩小時，并加入rA-SP孵育5小時，得到rA-SP/UiO。
3.如權利要求1所述的化學改性DNAzyme探針介導的多組分活性氧生物傳感器，其特征在于：所述步驟S2中封孔的實驗操作為，將Dox與rA-SP/UiO混合并持續攪拌12小時，之后加入PS-DP1孵育4小時進行雜交封孔；將rA-SP/UiO依次與MB和BO-DP2按照相同的方式混合反應，得到(DNA-MB)/UiO。
4.如權利要求1所述的化學改性DNAzyme探針介導的
5.化學改性DNAzyme探針介導的多組分活性氧生物傳感器的構建結構，應用如權利要求1至4其中任何一項所述的化學改性DNAzyme探針介導的多組分活性氧生物傳感器，其特征在于：所述化學改性DNAzyme探針介導的多組分活性氧生物傳感器的構建結構為采用化學改性DNAzyme探針介導的多組分活性氧生物傳感器的構建方法得到的電化學傳感器。
6.化學改性DNAzyme探針介導的多組分活性氧生物傳感器的應用，采用如權利要求5所述的化學改性DNAzyme探針介導的多組分活性氧生物傳感器的構建結構，其特征在于：所述化學改性DNAzyme探針介導的多組分活性氧生物傳感器的應用為所述電化學傳感器在檢測細胞樣品中HClO和H2O2含量方面的應用。
...【技術特征摘要】
1.化學改性dnazyme探針介導的多組分活性氧生物傳感器，其特征在于：所述化學改性dnazyme探針介導的多組分活性氧生物傳感器包括以下步驟：
2.?如權利要求1所述的化學改性dnazyme探針介導的多組分活性氧生物傳感器，其特征在于：所述步驟s1中合成納米材料的操作為，將四價鋯的無機鹽（如氯化鋯）和2-氨基對苯二甲酸溶解到二甲基甲酰胺中，于120?°c下反應24小時；冷卻至室溫后，離心洗滌干燥，獲得uio?mof材料；隨后與4-（n-馬來酰亞胺甲基）環己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亞胺酯鈉鹽（sulfo-smcc）混合兩小時，并加入ra-sp孵育5小時，得到ra-sp/uio。
3.如權利要求1所述的化學改性dnazyme探針介導的多組分活性氧生物傳感器，其特征在于：所述步驟s2中封孔的實驗操作為，將dox與ra-sp/uio混合并持續攪拌12小時，之后加入ps-dp1孵育4小時進行雜交封孔；將ra-sp/uio依次與mb和bo-dp2按照相同的方式混合反應，得到(dna-mb)/uio。
4.如權利要求1所述的化學改性dna...
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