【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及分析檢測，具體涉及一種用于idh基因突變標志物檢測的質譜系統及提高檢測準確性的方法。
技術介紹
1、遺傳學研究表明，腦膠質瘤中idh基因的突變狀態與其發生、發展和預后密切相關，在腦膠質瘤鑒別診斷、預后評估以及治療策略選擇中都發揮了重要作用。
2、根據世界衛生組織最新發布的神經膠質瘤分類指南(who?cns5)，idh突變情況是膠質瘤分型中的重要依據之一。檢測idh基因的突變狀態可以幫助醫生確定腫瘤的類型和特征，特別是在鑒別診斷上具有重要意義。此外，idh突變狀態可能影響膠質瘤的治療策略選擇，一些研究表明，相比于idh未突變的膠質瘤患者，idh突變患者對放療和化療藥物（如氟達拉濱）更為敏感。另有相關臨床研究證明，idh突變的患者將在最大范圍的腫瘤切除中獲益，并展現更好的預后結果。因此，檢測idh突變狀態可以幫助醫生評估患者的預后，并為治療計劃制定提供參考。由此可見，idh基因突變可作為腦膠質瘤的重要分子標志物，對于診斷、治療和預后評估具有重要意義。
3、然而，目前的idh基因突變檢測方法存在一些局限性和挑戰。在目前的臨床實踐中，最常用的檢測方法是免疫組化染色和pcr檢測。免疫組織染色方法利用idh1或idh2特異性抗體對組織進行染色，從而顯示出可能具有idh突變的細胞。然而，由于這個測試使用視覺檢測，結果具有較大主觀性，很容易被誤讀或難以確認，靈敏度和特異性較低，不被視為金標準。相比之下，pcr檢測方法是idh突變檢測的金標準。通常，進行pcr需要至少幾天的時間才能得到結果，并且需要經過培訓的
4、大量的研究表明2-羥基戊二酸（2-hg）在idh突變的膠質瘤組織中積累，而在正常腦組織中幾乎不存在。因此，2-hg的檢測可作為闡明膠質瘤中的idh突變狀態的重要強關聯依據。現有檢測2-hg的技術中，質譜具備靈敏度高，特異性強等優點，但傳統液質和氣質聯用技術通用性很強，且需要復雜耗時的樣品前處理、儀器體積較大，無法應用于術中病理分析。哈佛大學醫學院使用desi等原位電離技術在前期開展了腦腫瘤的分型檢測，德克薩斯大學的研究人員也開發了masspec?pen等原位電離技術，但這些技術受限于大型質譜系統的復雜性，難以用于術中監測。
技術實現思路
1、本專利技術要解決的技術問題是提供一種用于idh基因突變標志物檢測的質譜系統及提高檢測準確性的方法，該質譜系統可以使得采樣、萃取、離子化、分析僅在分鐘級別就可以完成，且通過進樣量調整、達標譜圖判斷以及閾值判斷等流程設置，可有效提高分析結果的準確性。利用本專利技術所述的質譜系統及方法不僅使得術中診斷成為可能，也使得基于該質譜系統的idh基因突變標志物檢測能快速容易地融入現有膠質瘤手術流程中。
2、為了解決上述技術問題，本專利技術提供了如下的技術方案：
3、本專利技術提供了一種用于idh基因突變標志物檢測的質譜系統，包括：
4、采樣試劑盒，包括采樣器與檢測盒；所述采樣器包括手柄部和固定于所述手柄部一端的導電采樣片，所述導電采樣片用于采集待測樣品；所述檢測盒包括盒體和毛細管，所述盒體上設有樣品槽；所述采樣器可拆卸地卡合固定于所述盒體上，且所述導電采樣片伸入到所述樣品槽中；所述樣品槽用于盛放洗脫溶劑，所述洗脫溶劑用于洗脫所述導電采樣片上采集的待測樣品以形成分析溶液；所述毛細管的一端伸入到所述樣品槽中，另一端位于所述樣品槽外；以及
5、小型質譜儀，包括依次連接的離子源接口、離子進樣傳輸系統和真空系統；所述真空系統中設有質量分析器和離子探測器；
6、其中，當所述質譜系統在使用時，所述采樣試劑盒被配制為插接于所述小型質譜儀的離子源接口上，且所述導電采樣片被施加高壓電，以使得所述樣品槽中的分析溶液帶電并進入所述毛細管內，并從所述毛細管的另一端噴出形成噴霧；所述噴霧經由所述離子進樣傳輸系統進入到所述真空系統中。
7、進一步地，所述導電采樣片包括依次相連的采樣部和導電部，所述采樣部用于采集腦組織樣品，所述導電部用于連接高壓電；所述盒體上還設有手柄安放槽，所述手柄部可拆卸地卡合固定在所述手柄安放槽中。
8、進一步地，所述采樣部上設有缺口和圓孔，所述缺口與所述圓孔連通；所述毛細管伸入所述樣品槽的端部位于所述缺口中。
9、進一步地，所述采樣器還包括采樣纖維，所述采樣纖維可拆卸地固定于所述采樣部上。
10、進一步地，所述采樣纖維為濾紙條；所述采樣部上具有雙縫結構，所述圓孔位于所述雙縫結構的兩個縫之間；所述濾紙條交叉穿過所述雙縫后拉緊固定。
11、進一步地，所述手柄部由聚丙烯材料制成，所述手柄部上設有防滑紋；所述導電采樣片由金屬片制成，所述導電采樣片通過卡口裝配于所述手柄部上。
12、進一步地，所述毛細管為石英毛細管，其表面具有聚酰亞胺涂層。
13、進一步地，所述真空系統包括真空腔、分子泵和渦旋泵，所述質量分析器和離子探測器位于所述真空腔中。
14、進一步地，所述離子進樣傳輸系統包括夾管閥，所述夾管閥與所述真空腔連通。
15、進一步地，所述質譜系統用于檢測腦組織idh基因突變標志物時，具體操作包括以下步驟：
16、（1）取腦組織樣品置于載體上，用采樣器的導電采樣片擦拭腦組織，再固定于檢測盒上；向檢測盒的樣品槽中加入洗脫溶劑，用于提取腦組織樣品中的待分析物形成分析溶液；所述洗脫溶劑包含乙醇、水，乙醇在所述洗脫溶劑中的體積占比為50%-90%；所述腦組織樣品中的待分析物包含但不限于2-羥基戊二酸（2-hg）和谷氨酸（glu）；
17、（2）將檢測盒插入小型質譜儀的離子源接口中，設置小型質譜儀的測試參數，使離子源施加電壓給導電采樣片，導電采樣片將電壓通過分析溶液傳遞至毛細管尖端，分析溶液在尖端形成泰勒錐并產生電噴霧，待分析物通過電噴霧被離子化形成離子，通過小型質譜儀的離子進樣傳輸系統進入真空系統，進行質量分析并記錄每個離子的信號強度；
18、（3）獲取質譜信號后，根據目標子離子m/z?129和m/z?128的離子的強度信號，計算得到目標物2-hg和glu的二級碎片離子信號強度比值，再通過與內嵌閾值比較，判斷得出腦組織樣品的idh突變狀態。
19、進一步地，當所述質譜系統用于檢測idh基因突變標志物時，小型質譜儀的測試參數為：施加于所述導電采樣片上的電壓為-4.5?kv，靶向串級母本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種用于IDH基因突變標志物檢測的質譜系統，其特征在于，包括：
2.根據權利要求1所述的一種用于IDH基因突變標志物檢測的質譜系統，其特征在于，所述導電采樣片包括依次相連的采樣部和導電部，所述采樣部用于采集待測樣品，所述導電部用于連接高壓電；
3.根據權利要求1所述的一種用于IDH基因突變標志物檢測的質譜系統，其特征在于，所述真空系統包括真空腔、分子泵和渦旋泵，所述質量分析器和離子探測器位于所述真空腔中；
4.根據權利要求1所述的一種用于IDH基因突變標志物檢測的質譜系統，其特征在于，所述質譜系統用于檢測腦組織IDH基因突變標志物時，具體操作包括以下步驟：
5.一種提高權利要求1~4任一項所述的質譜系統檢測準確性的方法，其特征在于，包括以下步驟：
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，S1中，所述進樣量優化調整掃描流程具體為：
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述進樣量優化調整在設定的進樣量區間內進行調整；
8.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，S2中，當采用聯合內標法進行定
9.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，S3中，將N張達標譜圖中目標物的原始數據分別累加求和，并根據達標譜圖數量求取平均值，合成一張譜圖；
10.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，當所述質譜系統用于檢測腦組織IDH基因的突變狀態時，所述目標物為2-HG及谷氨酸，其中：
11.根據權利要求10所述的方法，其特征在于，所述計算公式為：M1=(目標離子m/z?129的信號強度)?/(?0.94×目標離子m/z?128的信號強度)；
...【技術特征摘要】
1.一種用于idh基因突變標志物檢測的質譜系統，其特征在于，包括：
2.根據權利要求1所述的一種用于idh基因突變標志物檢測的質譜系統，其特征在于，所述導電采樣片包括依次相連的采樣部和導電部，所述采樣部用于采集待測樣品，所述導電部用于連接高壓電；
3.根據權利要求1所述的一種用于idh基因突變標志物檢測的質譜系統，其特征在于，所述真空系統包括真空腔、分子泵和渦旋泵，所述質量分析器和離子探測器位于所述真空腔中；
4.根據權利要求1所述的一種用于idh基因突變標志物檢測的質譜系統，其特征在于，所述質譜系統用于檢測腦組織idh基因突變標志物時，具體操作包括以下步驟：
5.一種提高權利要求1~4任一項所述的質譜系統檢測準確性的方法，其特征在于，包括以下步驟：
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，s1中，所述進樣量優化調整掃描流程具體為：
【專利技術屬性】
技術研發人員：吳俊函，洪園，國亮，卜杰洵，
申請(專利權)人：清譜科技蘇州有限公司，
類型：發明
國別省市：
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