【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物醫藥領域，具體涉及預防或治療癌癥的mrna疫苗。
技術介紹
1、kras屬于gtpase蛋白家族中ras系列，其g12系列突變常見于腫瘤，是相關小分子抑制劑、腫瘤疫苗以及t細胞受體(tcr)嵌合型t細胞技術研發的熱門靶點之一。目前研究發現，kras基因突變與人惡性腫瘤的發生發展及其復發等密切相關，是癌癥中最常見的突變基因之一，占肺腺癌患者的27％、結直腸癌患者的49％、胰腺導管腺癌的93％，其中大部分為g12d、g12v、g12c、g12r等突變形式，非小細胞肺癌以g12c突變為主，結直腸癌多為g12d、g12v突變，胰腺癌則常見g12d、g12v、g12r突變。
2、因為kras蛋白分子較小，表面相對平滑，難以找到小分子藥物結合的“口袋”；并且kras對核苷酸gtp親和力極強，常規藥物很難與gtp競爭，難以結合kras蛋白并抑制其活性，造成kras長期以來靶向困難。然而，近年針對kras-g12c的小分子抑制劑已取得突破，安進的針對kras-g12c的小分子抑制劑獲準上市。但其僅在以g12c突變為主的非小細胞肺癌人群中展現出較好的臨床響應，而在g12c突變較少的結直腸癌、胰腺癌中，臨床響應較差。針對其他突變，臨床上也缺乏有效藥物。本領域迫切需要針對kras突變多靶點的治療。
3、目前在腫瘤疫苗方面，已陸續開展kras多靶點腫瘤疫苗的研究。其中默沙東與moderna合作開發的kras多靶點mrna腫瘤疫苗mrna-5671/v941已處于臨床1期研究階段，但其臨床前研究需要聯合佐劑施用。
技術實現思路
1、在一方面，本專利技術提供一種多肽，其包含2個或更多個突變肽的多聯體，其中所述突變肽各自獨立地包含對應于kras多肽、hras多肽或nras多肽中的至少27個連續氨基酸的氨基酸序列。
2、在一實施方案中，所述hras多肽包含seq?id?no:86的氨基酸序列，并且與seq?idno:86相比，所述突變肽包含選自g12v、q61l、q61r和q61h的hras突變。
3、在一實施方案中，所述nras多肽包含seq?id?no:87的氨基酸序列，并且與seq?idno:87相比，所述突變肽包含選自g12d、g13d、q61k和q61r的nras突變。
4、在一實施方案中，所述kras多肽包含seq?id?no:1的氨基酸序列，并且與seq?idno:1相比，所述突變肽包含選自g12d、g12v、g12s、g12r、g12c、g12a、g12f、g13d和q61h的kras突變。
5、在一實施方案中，所述突變肽包含第一kras肽、第二kras肽、第三kras肽和第四kras肽；其中每個kras肽各自包含seq?id?no:1的從n端開始的至少27個連續氨基酸，并且所述kras肽包含選自g12d、g12v、g12s、g12r、g12c、g12a、g12f和g13d的突變；或者包含seqid?no:1的從第48位開始的至少27個連續氨基酸，并且所述kras肽包含q61h的突變。
6、在又一方面，本專利技術還提供一種多肽，其包含第一kras肽、第二kras肽、第三kras肽和第四kras肽的四聯體，其中每個kras肽各自包含對應于seq?id?no:1中的至少27個連續氨基酸的氨基酸序列，并且與seq?id?no:1相比，各自包含選自g12d、g12v、g12s、g12r、g12c、g12a、g12f、g13d和q61h的突變。
7、在一實施方案中，每個kras肽各自包含seq?id?no:1的從n端開始的至少27個連續氨基酸，并且所述kras肽包含選自g12d、g12v、g12s、g12r、g12c、g12a、g12f和g13d的突變；或者包含seq?id?no:1的從第48位開始的至少27個連續氨基酸，并且所述kras肽包含q61h的突變。
8、在一實施方案中，所述四個kras肽分別包含g12d、g12v、g12r和g12c，g12d、g12v、g12f和g12c，或者g12d、g12v、q61h和g12c。
9、在一實施方案中，所述四個kras肽的長度相同，優選均為27個氨基酸。
10、在一實施方案中，所述多肽包含seq?id?no:2、seq?id?no:3或seq?id?no:4的氨基酸序列。
11、在一實施方案中，所述多肽其在n端還包含信號肽序列，并且在其c端還包含mhc-i的跨膜-胞內段結構域序列。
12、在一實施方案中，所述信號肽序列包含seq?id?no:15的氨基酸序列；和/或所述mhc-i的跨膜-胞內段結構域序列包含seq?id?no:16的氨基酸序列。
13、在一實施方案中，所述多肽還包含一個或多個接頭，優選gs接頭。
14、在一實施方案中，所述多肽包含seq?id?no:17、seq?id?no:18或seq?id?no:19的氨基酸序列。
15、在另一方面，本專利技術還提供一種多核苷酸，其編碼本專利技術的多肽。
16、在一實施方案中，所述多核苷酸包含seq?id?no:23、24、25和26之一的核苷酸序列或者與seq?id?no:23、24、25和26之一具有至少80％相同性的核苷酸序列。
17、在一實施方案中，所述多核苷酸包含seq?id?no:32、33、34和35之一的核苷酸序列或者與seq?id?no:32、33、34和35之一具有至少80％相同性的核苷酸序列。
18、在另一方面，本專利技術還提供一種多核苷酸，其包含編碼本專利技術的多肽的多核苷酸序列，并且還包含編碼第二多肽的多核苷酸序列。
19、在一實施方案中，所述第二多肽為細胞因子，優選人干擾素α1或人fms相關酪氨酸激酶3配體。
20、在一實施方案中，所述第二多肽包含seq?id?no:13或seq?id?no:14的氨基酸序列。
21、在一實施方案中，所述多核苷酸包含seq?id?no:36或37的核苷酸序列或者與seqid?no:36或37的核苷酸序列具有至少80％相同性的核苷酸序列。
22、在一實施方案中，本專利技術的多核苷酸為dna或rna，優選mrna。
23、在一實施方案中，所述rna進一步包含5’-utr；優選地，所述5’-utr包含seq?idno:61的核苷酸序列。
24、在一實施方案中，所述rna進一步包含3’-utr；優選地，所述3’-utr包含seq?idno:62的核苷酸序列。
25、在一實施方案中，所述rna進一步包含poly(a)序列；優選地，所述poly(a)序列包含75個腺苷核苷酸。
26、在一實施方案中，所述多核苷酸包含seq?id?no:42、43、44、45、51、52、53、54、55、56、63、64、65、66、72、73、74本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種多肽，其包含2個或更多個突變肽的多聯體，其中所述突變肽各自獨立地包含對應于KRAS多肽、HRAS多肽或NRAS多肽中的至少27個連續氨基酸的氨基酸序列。
2.權利要求1的多肽，其中所述HRAS多肽包含SEQ?ID?NO:86的氨基酸序列，并且與SEQID?NO:86相比，所述突變肽包含選自G12V、Q61L、Q61R和Q61H的HRAS突變。
3.權利要求1或2的多肽，其中所述NRAS多肽包含SEQ?ID?NO:87的氨基酸序列，并且與SEQ?ID?NO:87相比，所述突變肽包含選自G12D、G13D、Q61K和Q61R的NRAS突變。
4.權利要求1-3中任一項的多肽，其中所述KRAS多肽包含SEQ?ID?NO:1的氨基酸序列，并且與SEQ?ID?NO:1相比，所述突變肽包含選自G12D、G12V、G12S、G12R、G12C、G12A、G12F、G13D和Q61H的KRAS突變。
5.權利要求4的多肽，其中所述突變肽包含第一KRAS肽、第二KRAS肽、第三KRAS肽和第四KRAS肽；其中每個KRAS肽各自包含SEQ?ID
6.一種多肽，其包含第一KRAS肽、第二KRAS肽、第三KRAS肽和第四KRAS肽的四聯體，其中每個KRAS肽各自包含對應于SEQ?ID?NO:1中的至少27個連續氨基酸的氨基酸序列，并且與SEQ?ID?NO:1相比，各自包含選自G12D、G12V、G12S、G12R、G12C、G12A、G12F、G13D和Q61H的突變。
7.權利要求6的多肽，其中所述每個KRAS肽各自包含SEQ?ID?NO:1的從N端開始的至少27個連續氨基酸，并且所述KRAS肽包含選自G12D、G12V、G12S、G12R、G12C、G12A、G12F和G13D的突變；或者包含SEQ?ID?NO:1的從第48位開始的至少27個連續氨基酸，并且所述KRAS肽包含Q61H的突變。
8.權利要求6或7的多肽，其中所述四個KRAS肽各自包含選自G12D、G12V、G12S、G12R、G12C、G12A、G12F、G13D和Q61H的不同突變。
9.權利要求8的多肽，其中所述四個KRAS肽分別包含
10.權利要求6-9中任一項的多肽，其中所述四個KRAS肽的長度相同，優選均為27個氨基酸。
11.權利要求6的多肽，其包含SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3或SEQ?ID?NO:4的氨基酸序列。
12.權利要求6-11中任一項的多肽，其在N端還包含信號肽序列，并且在其C端還包含MHC-I的跨膜-胞內段結構域序列。
13.權利要求12的多肽，其中所述信號肽序列包含SEQ?ID?NO:15的氨基酸序列；和/或其中所述MHC-I的跨膜-胞內段結構域序列包含SEQ?ID?NO:16的氨基酸序列。
14.權利要求6-13中任一項的多肽，其還包含一個或多個接頭，優選GS接頭。
15.權利要求14的多肽，其中所述接頭包含SEQ?ID?NO:84或SEQ?ID?NO:85的氨基酸序列。
16.權利要求12-15中任一項的多肽，其包含SEQ?ID?NO:17、SEQ?ID?NO:18或SEQ?IDNO:19的氨基酸序列。
17.一種多核苷酸，其編碼權利要求1-16中任一項的多肽。
18.權利要求17的多核苷酸，其包含SEQ?ID?NO:23、24、25和26之一的核苷酸序列或者與SEQ?ID?NO:23、24、25和26之一具有至少80％相同性的核苷酸序列。
19.權利要求17的多核苷酸，其包含SEQ?ID?NO:32、33、34和35之一的核苷酸序列或者與SEQ?ID?NO:32、33、34和35之一具有至少80％相同性的核苷酸序列。
20.一種多核苷酸，其包含編碼權利要求1-16中任一項的多肽的多核苷酸序列，并且還包含編碼第二多肽的核苷酸序列。
21.權利要求20的多核苷酸，其中所述第二多肽為細胞因子，優選人干擾素α1或人FMS相關酪氨酸激酶3配體。
22.權利要求21的多核苷酸，其中所述第二多肽包含SEQ?ID?NO:13或SEQ?IDNO:14的氨基酸序列。
23.權利要求20-22中任一項的多核苷酸，其還包...
【技術特征摘要】
1.一種多肽，其包含2個或更多個突變肽的多聯體，其中所述突變肽各自獨立地包含對應于kras多肽、hras多肽或nras多肽中的至少27個連續氨基酸的氨基酸序列。
2.權利要求1的多肽，其中所述hras多肽包含seq?id?no:86的氨基酸序列，并且與seqid?no:86相比，所述突變肽包含選自g12v、q61l、q61r和q61h的hras突變。
3.權利要求1或2的多肽，其中所述nras多肽包含seq?id?no:87的氨基酸序列，并且與seq?id?no:87相比，所述突變肽包含選自g12d、g13d、q61k和q61r的nras突變。
4.權利要求1-3中任一項的多肽，其中所述kras多肽包含seq?id?no:1的氨基酸序列，并且與seq?id?no:1相比，所述突變肽包含選自g12d、g12v、g12s、g12r、g12c、g12a、g12f、g13d和q61h的kras突變。
5.權利要求4的多肽，其中所述突變肽包含第一kras肽、第二kras肽、第三kras肽和第四kras肽；其中每個kras肽各自包含seq?id?no:1的從n端開始的至少27個連續氨基酸，并且所述kras肽包含選自g12d、g12v、g12s、g12r、g12c、g12a、g12f和g13d的突變；或者包含seq?id?no:1的從第48位開始的至少27個連續氨基酸，并且所述kras肽包含q61h的突變。
6.一種多肽，其包含第一kras肽、第二kras肽、第三kras肽和第四kras肽的四聯體，其中每個kras肽各自包含對應于seq?id?no:1中的至少27個連續氨基酸的氨基酸序列，并且與seq?id?no:1相比，各自包含選自g12d、g12v、g12s、g12r、g12c、g12a、g12f、g13d和q61h的突變。
7.權利要求6的多肽，其中所述每個kras肽各自包含seq?id?no:1的從n端開始的至少27個連續氨基酸，并且所述kras肽包含選自g12d、g12v、g12s、g12r、g12c、g12a、g12f和g13d的突變；或者包含seq?id?no:1的從第48位開始的至少27個連續氨基酸，并且所述kras肽包含q61h的突變。
8.權利要求6或7的多肽，其中所述四個kras肽各自包含選自g12d、g12v、g12s、g12r、g12c、g12a、g12f、g13d和q61h的不同突變。
9.權利要求8的多肽，其中所述四個kras肽分別包含
10.權利要求6-9中任一項的多肽，其中所述四個kras肽的長度相同，優選均為27個氨基酸。
11.權利要求6的多肽，其包含seq?id?no:2、seq?id?no:3或seq?id?no:4的氨基酸序列。
12.權利要求6-11中任一項的多肽，其在n端還包含信號肽序列，并且在其c端還包含mhc-i的跨膜-胞內段結構域序列。
13.權利要求12的多肽，其中所述信號肽序列包含seq?id?no:15的氨基酸序列；和/或其中所述mhc-i的跨膜-胞內段結構域序列包含seq?id?no:16的氨基酸序列。
14.權利要求6-13中任一項的多肽，其還包含一個或多個接頭，優選gs接頭。
15.權利要求14的多肽，其中所述接頭包含seq?id?no:84或seq?id?no:85的氨基酸序列。
16.權利要求12-15中任一項的多肽，其包含seq?id?no:17、seq?id?no:18或seq?idno:19的氨基酸序列。
17.一種多核苷酸，其編碼權利要求1-16中任一項的多肽。
18.權利要求17的多核苷酸，其包含seq?id?no:23、24、25和26之一的核苷酸序列或者與seq?id?no:23、24、25和26之一具有至少80％相同性的核苷酸序列。
19.權利要求17的多...
【專利技術屬性】
技術研發人員：周驥，沈海法，李航文，蔡毅驊，王學麗，
申請(專利權)人：斯微上海生物科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。