【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及dna分子標記鑒定茶樹，具體涉及一種大理茶的轉座子插入片段及其作為分子標記物區分大理茶與其它茶組植物的應用。
技術介紹
1、中國西南地區是茶樹的起源地，擁有世界上最為豐富的茶樹資源。廣義的茶樹系指茶組(sect.thea)這一群植物，這是目前廣為接受的茶樹概念。隨著時代技術的發展，具有科學性的茶樹分類方法陸續被提出，閔天祿(1992)將茶組植物分為12個種和6個變種，其中大理茶便屬于其中一個種，主要分布于云南西部、西南部和毗鄰的緬甸北部與泰國北部。
2、大理茶[camellia?taliensis(w.w.smith)melchior]為山茶科(theaceae)山茶屬(camellia)茶組大理種，是非常重要的茶樹種質資源，進化歷史悠久、分布廣泛、具有很強的抗逆性和豐富的生化成分，作為栽培茶樹(主要以阿薩姆變種(c.sinensisvar.assamica)和茶變種(c.sinensis?var.sinensis)為主)的重要野生近緣種。李苗苗等(2015)利用核基因組微衛星標記揭示了大理茶參與阿薩姆變種茶樹的馴化過程，chen等(2005)利用55個茶樹形態學特征分析了阿薩姆變種茶樹與茶組其它近緣種的發育關系，發現大理茶與阿薩姆變種茶樹有一定的親緣關系，因此大理茶也被認為是阿薩姆變種茶樹的野生基源之一。此外，大理茶的形態特征、化學內含成分也與栽培茶樹存在一定相似性，富含咖啡因和茶多酚。
3、茶是世界上最受歡迎的非酒精飲品之一，近年來，茶葉市場上出現的許多“野生茶”大多數均來自大理茶。云南
4、公布號為cn114891917a的中國專利申請文獻，公開了一組鑒定重慶大茶樹群體種質的snp標記，所述群體種質snp標記包括：茶樹chr8染色體第119192825位位點為序列表中seq?id?no.1的第301位核苷酸，和/或茶樹chr15染色體第40853615位位點為序列表中seqid?no.2的第301位核苷酸。利用該專利的分子標記及特異性擴增引物，可準確地鑒定茶樹種質是否來源于重慶大茶樹群體種質，可用于重慶大茶樹群體種質溯源性鑒定與保護。但并未公開如何鑒定大理茶。
技術實現思路
1、本專利技術所要解決的技術問題在于如何提供一種快速、簡便區分大理茶與其它茶組植物的方法。
2、本專利技術通過以下技術手段實現解決上述技術問題的：
3、本專利技術的第一方面提出一種大理茶的轉座子插入片段，所述轉座子插入片段的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。
4、有益效果：本專利技術人團隊發現大理茶的cscad14基因啟動子比與其它茶組植物多了如seq?id?no.1所示轉座子插入片段，因此該片段可以作為鑒定大理茶的分子標記物，采用pcr擴增技術擴增目的條帶，再對pcr產物進行瓊脂糖凝膠電泳，比對跑膠結果即可區分大理茶與其它茶組植物。
5、本專利技術的第二方面提出一種上述轉座子插入片段的擴增引物，包括核苷酸序列如seq?id?no.4所示的上游引物p1和核苷酸序列如seq?id?no.5所示的下游引物p2。
6、本專利技術的第三專利技術提出上述大理茶的轉座子插入片段作為大理茶的分子標記物中的應用。
7、本專利技術的第四方面提出上述轉座子插入片段的擴增引物在區分大理茶與其它茶組植物中的應用。
8、優選的，所述上游引物p1對應大理茶和其它茶組植物中插入片段左側保守序列，下游引物p2對應大理茶和其它茶組植物中插入片段右側保守序列，其中插入片段左側保守序列如seq?id?no.2所示，插入片段右側保守序列如seq?id?no.3所示。
9、優選的，所述其它茶組植物包括阿薩姆變種茶樹、茶變種茶樹、野生近緣種茶樹中的一種或多種。
10、優選的，所述阿薩姆變種茶樹包括‘宜啟寶紅茶’、‘云茶1號’‘云抗10’、‘云抗15’、‘云抗50’、‘紫娟’、‘紫牡丹’、‘勐庫大葉’、‘英紅9’、‘長葉白毫’中的一種或多種。
11、優選的，所述茶變種茶樹包括‘佛香1號’、‘福鼎大白’、‘福毫’、‘黃觀音’、‘金萱’、‘龍井長葉’、‘普研2號’、‘清心大冇’、‘新選801’、‘堯山秀綠’、‘舒茶早’、‘鐵觀音’、‘肉桂’中的一種或多種。
12、優選的，所述野生近緣種茶樹包括‘大廠茶’、‘廣西茶’、‘縉云山茶’、‘汝城毛葉茶’、‘細萼茶’、‘大樹茶’、‘老黑茶’、‘狹葉茶’、‘膜葉茶’、‘四球茶’、‘禿房茶’中的一種或多種。
13、本專利技術的第五方面提出一種利用轉座子插入片段的擴增引物區分大理茶與其它茶組植物的方法，包括以下步驟：
14、(1)提取不同品種茶樹的dna；
15、(2)利用上述上游引物p1和下游引物p2分別對步驟(1)獲得的不同品種茶樹的dna進行pcr擴增；
16、(3)瓊脂糖凝膠電泳對pcr擴增條帶進行分析，若目的條帶位置在1372bp左右則為大理茶，若目的條帶位置在290bp左右則為其它茶組植物。
17、本專利技術的優點在于：
18、1、本專利技術利用兩對普通pcr引物，在dna水平上擴增大理茶樹和其它茶組植物中cscad14基因的啟動子片段，由于大理茶樹中cscad14基因的啟動子片段存在一段1082bp的轉座子插入，而其它茶組植物cscad14基因的啟動子中并不存在，因此可以在dna水平上利用pcr引物鑒定茶樹中cscad14基因的啟動子中是否具有1082bp序列的插入片段，從而達到快速區分大理茶和其它茶組植物的目的。
19、2、本專利技術所選用的材料包含不同地點的大理茶以及大量阿薩姆變種茶樹和茶變種茶樹，材料來源廣泛、豐富且具有代表性，不受季節、環境和測試時間的限制，結果具有很好的重復性。
20、3、本專利技術所采用的pcr引物是建立在多個茶樹全基因組上進行序列比對設計的，具有很強的特異性，能夠適用于普遍的大理茶和其它茶組植物之間的鑒別。
21、4、本專利技術所采用的pcr引物擴增法相較于目前使用ssr和indel引物鑒別不同茶組植物來說，操作方法更加簡便、快速、消耗成本大幅度降低且對于區分大理茶和其它茶組植物來說具有更好的適用性和特異性。
22、5、由于大理茶的cscad14基因啟動子比與其它茶組植物多了1本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種大理茶的轉座子插入片段，其特征在于，所述轉座子插入片段的核苷酸序列如SEQ?ID?No.1所示。
2.權利要求1所述的轉座子插入片段的擴增引物，其特征在于，包括核苷酸序列如SEQID?No.4所示的上游引物P1和核苷酸序列如SEQ?ID?No.5所示的下游引物P2。
3.權利要求1所述的大理茶的轉座子插入片段作為大理茶的分子標記物中的應用。
4.權利要求2所述的轉座子插入片段的擴增引物在區分大理茶與其它茶組植物中的應用。
5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述上游引物P1對應大理茶和其它茶組植物中插入片段左側保守序列，下游引物P2對應大理茶和其它茶組植物中插入片段右側保守序列，其中插入片段左側保守序列如SEQ?ID?No.2所示，插入片段右側保守序列如SEQ?IDNo.3所示。
6.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述其它茶組植物包括阿薩姆變種茶樹、茶變種茶樹、野生近緣種茶樹中的一種或多種。
7.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述阿薩姆變種茶樹包括‘宜啟寶紅茶’、‘云茶1號’‘云
8.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述阿薩姆變種茶樹包括‘宜啟寶紅茶’、‘云茶1號’‘云抗10’、‘云抗15’、‘云抗50’、‘紫娟’、‘紫牡丹’、‘勐庫大葉’、‘英紅9’、‘長葉白毫’中的一種或多種。
9.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述野生近緣種茶樹包括‘大廠茶’、‘廣西茶’、‘縉云山茶’、‘汝城毛葉茶’、‘細萼茶’、‘大樹茶’、‘老黑茶’、‘狹葉茶’、‘膜葉茶’、‘四球茶’、‘禿房茶’中的一種或多種。
10.一種利用權利要求2所述的轉座子插入片段的擴增引物區分大理茶與其它茶組植物的方法，其特征在于，包括以下步驟：
...【技術特征摘要】
1.一種大理茶的轉座子插入片段，其特征在于，所述轉座子插入片段的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。
2.權利要求1所述的轉座子插入片段的擴增引物，其特征在于，包括核苷酸序列如seqid?no.4所示的上游引物p1和核苷酸序列如seq?id?no.5所示的下游引物p2。
3.權利要求1所述的大理茶的轉座子插入片段作為大理茶的分子標記物中的應用。
4.權利要求2所述的轉座子插入片段的擴增引物在區分大理茶與其它茶組植物中的應用。
5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述上游引物p1對應大理茶和其它茶組植物中插入片段左側保守序列，下游引物p2對應大理茶和其它茶組植物中插入片段右側保守序列，其中插入片段左側保守序列如seq?id?no.2所示，插入片段右側保守序列如seq?idno.3所示。
6.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述其它茶組植物包括阿薩姆變種茶樹、茶...
【專利技術屬性】
技術研發人員：朱俊彥，韋朝領，許琳琳，陶玲玲，劉升銳，
申請(專利權)人：安徽農業大學，
類型：發明
國別省市：
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