【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物檢測，尤其涉及一種曲拉通x-100殘留的液相色譜檢測方法。
技術(shù)介紹
1、脫細(xì)胞基質(zhì)是通過物理、化學(xué)方法將皮膚組織的表皮細(xì)胞及真皮層內(nèi)的細(xì)胞成分去除，并保留了正常膠原三維結(jié)構(gòu)及基底膜的真皮支架。脫細(xì)胞基質(zhì)具有低抗原性、良好的組織相容性和穩(wěn)定的理化性質(zhì)，是一種理想的生物材料。
2、曲拉通x-100是一種非離子表面活性劑，能與生物膜中的磷脂等脂質(zhì)結(jié)合形成可溶性復(fù)合物從而破壞生物膜，因此常用于脫細(xì)胞基質(zhì)產(chǎn)品的制備過程中，但曲拉通x-100具有人體毒性，如果未清洗干凈可能帶來安全隱患，需要對其殘留量進(jìn)行檢測。
3、一方面，由于曲拉通x-100分子結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)以及其作為非離子表面活性劑的特征，其在常規(guī)溶劑中穩(wěn)定性差，所以導(dǎo)致常規(guī)方法下檢測靈敏度不高，準(zhǔn)確度一般；另一方面，脫細(xì)胞基質(zhì)是一種三維多孔材料，具有吸附性，這也導(dǎo)致采用常規(guī)的溶劑及方法很難將基質(zhì)中吸附的曲拉通x-100成分析出，常規(guī)方法下得到的曲拉通x-100分離度差，回收率低，從而導(dǎo)致檢測結(jié)果偏低。上述兩方面的原因最后導(dǎo)致脫細(xì)胞基質(zhì)中的曲拉通檢測結(jié)果失真，影響對于脫細(xì)胞基質(zhì)產(chǎn)品安全性的判斷。
4、綜上所述，業(yè)界迫切需要一種能準(zhǔn)確地檢測脫細(xì)胞基質(zhì)中曲拉通x-100殘留的檢測方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)提供一種曲拉通x-100殘留的液相色譜檢測方法，用以解決現(xiàn)有檢測脫細(xì)胞基質(zhì)中曲拉通x-100殘留的方法存在靈敏度不高、準(zhǔn)確度不高等問題。
2、根據(jù)本專利技術(shù)的第一方面，
3、色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠柱；
4、流動相：包括流動相a和流動相b，流動相a是含三氟乙酸的異丙醇溶液，流動相b是水。
5、上述方案中，本專利技術(shù)一種曲拉通x-100殘留的液相色譜檢測方法采用十八烷基硅烷鍵合硅膠柱作為色譜柱，同時(shí)采用特定的流動相可以精確測定待測樣品中曲拉通x-100的殘留量，具有較高的靈敏度、準(zhǔn)確性和精確度。
6、為了進(jìn)一步地提高液相色譜檢測方法的靈敏度、準(zhǔn)確性和精確度，進(jìn)一步地，所述流動相a是含三氟乙酸的異丙醇溶液，所述三氟乙酸的體積百分?jǐn)?shù)為0.08％～0.12％，優(yōu)選為0.1％；所述流動相a和所述流動相b的體積比為70:30-95:5，優(yōu)選為80:20。
7、進(jìn)一步地，包括如下步驟：
8、步驟(1)空白溶液的制備：取異丙醇和三氟乙酸，用水定容得到空白溶液；
9、步驟(2)標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液的制備：取曲拉通x-100標(biāo)準(zhǔn)品，用所述空白溶液定容并稀釋成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液；將待測樣品放入所述空白溶液中進(jìn)行萃取，得到供試品溶液；
10、步驟(3)色譜條件的設(shè)置包括：
11、色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠柱；
12、流動相：包括流動相a和流動相b，流動相a是含三氟乙酸的異丙醇溶液，流動相b是水；
13、步驟(4)檢測方法：取所述空白溶液、所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液及所述供試品溶液分別注入液相色譜儀，記錄峰面積，使用外標(biāo)法計(jì)算所述待測樣品中曲拉通x-100殘留量。
14、上述方案中，本專利技術(shù)采用包含有異丙醇和三氟乙酸的空白溶液對待測樣品進(jìn)行萃取，能夠改變待測樣品表面的離子環(huán)境，使吸附在待測樣品表面的曲拉通x-100可以最大限度的全部溶出，然后進(jìn)一步搭配本專利技術(shù)所提供的色譜柱和特定色譜條件，可以更精確測定待測樣品中曲拉通的殘留量，進(jìn)一步提高檢測的靈敏度、準(zhǔn)確性和精確度。
15、進(jìn)一步地，步驟(1)中，所述空白溶液中，異丙醇、三氟乙酸和水的體積比為6:2:2-8:1:1，優(yōu)選為7:1:2。
16、進(jìn)一步地，步驟(2)中，所述的標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度為20-100ppm。
17、進(jìn)一步地，所述待測樣品與所述空白溶液的重量比為1：(4-6)，優(yōu)選為1:5。通過選定合理范圍值的待測樣品與空白溶液的重量比，有利于充分提取待測樣品中的曲拉通x-100。
18、進(jìn)一步地，所述萃取的時(shí)間為1-4h，優(yōu)選為4h。萃取溫度為室溫。需要說明的是室溫一般指的是10-30℃。通過對萃取條件的合理設(shè)計(jì)，能使得待測樣品中的曲拉通x-100得到充分有效的提取，進(jìn)而有利于提高檢測的準(zhǔn)確性。
19、進(jìn)一步地，所述步驟(3)色譜條件的設(shè)置還包括：檢測器為紫外檢測器，檢測波長為200-235nm。紫外吸收檢測器不僅靈敏度高、噪音低、線性范圍寬、有較好的選擇性，而且對環(huán)境溫度、流動相組成變化和流速波動不太敏感，通過選定合理范圍值的檢測波長，能提高檢測的靈敏度。
20、進(jìn)一步地，所述步驟(3)色譜條件的設(shè)置還包括：流速為0.8-1.2ml/min；柱溫為25-40℃，優(yōu)選地，流速為1.0ml/min；柱溫為30℃。通過將流速和柱溫設(shè)定在合理的范圍值內(nèi)，有利于待測樣品中的曲拉通x-100與其他雜質(zhì)之間的分離。
21、進(jìn)一步地，所述色譜柱的規(guī)格為4.6mm×250mm，5μm。通過選定合適的色譜柱的規(guī)格，能夠?qū)Υ郎y樣品中的曲拉通x-100進(jìn)行有效分離。
22、進(jìn)一步地，計(jì)算所述待測樣品中曲拉通x-100殘留量的公式如下：
23、
24、式中：a供—供試品溶液的峰面積；a標(biāo)—標(biāo)準(zhǔn)品溶液的峰面積；c標(biāo)—標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度，ppm；w供—供試品的質(zhì)量，g；v—空白溶液體積，ml。
25、進(jìn)一步地，所述待測樣品為脫細(xì)胞基質(zhì)。
26、本專利技術(shù)的有益效果：
27、本專利技術(shù)一種曲拉通x-100殘留的液相色譜檢測方法采用特定比例組成下的空白溶液萃取，能夠改變脫細(xì)胞基質(zhì)表面的離子環(huán)境，使吸附在脫細(xì)胞基質(zhì)表面的曲拉通x-100可以最大限度的全部溶出。在本專利技術(shù)所提供的色譜柱和特定色譜條件的共同支持下，可以精確測定脫細(xì)胞基質(zhì)中曲拉通的殘留量，具有較高的靈敏度、準(zhǔn)確性和精確度。
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1.一種曲拉通X-100殘留的液相色譜檢測方法，其特征在于，采用高效液相色譜作為檢測系統(tǒng)，色譜條件包括：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液相色譜檢測方法，其特征在于，所述流動相A是含三氟乙酸的異丙醇溶液，所述三氟乙酸的體積百分?jǐn)?shù)為0.08％～0.12％，優(yōu)選為0.1％；所述流動相A和所述流動相B的體積比為70:30-95:5，優(yōu)選為80:20。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的液相色譜檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的液相色譜檢測方法，其特征在于，步驟(1)中，所述空白溶液中，異丙醇、三氟乙酸和水的體積比為6:2:2-8:1:1，優(yōu)選為7:1:2。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的液相色譜檢測方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度為20-100ppm；和/或，所述待測樣品與所述空白溶液的重量比為1：(4-6)，優(yōu)選為1:5；和/或，所述萃取的時(shí)間為1-4h，優(yōu)選為4h。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的液相色譜檢測方法，其特征在于，所述步驟(3)色譜條件的設(shè)置還包括：檢測器為紫外檢測器，檢測波長為200-
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的液相色譜檢測方法，其特征在于，所述步驟(3)色譜條件的設(shè)置還包括：流速為0.8-1.2mL/min；柱溫為25-40℃，優(yōu)選地，流速為1.0mL/min；柱溫為30℃。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的液相色譜檢測方法，其特征在于，所述色譜柱的規(guī)格為4.6mm×250mm，5μm。
9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的液相色譜檢測方法，其特征在于，計(jì)算所述待測樣品中曲拉通X-100殘留量的公式如下：
10.根據(jù)權(quán)利要求3-9任一項(xiàng)所述的液相色譜檢測方法，其特征在于，所述待測樣品為脫細(xì)胞基質(zhì)。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種曲拉通x-100殘留的液相色譜檢測方法，其特征在于，采用高效液相色譜作為檢測系統(tǒng)，色譜條件包括：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液相色譜檢測方法，其特征在于，所述流動相a是含三氟乙酸的異丙醇溶液，所述三氟乙酸的體積百分?jǐn)?shù)為0.08％～0.12％，優(yōu)選為0.1％；所述流動相a和所述流動相b的體積比為70:30-95:5，優(yōu)選為80:20。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的液相色譜檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的液相色譜檢測方法，其特征在于，步驟(1)中，所述空白溶液中，異丙醇、三氟乙酸和水的體積比為6:2:2-8:1:1，優(yōu)選為7:1:2。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的液相色譜檢測方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度為20-100ppm；和/或，所述待測樣品與所述空白溶液的重量比為1...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：趙霄雨，黃兆輝，白露，傅維擎，馮嬌燕，侯哲，
申請(專利權(quán))人：煙臺德勝海洋生物科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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