【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物醫藥，尤其是一種特異性識別cldn18.2的核酸適體及其應用。
技術介紹
1、緊密連接蛋白18.2(cldn18.2)蛋白是緊密連接蛋白18的一個特異亞型，屬于緊密連接蛋白家族。作為一種高度選擇性的生物標志物，它在正常組織中的表達相對有限，但在胃癌[1]與胰腺癌[2]中常表現出異常高水平的表達。這種特異性使得cldn18.2成為早期診斷和治療這些腫瘤的一個潛在目標。在疾病的進展中，cldn18.2不僅參與腫瘤細胞的增殖和分化，還涉及到腫瘤細胞的遷移和侵襲過程，影響腫瘤的擴散和患者的預后[3]。因此，對cldn18.2的研究不僅有助于我們深入理解腫瘤的生物學特性，也為開發針對這些惡性腫瘤的新型診療方法提供了可能性。
2、核酸適配體(aptamer)是指通過指數富集的配基系統進化技術(selex)篩選分離得到的dna或者rna分子，它可以與其他靶標如蛋白質、金屬離子、小分子、多肽甚至整個細胞進行高親和力和特異性的結合，因此在生化分析，環境監測，基礎醫學，新藥合成等方面展示廣闊的前景[4]。核酸適配體與抗體相比分子量小，穩定性更好，易改造修飾，無免疫原性，制作周期短，可以通過人工合成等優勢，免去了動物免疫、飼養、蛋白提取和純化等一系列流程[5]。因此如果能找到與cldn18.2蛋白具有更高的親和力，并且具有高特異性的核酸適配體，將有助于實現cldn18.2蛋白的高靈敏度和高特異性檢測，有助于靶向cldn18.2蛋白的藥物開發。
3、因此，需要設計一種特異性識別cldn18.2的核酸適體及其應用
4、[1]sanada?y,oue?n,mitani?y,et?al.down-regulation?of?theclaudin-18gene,identified?through?serial?analysis?of?geneexpression?data?analysis,ingastric?cancer?with?an?intestinalphenotype[j].j?pathol,2006,208(5):633-42.
5、doi:10.1002/path.1922
6、[2]karanjawala?z?e,illei?p?b,ashfaq?r,et?al.new?markers?ofpancreaticcancer?identified?through?differential?gene?expressionanalyses:claudin?18andannexin?a8[j].am?j?surg?pathol,2008,
7、32(2):188-96.doi:10.1097/pas.0b013e31815701f3
8、[3]kyuno?d,takasawa?a,takasawa?k,et?al.claudin-18.2as?atherapeutictarget?in?cancers:cumulative?findings?from?basicresearch?and?clinical?trials[j].tissue?barriers,2022,10(1):1967080.doi:10.1080/21688370.2021.1967080
9、
10、[4]zhao?y,xu?d,tan?w.aptamer-functionalizednano/micro-materials?forclinical?diagnosis:isolation,release?andbioanalysis?of?circulating?tumorcells[j].integr?biol(camb),2017,
11、9(3):188-205.doi:10.1039/c6ib00239k
12、[5]jin?c,qiu?l,li?j,et?al.cancer?biomarker?discovery?using?dna
13、aptamers[j].analyst,2016,141(2):461-6.
14、doi:10.1039/c5an01918d
技術實現思路
1、為了克服現有技術中的缺陷，提供一種特異性識別cldn18.2的核酸適體及其應用。
2、本專利技術通過下述方案實現：
3、一種特異性識別cldn18.2的核酸適體，所述核酸適體具有如cldn18.2-5、cldn18.2-13、cldn18.2-35、cldn18.2-3所示的序列或與其同源性70％以上的核苷酸序列。
4、所述核酸適體經過修飾，所述修飾為堿基或磷酸骨架的修飾。
5、所述堿基修飾為f取代、moe修飾、ome修飾。
6、所述磷酸骨架修飾為部分硫代或全硫代。
7、所述核酸適體經過末端偶連，所述偶連物包括熒光基團、藥物、堿基類似物、糖修飾、肽、放射性物質、生物素以及量子點。
8、所述核酸適體是經過序列轉換的核酸適體；
9、所述序列轉換為將dna序列翻譯為rna序列，和/或翻譯成肽核酸序列。
10、一種特異性識別cldn18.2的核酸適體的制備方法，該方法包括以下步驟：
11、第一步、通過蛋白篩選的方式獲得cldn18.2靶向的aptamer文庫；
12、第二步、從第一步得到的aptamer文庫中挑選出多條豐度最高的核酸適體；
13、第三步、從第二步得到的多條豐度最高的核酸適體中挑選出對cldn18.2親和力較高的序列，即為特異性識別cldn18.2的核酸適體；
14、在第二步中，通過測序及序列進化分析挑選出多條豐度最高的核酸適體；
15、在第二步中，挑選出至少96條豐度最高的核酸適體；
16、在第三步中，從第二步得到的多條豐度最高的核酸適體中挑選進化較好的序列進行結合驗證，得到親和力較高的序列即為特異性識別cldn18.2的核酸適體；
17、在第三步中，得到至少3條親和力較高的序列。
18、一種特異性識別cldn18.2的核酸適體的應用，所述特異性識別cldn18.2的核酸適體用于cldn18.2的靶向。
19、所述特異性識別cldn18.2的核酸適體用于cldn18.2的靶向降解、靶向治療、靶向給藥、檢測分析。
20、所述特異性識別cldn18.2的核酸適體用于胃癌的靶向治療。
21、本專利技術的有益效果為：
22、本專利技術通過蛋白篩選技術獲得一種可以識別cldn18.2蛋白的核酸適體，可以用于cldn18.2陽性的鑒別及靶向。
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1.特異性識別CLDN18.2的核酸適體，其特征在于：所述核酸適體具有如CLDN18.2-5、CLDN18.2-13、CLDN18.2-35、CLDN18.2-3所示的序列或與其同源性70％以上的核苷酸序列。
2.根據權利要求1所述的特異性識別CLDN18.2的核酸適體，其特征在于：所述核酸適體經過修飾，所述修飾為堿基或磷酸骨架的修飾。
3.根據權利要求2所述的特異性識別CLDN18.2的核酸適體，其特征在于：所述堿基修飾為F取代、MOE修飾、OME修飾。
4.根據權利要求2所述的特異性識別CLDN18.2的核酸適體，其特征在于：所述磷酸骨架修飾為部分硫代或全硫代。
5.根據權利要求1所述的特異性識別CLDN18.2的核酸適體，其特征在于：所述核酸適體經過末端偶連，所述偶連物包括熒光基團、藥物、堿基類似物、糖修飾、肽、放射性物質、生物素以及量子點。
6.根據權利要求1所述的特異性識別CLDN18.2的核酸適體，其特征在于：所述核酸適體是經過序列轉換的核酸適體；
7.制備如權利要求1-6任一權利項所述的特異性識
8.如權利要求1-6任一權利項所述的特異性識別CLDN18.2的核酸適體的應用，其特征在于：所述特異性識別CLDN18.2的核酸適體用于CLDN18.2的靶向。
9.根據權利要求8所述的特異性識別CLDN18.2的核酸適體的應用，其特征在于：所述特異性識別CLDN18.2的核酸適體用于CLDN18.2的靶向降解、靶向治療、靶向給藥、檢測分析。
10.根據權利要求8所述的特異性識別CLDN18.2的核酸適體的應用，其特征在于：所述特異性識別CLDN18.2的核酸適體用于胃癌的靶向治療。
...【技術特征摘要】
1.特異性識別cldn18.2的核酸適體，其特征在于：所述核酸適體具有如cldn18.2-5、cldn18.2-13、cldn18.2-35、cldn18.2-3所示的序列或與其同源性70％以上的核苷酸序列。
2.根據權利要求1所述的特異性識別cldn18.2的核酸適體，其特征在于：所述核酸適體經過修飾，所述修飾為堿基或磷酸骨架的修飾。
3.根據權利要求2所述的特異性識別cldn18.2的核酸適體，其特征在于：所述堿基修飾為f取代、moe修飾、ome修飾。
4.根據權利要求2所述的特異性識別cldn18.2的核酸適體，其特征在于：所述磷酸骨架修飾為部分硫代或全硫代。
5.根據權利要求1所述的特異性識別cldn18.2的核酸適體，其特征在于：所述核酸適體經過末端偶連，所述偶連物包括熒光基團、藥物、堿基類似物、糖修飾、肽、放射性物質、生物素...
【專利技術屬性】
技術研發人員：譚蔚泓，孫洋，曹暉，屠霖，潘濤，鄭一菡，
申請(專利權)人：上海交通大學醫學院附屬仁濟醫院，
類型：發明
國別省市：
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