【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物，尤其涉及一種膠質纖維酸性蛋白的核酸適配體及其應用。
技術介紹
1、阿爾茨海默病(ad)是發生于老年和老年前期以進行性認知功能障礙和行為損害為臨床癥狀的中樞神經系統退行性病變。ad是最常見的癡呆類型之一，也是老年人死亡的重要原因，給家庭和社會帶來巨大的經濟壓力。ad從病理改變到臨床癥狀出現周期跨度較久。在臨床前期，患者認知功能正常，但病理實際已發生改變，最早可發生在臨床癥狀出現的20年前。因此，尋找標志物在ad臨床前期進行早期診斷和早期干預具有重要意義。
2、已有大量的研究表明，膠質纖維酸性蛋白(gfap)反映了膠質細胞活化的過程，從ad臨床前階段就已經顯著升高，能夠準確識別ad不同臨床階段和鑒別ad癡呆與非ad癡呆，且可用于預測ad臨床進展，是ad早期診斷和發病預測的潛在新生物標志物。由于血漿中gfap的含量偏低，酶聯免疫法和化學發光法難以測出，目前臨床檢測多采用以超敏的單分子免疫陣列技術法，然而該法的單次檢測費用高、依賴昂貴儀器限制其在基層醫院的推廣應用，因此仍需進一步探索更低成本、便攜、易推廣的檢測手段。
3、適配體是通過指數富集的配體系統進化技術(systematic?elution?ofligandsby?exponential?enrichment，selex)在體外篩選的寡核苷酸序列，能夠與特定靶標結合，包括小分子、蛋白質，甚至整個細胞。適配體具有類似抗體結合識別功能，被稱為“化學抗體”。此外，適配體與抗體相比具有許多明顯的優勢，包括易于合成、易于化學修飾、穩定性好、低毒性
技術實現思路
1、(一)要解決的技術問題鑒于現有技術的上述缺點、不足，本專利技術提供一種膠質纖維酸性蛋白的核酸適配體篩選方法，該核酸適配體與膠質纖維酸性蛋白具有較強的親和力和特異性，可用于高效的檢測膠質纖維酸性蛋白；
2、相應地，本專利技術還提供一種膠質纖維酸性蛋白的核酸適配體的篩選方法。
3、相應地，本專利技術還提供一種膠質纖維酸性蛋白的核酸適配體作為檢測試劑等用于膠質纖維酸性蛋白的檢測及聯合其他指標提高阿爾茨海默癥的早期診斷率。
4、即本專利技術還提供所述核酸適配體在制備檢測膠質纖維酸性蛋白的產品中的應用、在建立膠質纖維酸性蛋白的檢測方法中的應用。
5、(二)技術方案
6、為了達到上述目的，本專利技術采用的主要技術方案包括：
7、第一方面，本專利技術提供一種膠質纖維酸性蛋白的核酸適配體，其核苷酸序列為：5’-ttcagcactccacgcatagctcagtcaggggggctgctcgggattgcggatacggacctatgcgtgctaccgtgaa-3’(如seq?id?no.1所示)，所示核苷酸序列中，方向為5’-3’。
8、所述的膠質纖維酸性蛋白的核酸適配體，對所述核酸適配體的5’端或3’端進行熒光基團、巰基、氨基、生物素、地高辛或聚乙二醇化學修飾。
9、所述的膠質纖維酸性蛋白的核酸適配體，在25℃，[na+]＝137mm，[mg2+]＝0.85mm的條件下，所述核酸適配體的空間結構分別如下：
10、
11、第二方面，本專利技術提供上述膠質纖維酸性蛋白的核酸適配體的篩選方法，其包括以下步驟：
12、s1設計上游引物、下游引物，合成相應的隨機文庫；
13、s2反靶蛋白與羧基磁珠孵育偶聯制得反篩磁珠；
14、靶蛋白與羧基磁珠孵育偶聯制得正篩磁珠；
15、s3以隨機文庫作為初始文庫，進行8～20輪的篩選獲得所述核酸適配體；
16、第一輪以初始文庫僅進行正篩磁珠的正篩；
17、第二輪以上的篩選均以前一輪篩選后的單鏈次級文庫先與反篩蛋白孵育，完成反篩；再與靶標蛋白孵育，完成正篩。
18、第三方面，本專利技術還提供所述核酸適配體在制備檢測膠質纖維酸性蛋白的試劑、試劑盒或傳感器中的應用。
19、所述的核酸適配體在制備檢測膠質纖維酸性蛋白的探針中的應用。
20、所述探針為對所述核酸適配體5’端修飾熒光基團后形成或修飾巰基基團形成。
21、所述的核酸適配體在建立膠質纖維酸性蛋白的檢測方法中的應用。
22、所述檢測方法為比色快速檢測法。該方法建立時可以對所述核酸適配體的5’端修飾巰基，然后5’端修飾巰基的核酸適配體與金納米粒子偶聯，催化tmb顯色。
23、所述檢測方法還可以為熒光分析法。
24、對所述核酸適配體5’端修飾熒光基團，建立熒光分析法。
25、所述熒光基團為fam基團。
26、(三)有益效果
27、本專利技術提供的膠質纖維酸性蛋白的核酸適配體，其彌補了膠質纖維酸性蛋白的核酸適配體領域的空白，其對膠質纖維酸性蛋白有良好的親和力和特異性；其可在檢測膠質纖維酸性蛋白的方法或相應的試劑盒中應用，具體的可制成分子探針、作為檢測試劑等用于膠質纖維酸性蛋白的檢測及與其他指標聯合提高阿爾茨海默癥的早期診斷率。
28、其中，本專利技術提供的膠質纖維酸性蛋白適配體，可人工合成，成本低、生產周期短，易于化學修飾；
29、本專利技術提供的篩選方法其方法簡便，篩選的文庫具有較高的保留率。
30、本專利技術所提供的膠質纖維酸性蛋白適配體用于檢測膠質纖維酸性蛋白具有較高的靈敏度、特異性和準確性。
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1.一種膠質纖維酸性蛋白的核酸適配體，其特征在于：其核苷酸序列為：5’-TTCAGCACTCCACGCATAGCTCAGTCAGGGGGGCTGCTCGGGATTGC?GGATACGGACCTATGCGTGCTACCGTGAA-3’。
2.根據權利要求1所述的膠質纖維酸性蛋白的核酸適配體，其特征在于：在25℃，[Na+]＝137mM，[Mg2+]＝0.85mM的條件下，所述核酸適配體的空間結構分別如下：
3.根據權利要求1所述的膠質纖維酸性蛋白的核酸適配體，其特征在于：對所述核酸適配體的5’端或3’端進行熒光基團、巰基、氨基、生物素、地高辛或聚乙二醇化學修飾。
4.如權利要求1-3任意一項所述的核酸適配體在制備檢測膠質纖維酸性蛋白的試劑、試劑盒或傳感器中的應用。
5.如權利要求1-3任意一項所述的核酸適配體在制備檢測膠質纖維酸性蛋白的探針中的應用。
6.如權利要求5所述的應用，其特征在于：所述探針為對所述核酸適配體5’端修飾熒光基團后形成或修飾巰基基團形成。
7.如權利要求1所述的核酸適配體在建立膠質纖維酸性
8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于：所述檢測方法為比色快速檢測法。
9.根據權利要求7所述的應用，其特征在于：所述檢測方法為熒光分析法。
10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于：對所述核酸適配體5’端修飾熒光基團，建立熒光分析法。
...【技術特征摘要】
1.一種膠質纖維酸性蛋白的核酸適配體，其特征在于：其核苷酸序列為：5’-ttcagcactccacgcatagctcagtcaggggggctgctcgggattgc?ggatacggacctatgcgtgctaccgtgaa-3’。
2.根據權利要求1所述的膠質纖維酸性蛋白的核酸適配體，其特征在于：在25℃，[na+]＝137mm，[mg2+]＝0.85mm的條件下，所述核酸適配體的空間結構分別如下：
3.根據權利要求1所述的膠質纖維酸性蛋白的核酸適配體，其特征在于：對所述核酸適配體的5’端或3’端進行熒光基團、巰基、氨基、生物素、地高辛或聚乙二醇化學修飾。
4.如權利要求1-3任意一項所述的核酸適配體...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張勝行，曹越，陳莉，王水良，邱抒倩，
申請(專利權)人：中國人民解放軍聯勤保障部隊第九〇〇醫院，
類型：發明
國別省市：
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