【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專(zhuān)利技術(shù)涉及分子遺傳育種，特別是涉及一種與大豆主莖節(jié)數(shù)相關(guān)的kasp分子標(biāo)記及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、大豆為我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)糧油作物，大豆中含有異黃酮、蛋白質(zhì)、氨基酸和脂肪等多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)而飽受全球人民的青睞，同時(shí)大豆異黃酮、大豆多肽、大豆磷脂、大豆低聚糖、大豆皂甙等，具有抗腫瘤、降血脂、預(yù)防心血管疾病等作用，在保健食品和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有著極高的潛在應(yīng)用價(jià)值。野生大豆古時(shí)還被當(dāng)作珍貴藥材。
2、目前，中國(guó)大豆出口貿(mào)易量極低，而進(jìn)口貿(mào)易量在較高水平的基礎(chǔ)上仍持續(xù)不斷攀升，且進(jìn)口貿(mào)易被跨國(guó)公司控制，這樣的貿(mào)易現(xiàn)狀對(duì)大豆產(chǎn)業(yè)安全造成了影響。要想打贏這場(chǎng)糧食保衛(wèi)戰(zhàn)，中國(guó)人就要把飯碗牢牢抓在自己的手里，最有效的解決措施就是：第一加大大豆種植面積，第二提高大豆產(chǎn)量或者培育高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的大豆新品種。在耕地面積有限的情況下第一種解決方法顯然是不可行的，可見(jiàn)我們要著手在第二種方法上下功夫。而現(xiàn)有技術(shù)中，牛永鋒(2023)利用相關(guān)性分析、回歸分析和灰色關(guān)聯(lián)度分析等多元分析法明確了黃淮海地區(qū)(南片)大豆產(chǎn)量與主要性狀的關(guān)系。結(jié)果表明，主莖節(jié)數(shù)和百粒重的關(guān)聯(lián)度最高；仲義等(2011)發(fā)現(xiàn)，主莖節(jié)數(shù)、分枝數(shù)、莢數(shù)、株高對(duì)產(chǎn)量均有較大貢獻(xiàn)；陸娣(2018)等通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)大豆的蛋白質(zhì)含量和脂肪含量與主莖節(jié)數(shù)也呈顯著相關(guān)關(guān)系；通過(guò)以上研究結(jié)果均說(shuō)明主莖節(jié)數(shù)是影響產(chǎn)量的主要因素。因此，在育種過(guò)程中應(yīng)注重主莖節(jié)數(shù)的篩選，促進(jìn)單株粒重和產(chǎn)量的提高。進(jìn)一步探究大豆主莖節(jié)數(shù)數(shù)量相關(guān)候選基因，為后續(xù)功能性大豆分子育種奠定基礎(chǔ)尤為重要。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)
1、本專(zhuān)利技術(shù)的目的是提供一種與大豆主莖節(jié)數(shù)相關(guān)的kasp分子標(biāo)記及其應(yīng)用，以解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，該kasp分子標(biāo)記可以靈敏、高效、低成本的預(yù)測(cè)大豆主莖節(jié)數(shù)數(shù)量，利于篩選培育高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的大豆品種，輔助大豆功能性分子育種，進(jìn)一步縮短育種進(jìn)程。
2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本專(zhuān)利技術(shù)提供了如下方案：
3、本專(zhuān)利技術(shù)提供一種與大豆主莖節(jié)數(shù)相關(guān)的kasp分子標(biāo)記，所述kasp分子標(biāo)記的核苷酸序列如seq?id?no:1所示，seq?id?no:1所示序列的第20位存在a/g堿基突變。
4、本專(zhuān)利技術(shù)還提供一種擴(kuò)增所述的分子標(biāo)記的引物組，所述引物組包括seq?id?no:2-4所示的引物。
5、本專(zhuān)利技術(shù)還提供一種鑒定大豆主莖節(jié)數(shù)的試劑盒，包括所述的引物組。
6、本專(zhuān)利技術(shù)還提供一種所述的kasp分子標(biāo)記或所述的引物組或所述的試劑盒在以下任一項(xiàng)中的應(yīng)用：
7、(1)在鑒定大豆主莖節(jié)數(shù)中的應(yīng)用；
8、(2)在培育選擇大豆主莖節(jié)數(shù)多少的轉(zhuǎn)基因大豆中的應(yīng)用；
9、(3)在改良大豆種質(zhì)資源中的應(yīng)用；
10、(4)在培育高產(chǎn)大豆中的應(yīng)用。
11、本專(zhuān)利技術(shù)還提供一種鑒定大豆主莖節(jié)數(shù)的方法，包括以下步驟：
12、以待測(cè)大豆樣品的基因組dna為模板，利用seq?id?no:2-4所示的引物組進(jìn)行熒光定量pcr擴(kuò)增，根據(jù)所得擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行基因型分型，以鑒定所述待測(cè)大豆樣品的主莖節(jié)數(shù)。
13、優(yōu)選的是，若擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光與seq?id?no：2所示引物標(biāo)記的熒光基團(tuán)的熒光一致，則所述待測(cè)大豆樣品為主莖節(jié)數(shù)多的大豆；若擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光與seq?id?no：3所示引物標(biāo)記的熒光基團(tuán)的熒光一致，則所述待測(cè)大豆樣品為主莖節(jié)數(shù)較少的大豆。
14、優(yōu)選的是，所述熒光定量pcr擴(kuò)增的反應(yīng)體系中seq?id?no:2所示的引物f1、seqid?no:3所示的引物f2和seq?id?no:4所示的引物r的體積比為2:2:5。
15、優(yōu)選的是，所述熒光定量pcr擴(kuò)增的反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性15min；94℃變性20s，61-55℃梯度復(fù)性/延伸1min，每個(gè)循環(huán)降低0.6℃，10個(gè)循環(huán)；94℃變性20s，55℃復(fù)性/延伸1min，26個(gè)循環(huán)。
16、本專(zhuān)利技術(shù)公開(kāi)了以下技術(shù)效果：
17、本專(zhuān)利技術(shù)開(kāi)發(fā)一個(gè)與大豆主莖節(jié)數(shù)顯著相關(guān)的kasp分子標(biāo)記，該分子標(biāo)記的s19_45146919位點(diǎn)存在a/g突變(即seq?id?no：1所示序列的第20位存在a/g突變)，利用該分子標(biāo)記對(duì)大豆莖節(jié)數(shù)進(jìn)行關(guān)聯(lián)性分析，發(fā)現(xiàn)基因型為aa的大豆品種主莖節(jié)數(shù)數(shù)量均值顯著高于基因型為gg的大豆品種。本專(zhuān)利技術(shù)利用kasp分子標(biāo)記可以靈敏、高效、低成本的預(yù)測(cè)大豆主莖節(jié)數(shù)多少，利于篩選培育高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)量的大豆品種，輔助大豆功能性分子育種，進(jìn)一步縮短育種進(jìn)程。
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1.一種與大豆主莖節(jié)數(shù)相關(guān)的KASP分子標(biāo)記，其特征在于，所述KASP分子標(biāo)記的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示，SEQ?ID?NO:1所示序列的第20位存在A/G堿基突變。
2.一種擴(kuò)增權(quán)利要求1所述的分子標(biāo)記的引物組，其特征在于，所述引物組包括SEQ?IDNO:2-4所示的引物。
3.一種鑒定大豆主莖節(jié)數(shù)的試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求2所述的引物組。
4.一種權(quán)利要求1所述的KASP分子標(biāo)記或權(quán)利要求2所述的引物組或權(quán)利要求3所述的試劑盒在以下任一項(xiàng)中的應(yīng)用：
5.一種鑒定大豆主莖節(jié)數(shù)的方法，其特征在于，包括以下步驟：
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，若擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光與SEQ?ID?NO：2所示引物標(biāo)記的熒光基團(tuán)的熒光一致，則所述待測(cè)大豆樣品為主莖節(jié)數(shù)多的大豆；若擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光與SEQ?ID?NO：3所示引物標(biāo)記的熒光基團(tuán)的熒光一致，則所述待測(cè)大豆樣品為主莖節(jié)數(shù)較少的大豆。
7.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述熒光定量PCR擴(kuò)增的反應(yīng)體系中SEQ?IDNO:2所示的引物F1、SE
8.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述熒光定量PCR擴(kuò)增的反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性15min；94℃變性20s，61-55℃梯度復(fù)性/延伸1min，每個(gè)循環(huán)降低0.6℃，10個(gè)循環(huán)；94℃變性20s，55℃復(fù)性/延伸1min，26個(gè)循環(huán)。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種與大豆主莖節(jié)數(shù)相關(guān)的kasp分子標(biāo)記，其特征在于，所述kasp分子標(biāo)記的核苷酸序列如seq?id?no:1所示，seq?id?no:1所示序列的第20位存在a/g堿基突變。
2.一種擴(kuò)增權(quán)利要求1所述的分子標(biāo)記的引物組，其特征在于，所述引物組包括seq?idno:2-4所示的引物。
3.一種鑒定大豆主莖節(jié)數(shù)的試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求2所述的引物組。
4.一種權(quán)利要求1所述的kasp分子標(biāo)記或權(quán)利要求2所述的引物組或權(quán)利要求3所述的試劑盒在以下任一項(xiàng)中的應(yīng)用：
5.一種鑒定大豆主莖節(jié)數(shù)的方法，其特征在于，包括以下步驟：
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，若擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光與seq?id?...
【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：王軍燕，陳華濤，王顯生，周苗苗，王學(xué)軍，魏利斌，張紅梅，張威，王瓊，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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