生產(chǎn)單克隆抗體的方法和組合物技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)包括制備單克隆抗體的組合物和方法。本發(fā)明專利技術(shù)進(jìn)一步包括復(fù)制免疫系統(tǒng)成分的載體，所述免疫系統(tǒng)成分特別是免疫突觸的抗原呈遞細(xì)胞（ＡＰＣ）元件。另外，本發(fā)明專利技術(shù)可以進(jìn)一步包括合成的Ｔ細(xì)胞。（*該技術(shù)在2024年保護(hù)過期，可自由使用*）

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】?生產(chǎn)單克隆抗體的方法和組合物專利
本專利技術(shù)總的來說涉及免疫學(xué)。本專利技術(shù)進(jìn)一步涉及生產(chǎn)單克隆抗體的方法和組合物，和體外生產(chǎn)這種抗體的方法。專利技術(shù)背景將所需試劑導(dǎo)入特異性靶細(xì)胞長時(shí)間以來對科學(xué)家來說已是一種挑戰(zhàn)。試劑特異性靶向的挑戰(zhàn)是使生物靶細(xì)胞得到足夠量的試劑或正確試劑，而不使生物其余部分過多暴露于所述試劑。遞送特異性試劑的非常希望的靶是免疫系統(tǒng)。免疫系統(tǒng)是包括很多具有不同活性的不同類型細(xì)胞的復(fù)雜的身體反應(yīng)系統(tǒng)。一部分免疫系統(tǒng)的活化通常由于系統(tǒng)的其他相關(guān)部分不需要的活化而引起各種反應(yīng)。目前，沒有通過靶向免疫系統(tǒng)特異性成分產(chǎn)生特別希望的反應(yīng)的令人滿意的方法或組合物。免疫系統(tǒng)是包括各式各樣成分的復(fù)雜的身體相互作用系統(tǒng)，所述成分包括細(xì)胞和細(xì)胞因子，它們與來自身體內(nèi)部和身體外部的刺激相互作用。除直接作用以外，免疫系統(tǒng)的反應(yīng)也受到身體其他系統(tǒng)的影響，包括神經(jīng)、呼吸、循環(huán)和消化系統(tǒng)。免疫系統(tǒng)的一個(gè)眾所周知方面是它對侵入生物、體內(nèi)細(xì)胞改變或由接種疫苗呈遞的外來抗原產(chǎn)生反應(yīng)的能力。對免疫系統(tǒng)的這種活化產(chǎn)生反應(yīng)的一些第一類型細(xì)胞是吞噬細(xì)胞和天然殺傷細(xì)胞。吞噬細(xì)胞除其他細(xì)胞外包括單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和多形核嗜中性白細(xì)胞。這些細(xì)胞通常與外來抗原結(jié)合，內(nèi)在化它并常常破壞它。它們也產(chǎn)生介導(dǎo)其他免疫反應(yīng)的可溶分子，所述免疫反應(yīng)如炎癥反應(yīng)。天然殺傷細(xì)胞可以識別并破壞某些病毒感染的胚胎和腫瘤細(xì)胞。免疫反應(yīng)的其他因子包括補(bǔ)體途徑，它能夠獨(dú)立應(yīng)答外來抗原或與細(xì)胞或抗體一起作用。對于接種很重要的免疫系統(tǒng)的一個(gè)方面是免疫系統(tǒng)對特定病原體或外來抗原的特異性反應(yīng)。反應(yīng)的一部分包括對于所述外來抗原的“記憶”的確立。第二次接觸后，記憶功能允許對外來抗原產(chǎn)生更快和通常更大的反應(yīng)。淋巴細(xì)胞與其他細(xì)胞和因子一起在記憶功能和反-->應(yīng)中起著重要作用。通常，人們認(rèn)為對抗原的反應(yīng)包括體液反應(yīng)和細(xì)胞反應(yīng)。體液免疫反應(yīng)是由非細(xì)胞因子介導(dǎo)的，該因子是由細(xì)胞釋放的且發(fā)現(xiàn)在血漿或細(xì)胞內(nèi)流體中可能游離或可能不游離。免疫系統(tǒng)體液反應(yīng)的主要成分是由B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的抗體介導(dǎo)的。由細(xì)胞相互作用產(chǎn)生細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，所述細(xì)胞包括抗原呈遞細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞(B細(xì)胞)和T淋巴細(xì)胞(T細(xì)胞)。免疫反應(yīng)能力的最廣泛利用的一個(gè)方面是單克隆抗體的生產(chǎn)。20世紀(jì)70年代中期單克隆抗體(Mab)技術(shù)的來臨提供了有價(jià)值的新治療和診斷工具。研究人員和臨床醫(yī)師首次可以使用能夠與預(yù)定抗原部位結(jié)合和具有各種免疫效應(yīng)功能的無限量均一抗體。目前，生產(chǎn)單克隆抗體的技術(shù)是本領(lǐng)域熟知的。這些單克隆抗體被認(rèn)為在醫(yī)學(xué)和診斷學(xué)中擁有巨大前景。不幸的是，由于單克隆抗體治療中所固有的問題，基于這些蛋白的治療產(chǎn)品的開發(fā)受到了限制。例如，大多數(shù)單克隆抗體是從小鼠得到的，且因此，不能很好固定人補(bǔ)體。當(dāng)用于人時(shí)，它們也缺乏其他重要的免疫球蛋白功能特征。使用單克隆抗體最大的缺點(diǎn)是非人單克隆抗體當(dāng)注射給人患者時(shí)具有免疫原性的事實(shí)。注射外來抗體后，患者增加的免疫反應(yīng)可能相當(dāng)強(qiáng)烈。免疫反應(yīng)導(dǎo)致外來抗體的迅速消除，從而在初步治療后，基本上消除抗體的治療效用。不幸的是，一旦免疫系統(tǒng)對外來抗體起反應(yīng)而致敏，用相同或不同非人抗體的隨后治療可能無效或甚至危險(xiǎn)。小鼠可以容易地用外來抗原免疫以產(chǎn)生許多高親和力抗體。然而，由于小鼠抗體在人體中的呈遞，鼠抗體導(dǎo)入人將引起人抗小鼠抗體(HAMA)反應(yīng)的產(chǎn)生。在患者中使用鼠抗體通常限于數(shù)天或數(shù)周的期限。更長的治療時(shí)間段可能引起過敏反應(yīng)。此外，一旦患者中發(fā)展了HAMA，它就常常阻止用于診斷或治療目的的鼠抗體的未來的使用。為克服HAMA反應(yīng)的問題，研究人員已嘗試了修飾非人抗體的幾個(gè)方法，以使得它們像人的。這些方法包括小鼠/人嵌合、人源化和靈長類動物源化(primatization)。制備更像人抗體的早期工作使用-->組合兔和人抗體。抗體的蛋白亞單位，兔Fab片段和人Fc片段通過蛋白二硫鍵相連形成新人工蛋白分子或嵌合抗體。已經(jīng)使用重組分子生物技術(shù)來產(chǎn)生嵌合抗體。使用重組DNA技術(shù)構(gòu)建編碼小鼠抗體可變輕鏈和重鏈結(jié)構(gòu)域和人抗體輕鏈(LC)和重鏈(HC)恒定結(jié)構(gòu)域的DNA序列之間的基因融合，以允許嵌合抗體表達(dá)。這些嵌合抗體含有很多非人氨基酸序列并且對人具有免疫原性。暴露于這些嵌合抗體的患者產(chǎn)生人-抗嵌合體抗體(HACA)。HACA針對鼠V區(qū)，且還可以針對重組嵌合抗體中存在的新V區(qū)/C區(qū)(恒定區(qū))接頭。為了克服嵌合抗體的免疫原性呈現(xiàn)的一些限制，使用分子生物學(xué)技術(shù)來產(chǎn)生人源化或重構(gòu)抗體。編碼鼠單克隆抗體的抗原結(jié)合部分或互補(bǔ)決定區(qū)(CDRs)的DNA序列通過分子學(xué)方式嫁接到編碼人抗體重鏈和輕鏈構(gòu)架的DNA序列上。人源化Mabs比嵌合Mabs含有更大百分比的人抗體序列。包含大約90％人抗體和10％小鼠抗體的最終產(chǎn)物在人抗體上含有小鼠結(jié)合部位。為了保留正確的形狀和由此保留對靶抗原的結(jié)合親和力，它還含有來自小鼠Mab向人源化Mab構(gòu)架的某些氨基酸置換。在實(shí)踐中，用鼠CDRs簡單置換人CDRs不足以產(chǎn)生保留原始鼠抗體特異性的有效人源化抗體。有在人可變區(qū)中包含少量決定性鼠抗體殘基的另外需求。這些殘基的特性取決于原始鼠抗體和受體人抗體兩者的結(jié)構(gòu)。正是這些鼠抗體殘基的存在有助于在患者中產(chǎn)生HACA反應(yīng)，從而引起單克隆抗體的迅速清除和過敏反應(yīng)的擔(dān)憂。將另一個(gè)技術(shù)，稱作重修表面(resurfacing)技術(shù)，用于人源化小鼠抗體。重修表面包括在一種方法中用人抗體表面替換小鼠抗體表面，所述方法比其他人源化技術(shù)更快和更有效。這個(gè)技術(shù)提供了通過僅僅人源化重組體Fv?V區(qū)表面上可接近的那些氨基酸，使鼠單克隆抗體重設(shè)計(jì)以類似人抗體的方法。鼠單克隆抗體的重修表面可以維持重構(gòu)形式的原始小鼠單克隆抗體的抗體親抗原性，因?yàn)楸Ａ袅颂烊坏臉?gòu)架-CDR相互作用。這些抗體也有由于它們的小鼠來源而具有抗原性的問題。其他技術(shù)使用靈長類動物，而不是小鼠的序列來人源化Mabs。這個(gè)方法的基本原理稱作靈長類動物源化，是靈長類動物抗體可變區(qū)-->中的大部分序列與人的序列無法區(qū)分。治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和嚴(yán)重哮喘的靈長類動物源化抗CD4?Mabs正在開發(fā)。然而，這些Mabs對于患者的免疫系統(tǒng)仍然是外來蛋白并引起免疫反應(yīng)。在避免對外來蛋白的免疫反應(yīng)的努力中，各種制備僅含有人抗體成分的人Mabs的方法正在開發(fā)。一個(gè)方法是分離天然產(chǎn)生抗所需抗原的抗體的人B細(xì)胞克隆并使其在三體瘤(trioma)細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中生長。因?yàn)槿丝贵w僅僅抗對宿主是外來的抗原，所以人B細(xì)胞無一產(chǎn)生抗人抗原的抗體。因此，這個(gè)方法對產(chǎn)生抗人蛋白抗原的Mabs無用。產(chǎn)生人Mabs的兩個(gè)其他方法是噬菌體展示和轉(zhuǎn)基因小鼠的使用。噬菌體展示技術(shù)利用人制備抗任何可能結(jié)構(gòu)的抗體的能力。這個(gè)技術(shù)使用來自很多個(gè)體的抗體基因來產(chǎn)生大的噬菌體抗體文庫，每個(gè)噬菌體都在其表面展示功能性抗體可變結(jié)構(gòu)域。從這個(gè)文庫，根據(jù)它們結(jié)合所需抗原的能力選擇單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域。通過分子生物學(xué)技術(shù)，將具有所需結(jié)合特征的抗體可變結(jié)構(gòu)域和能最好地滿足潛在人治療產(chǎn)物的恒定結(jié)構(gòu)域組合產(chǎn)生Mab。這個(gè)技術(shù)仍缺乏抗原特異性。噬菌體文庫無法含有針對任何和所有所需抗原的每個(gè)結(jié)合區(qū)。它還可能含有缺乏特異性的結(jié)合區(qū)。因此，這個(gè)技術(shù)可能需要相當(dāng)大的工程以使抗體親和力增加至有效水平。轉(zhuǎn)基因本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種載體組合物，其包含合成的ＡＰＣ，其中合成的ＡＰＣ包含膠態(tài)金屬、抗原和成分特異性免疫刺激劑。

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】US 2003-12-2 60/526,3601.一種載體組合物，其包含合成的APC，其中合成的APC包含膠態(tài)金屬、抗原和成分特異性免疫刺激劑。2.權(quán)利要求1的載體組合物，其中所述成分特異性免疫刺激劑包括抗原、膠態(tài)金屬、佐劑、受體分子、核酸、免疫原性蛋白、輔助細(xì)胞因子/免疫刺激劑、藥物、化療劑或載體。3.權(quán)利要求1的載體組合物，其中所述成分特異性免疫刺激劑包括IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、脂質(zhì)A、磷脂酶A2、內(nèi)毒素、葡萄球菌腸毒素B、I型干擾素、II型干擾素、腫瘤壞死因子(TNF-α)、Flt-3配體、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β)、淋巴毒素、移動抑制因子、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(CSF)、單核細(xì)胞-巨噬細(xì)胞CSF、粒細(xì)胞CSF、血管上皮生長因子(VEGF)、血管生成素、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-α)、熱激蛋白、血型的碳水化合物部分、Rh因子、成纖維細(xì)胞生長因子、炎性和免疫調(diào)節(jié)蛋白、核苷酸、DNA、RNA、mRNA、有義、反義、多核苷酸、癌細(xì)胞特異性抗原、突變體p53、酪氨酸酶、粘蛋白、自身免疫抗原、免疫治療藥、血管生成或抗血管生成藥。4.權(quán)利要求3的成分特異性免疫刺激劑，其中所述癌細(xì)胞特異性抗原是MAGE、BAGE或MART。5.權(quán)利要求3的成分特異性免疫刺激劑，其中所述粘蛋白是MUC-1、PSA或TSH。6.權(quán)利要求1的載體組合物，其中所述膠態(tài)金屬包括膠態(tài)金、膠態(tài)銀、膠態(tài)鐵、膠態(tài)鋁或膠態(tài)鉑。7.權(quán)利要求1的載體組合物，進(jìn)一步包含藥物可接受成分，所述成分包括賦形劑、緩沖液或載體。8.權(quán)利要求1的載體組合物，進(jìn)一步包含佐劑，其中所述佐劑包括脂質(zhì)體、乳劑、微球體、可生物降解的聚合物和聚苯乙烯、明礬、熱殺死的丁酸分枝桿菌和結(jié)核分枝桿菌、百日咳毒素和破傷風(fēng)毒素、或LPS和葡萄球菌腸毒素B。9.權(quán)利要求1的載體組合物，其中所述載體進(jìn)一步包含共刺激蛋白。10.權(quán)利要求1的載體組合物，其中所述載體進(jìn)一步包含主要組-->織相容性復(fù)合體。11.權(quán)利要求1的載體組合物，其中所述載體進(jìn)一步包含生發(fā)中心。12.權(quán)利要求1的載體組合物，其中所述載體進(jìn)一步包含結(jié)構(gòu)蛋白。13.權(quán)利要求1的載體組合物，進(jìn)一步包含靶向分子、整合分子、PEG、衍生的PEG、聚-L-賴氨酸或衍生的聚-L-賴氨酸、生物素-抗生物素蛋白、雙功能PEG或雙功能聚合物。14.權(quán)利要求13的載體組合物，其中所述雙功能PEG包含硫醇和生物素。15.權(quán)利要求13的載體組合物，其中所述聚-L-賴氨酸包含硫醇和生物素。16.權(quán)利要求1的載體組合物，其中合成的APC是凍干的并且在施用前被貯藏一段時(shí)間。17.一種體外生產(chǎn)單克隆抗體的方法，其包括：a)將抗原、成分特異性免疫刺激劑與膠態(tài)金屬混合或結(jié)合以形成合成的APC；和b)體外刺激來自人的免疫細(xì)胞以活化免疫細(xì)胞，以產(chǎn)生對合成的APC的初次反應(yīng)；其中合成的APC包含抗原、成分特異性免疫刺激劑和膠態(tài)金屬；和c)使活化的免疫細(xì)胞無限增殖化；和d)選擇產(chǎn)生單克隆抗體的細(xì)胞。18.權(quán)利要求...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：L塔馬金，GF帕茨奧蒂，
申請(專利權(quán))人：細(xì)胞免疫科學(xué)公司，
類型：發(fā)明
國別省市：US[美國]