【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術屬于多肽藥物，具體涉及一種司美格魯肽的制備方法。
技術介紹
1、司美格魯肽英文名稱為semaglutide，司美格魯肽為glp-1類似物，與人?glp-1有94%同源性。其是由丹麥諾和諾德制藥公司開發(fā)生產的一款長效胰高血糖素樣-1（glp-1）類似物，用于治療ii型糖尿病。2017年12月，司美格魯肽注射液在美國批準上市，2021年4月，中國國家藥品監(jiān)督管理局（nmpa）批準上市，同年12月3日納入國家醫(yī)保乙類藥品。2019年9月，司美格魯肽的口服制劑獲fda批準，用于ii型糖尿病血糖控制。2021年6月，注射制劑獲fda批準用于超重成年人降重減肥管理。此外研究發(fā)現(xiàn)，司美格魯肽有潛力治療癌癥、阿爾茨海默癥和帕金森病，并能降低心血管疾病風險等。
2、從結構上看，semaglutide是glp-1（7-37）鏈上8位aib取代了ala，34位arg取代了lys，26位上lys接上了十八烷二酸脂肪鏈、谷氨酸和短鏈的peg修飾。peg修飾后不但可以與白蛋白緊密結合，掩蓋dpp-4酶水解位點，還能降低腎排泄，可延長生物半衰期，達到長效的目的。司美格魯肽的結構如下：
3、。
4、目前多肽藥物最有效的化學合成方法是固相合成法。也就是從多肽的羧基端開始，將第一個氨基酸連接到樹脂上后，脫去氨基酸氨基的保護基，按照肽序，偶聯(lián)下一個氨基酸，脫去氨基保護基，再偶聯(lián)，重復循環(huán)的操作直到完成氨基酸組裝。將多肽從樹脂上裂解下來同時去除所有的保護基就可以得到多肽粗品，再經過純化、凍干得到多肽原料藥（api）。>
5、司美格魯肽采用常規(guī)的固相合成方法具有很大的挑戰(zhàn)性，體現(xiàn)在主鏈上有大量疏水性氨基酸使得肽鏈之間氫鍵穩(wěn)固，產生嚴重的折疊；肽鏈與肽鏈之間的作用力增強，引起樹脂收縮，增加了氨基酸偶聯(lián)的難度，降低了偶聯(lián)的反應活性和效率，反應收率下降，成本上升。產業(yè)化化學制備司美格魯肽難度不小。
6、因此，迫切需要建立一種低成本、高品質、操作簡單的產業(yè)化制備司美格魯肽方法。
技術實現(xiàn)思路
1、針對現(xiàn)有技術的不足，本專利技術提供了一種高收率、適用于工業(yè)化生產的司美格魯肽合成方案，且合成的司美格魯肽的純度高。
2、本專利技術提供一種司美格魯肽的合成方法，所述司美格魯肽的氨基酸序列為h-his7-aib8-glu9-gly10-thr11-phe12-thr13-ser14-asp15-val16-ser17-ser18-tyr19-leu20-glu21-gly22-gln23-ala24-ala25-lys26（aeea-aeea-g1u（α-octadecanedioic））-glu27-phe28-ile29-ala30-trp31-leu32-val33-arg34-gly35-arg36-gly37-oh，其特征在于，所述制備方法包括：
3、以樹脂為固相載體，按照司美格魯肽的一級序列，通過固相合成方法，從c端到n端依次偶聯(lián)氨基酸和二肽片段，得到司美格魯肽全保護樹脂，經裂解、純化得到司美格魯肽；
4、其中，所述二肽片段包括7~8二肽片段、9~10二肽片段、12~13二肽片段、17~18二肽片段、21~22二肽片段、24~25二肽片段、34~35二肽片段；
5、所述7~8二肽片段為boc-his（trt）-aib-oh、所述9~10二肽片段為fmoc-glu（otbu）-g1y-oh、所述12~13二肽片段為fmoc-phe-thr（tbu）-oh、所述17~18二肽片段為fmoc-ser（tbu）-ser（tbu）-oh、所述21~22二肽片段為fmoc-glu（otbu）-g1y-oh、所述24~25二肽片段為fmoc-ala-ala-oh、所述34~35二肽片段為fmoc-arg（pbf）-gly-oh。
6、優(yōu)選地，本專利技術提供的司美格魯肽的合成方法包括：
7、（1）將fmoc-gly-oh與樹脂進行偶聯(lián)，得到fmoc-gly-樹脂；
8、（2）脫除步驟（1）制得的所述fmoc-gly-樹脂上的fmoc，再依次偶聯(lián)fmoc-arg（pbf）-oh、fmoc-arg（pbf）-gly-oh、fmoc-val-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-trp（boc）-oh、fmoc-ala-oh、fmoc-ile-oh、fmoc-phe-oh、fmoc-g1u（otbu）-oh和fmoc-lys（mmt）-oh，得到fmoc-lys（mmt）-glu（otbu）-phe-ile-ala-trp（boc）-leu-val-arg（pbf）-gly-arg（pbf）-gly-樹脂；
9、（3）脫除步驟（2）制得的所述fmoc-lys（mmt）-glu（otbu）-phe-ile-ala-trp（boc）-leu-val-arg（pbf）-gly-arg（pbf）-gly-樹脂上lys側鏈的mmt保護基，在lys上偶聯(lián)側鏈dde-aeea-aeea-oh，脫去保護基dde后，在aeea上偶聯(lián)側鏈octa（otbu）-glu-otbu得到fmoc-lys[aeea-aeea-g1u（α-octa（otbu）]-glu（otbu）-phe-ile-ala-trp（boc）-leu-val-arg（pbf）-gly-arg（pbf）-gly-樹脂；
10、（4）在步驟（3）制得的所述fmoc-lys[aeea-aeea-g1u（α-octa（otbu）]-glu（otbu）-phe-ile-ala-trp（boc）-leu-val-arg（pbf）-gly-arg（pbf）-gly-樹脂上再偶聯(lián)氨基酸fmoc-ala-ala-oh、fmoc-gln（trt）-oh、fmoc-glu（otbu）-gly-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-tyr（tbu）-oh、fmoc-ser（tbu）-ser（tbu）-oh、fmoc-val-oh、fmoc-asp（otbu）-oh、fmoc-ser（tbu）-oh、fmoc-phe-thr（tbu）-oh、fmoc-thr（tbu）-oh、fmoc-glu（otbu）-gly-oh、boc-his（trt）-aib-oh，得到司美格魯肽全保護樹脂boc-his（trt）-aib-glu（otbu）-gly-thr（tbu）-phe-thr（tbu）-ser（tbu）-asp（otbu）-val-ser（tbu）-ser（tbu）-tyr（tbu）-leu-glu（otbu）-gly-gln（trt）-ala-ala-lys[aeea-aeea-g1u（α-octa（otbu）]-glu（otbu）-phe-ile-ala-trp（boc）-leu-val-arg（pbf）-gly-arg（pbf）-gly-樹脂；
11、（5）將步驟（4）制備的所述司美格魯肽全保護樹脂裂解、析晶、抽濾和干燥，得到司美格魯肽粗品；
12、（6）將步驟（5本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種司美格魯肽的制備方法，所述司美格魯肽的氨基酸序列為H-His7-Aib8-Glu9-Gly10-Thr11-Phe12-Thr13-Ser14-Asp15-Val16-Ser17-Ser18-Tyr19-Leu20-Glu21-Gly22-Gln23-Ala24-Ala25-Lys26(AEEA-AEEA-G1u(α-Octadecanedioic))-Glu27-Phe28-Ile29-Ala30-Trp31-Leu32-Val33-Arg34-Gly35-Arg36-Gly37-OH，其特征在于，所述制備方法包括：
2.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括：
3.根據(jù)權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述裂解包括使用TFA/EDT/TIS/UPW/苯酚裂解液，所述裂解液通過如下方法制備：配制體積比例為TFA/EDT/TIS/UPW=90/5/2.5/2.5的第一溶液，然后向所述第一溶液加入苯酚，所述苯酚的重量為所述第一溶液重量的2.5%。
4.根據(jù)權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述純化包括采
5.根據(jù)權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述樹脂為DEG-Wang樹脂，所述DEG-Wang樹脂的取代度為0.2~0.6mmol/g。
6.根據(jù)權利要求5述的制備方法，其特征在于，所述DEG-Wang樹脂的取代度為0.4~0.6mmol/g。
7.根據(jù)權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述偶聯(lián)采用的縮合試劑選自DIC、DEPBT和DIEA、或OXYMA/DIC。
8.根據(jù)權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）中，所述Fmoc的脫保護劑為PIP/DMF溶液，PIP的體積濃度為20%~50%。
9.根據(jù)權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）中，脫除所述Fmoc-Arg（Pbf）-Gly-Wang樹脂的Fmoc時，脫保護劑進一步含有HOBt。
10.根據(jù)權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（3）中，用于所述Mmt保護基的脫保護劑為DCM/TFA/TIS，所述DCM/TFA/TIS的體積濃度比為95/4/1。
...【技術特征摘要】
1.一種司美格魯肽的制備方法，所述司美格魯肽的氨基酸序列為h-his7-aib8-glu9-gly10-thr11-phe12-thr13-ser14-asp15-val16-ser17-ser18-tyr19-leu20-glu21-gly22-gln23-ala24-ala25-lys26(aeea-aeea-g1u(α-octadecanedioic))-glu27-phe28-ile29-ala30-trp31-leu32-val33-arg34-gly35-arg36-gly37-oh，其特征在于，所述制備方法包括：
2.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括：
3.根據(jù)權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述裂解包括使用tfa/edt/tis/upw/苯酚裂解液，所述裂解液通過如下方法制備：配制體積比例為tfa/edt/tis/upw=90/5/2.5/2.5的第一溶液，然后向所述第一溶液加入苯酚，所述苯酚的重量為所述第一溶液重量的2.5%。
4.根據(jù)權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述純化包括采用rp-hpl...
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：田茂奎，何志泉，黃偉銘，葉智銘，傅東明，陳程云，許金行，王睿睿，范琳琳，張格維，何政霖，陳立涵，林煌雄，
申請(專利權)人：福建基諾厚普生物科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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