【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及總膽固醇檢測，特別涉及一種用于檢測總膽固醇的高分子膜試劑及其制備方法。
技術(shù)介紹
1、膽固醇又稱膽甾醇，是一種環(huán)戊烷多氫菲的衍生物。膽固醇廣泛存在于動物體內(nèi)，不僅參與形成細(xì)胞膜，還可以代謝為類固醇激素、膽汁酸和維生素d等生理活性物質(zhì)。
2、膽固醇在血液中可以與脂蛋白結(jié)合，其存在形式包括高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、極低密度脂蛋白膽固醇等。高膽固醇血癥是影響冠心病發(fā)病的主要危險因素之一。膽固醇含量的增高多見于高脂血癥、動脈粥樣硬化、糖尿病、腎病綜合征、甲狀腺功能減退、膽總管阻塞、高血壓(部分)等病癥，以及維生素a、維生素d、口服避孕藥等藥物的攝入。膽固醇含量的減少可見于低脂蛋白血癥、貧血、敗血癥、甲狀腺功能亢進(jìn)、肝病、嚴(yán)重感染、營養(yǎng)不良等病理狀態(tài)，以及對氨基水楊酸、卡那霉素、肝素、維生素c等藥物的攝入。
3、總膽固醇的測定方法大致可分為正己烷抽提l-b反應(yīng)顯色法(albk法)、酶法、電化學(xué)法、氣相和高效液相色譜法等。albk法采用正己烷提取膽固醇，然后用liberman-burchard(l-b)試劑與膽固醇顯色。albk法由于存在操作復(fù)雜、試劑有強(qiáng)腐蝕性(濃硫酸)和不易自動化的缺點(diǎn)，現(xiàn)在已很少應(yīng)用。酶法測定特異性強(qiáng)，測定準(zhǔn)確度及靈敏度較高，操作簡便，試劑無腐蝕性，可全自動操作，性價比高，是目前國內(nèi)外推薦使用的臨床常規(guī)的測定方法。酶法測定總膽固醇的一般原理是：膽固醇酯在膽固醇酯酶的作用下水解成游離脂肪酸和游離膽固醇，后者被膽固醇氧化酶氧化成膽甾烯酮，并產(chǎn)生過氧化氫，過氧化氫與4-氨基
4、
5、
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7、臨床實(shí)驗(yàn)室最常用的是酶法，酶法的特異性、靈敏度以及精密度等性能表現(xiàn)較為優(yōu)越。膽固醇酶法檢測還可分為濕化學(xué)法和干化學(xué)法，濕化學(xué)法適用于大樣本量的臨床場景，使用的靈活性以及即時性較為欠缺。另外，濕化學(xué)法的試劑需要特定的保存條件，運(yùn)輸成本較高。不同于常規(guī)的濕化學(xué)法，干化學(xué)分析方法具有檢測速度快、檢測試劑易保存、適用場景多樣化、使用便捷等優(yōu)點(diǎn)，可根據(jù)檢驗(yàn)需要即時對個性化項(xiàng)目進(jìn)行檢測，而且檢測過程無需清洗、攪拌混勻等步驟，不存在交叉污染。
8、目前，干化學(xué)試劑有兩種，一種是采用感光膠片的涂層技術(shù)制備而成的多層膜干片，另一種是采用多層濾紙/濾膜疊加組合而成的干化學(xué)試紙條。無論是多層膜干片還是干化學(xué)試紙條，以上兩種干化學(xué)試劑都存在生產(chǎn)工藝復(fù)雜、重復(fù)性較差等問題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、針對現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本專利技術(shù)提供一種用于檢測總膽固醇的高分子膜試劑及其制備方法，以克服現(xiàn)有總膽固醇商品化試劑盒缺點(diǎn)的總膽固醇含量的測定方法，克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的測試時間較長、生產(chǎn)工藝復(fù)雜、誤差較大、測試方法繁瑣以及檢測靈敏度較低等問題。
2、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)提供一種用于檢測總膽固醇的高分子膜試劑，包括原材料如下：緩沖液10-100mmol/l、膽固醇酯酶25-100ku/l、膽固醇氧化酶10-50ku/l、色原底物3-6g/l、抗壞血酸氧化酶5-50ku/l、氯化鈣1-10mm、辣根過氧化物酶10-50ku/l、山梨醇15-60g/l、牛磺酸10-60g/l、皂苷0.5-5g/l、多糖類10-50g/l、月桂醇聚氧乙烯醚1-10g/l、高分子共聚液500-800ml/l。
3、優(yōu)選地，所述高分子共聚液的原材料由果糖0.5％-6％、聚(乙烯-alt-馬來酸酐)0.1％-5％、聚苯乙烯磺酸鈉0.1％-5％、羧甲基淀粉鈉2％-10％制備而成。
4、優(yōu)選地，所述高分子共聚液的具體制備方法為：將羧甲基淀粉鈉、果糖加入純化水中攪拌3小時，形成均一的水溶液；然后加入聚(乙烯-alt-馬來酸酐)以及聚苯乙烯磺酸鈉，繼續(xù)在18-25℃條件下攪拌1個小時，待形成物料完全溶解形成均一的高分子膜液后收集并標(biāo)識為高分子共聚液。
5、優(yōu)選地，所述緩沖液選自磷酸鹽緩沖液、hepes、pipes、mes緩沖液中的一種或多種，且ph值為6.10-6.60。
6、優(yōu)選地，所述多糖類選自β-環(huán)糊精、葡聚糖、殼聚糖中的一種或多種。
7、本專利技術(shù)還提供一種用于檢測總膽固醇的高分子膜試劑的制備方法，包括如下步驟：
8、步驟s1：膜試劑溶液制備：
9、根據(jù)實(shí)際配制量計(jì)算并稱取緩沖液、膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶、色原底物、抗壞血酸氧化酶、氯化鈣、辣根過氧化物酶、山梨醇、多糖類、月桂醇聚氧乙烯醚原料，加入至純化水中充分?jǐn)嚢枞芙猓?/p>
10、待原料充分溶解至溶液呈完全澄清的狀態(tài)下加入高分子共聚液，充分?jǐn)嚢杌靹颍詈螅瑢⒛ぴ噭┤芤悍胖糜诔晝x或離心機(jī)中，去除膜試劑溶液存在的氣泡；
11、步驟s2：高分子膜成型：
12、方式一：將膜試劑溶液平鋪在水平、潔凈光滑的玻璃板上，利用刮刀平整表面，待膜試劑溶液平鋪均勻后將玻璃板轉(zhuǎn)移至37℃干燥箱中，干燥3-4h，最終形成表面規(guī)則平整、厚度均一的高分子膜試劑；
13、方式二：將膜試劑溶液分裝至反應(yīng)杯中，然后將裝有膜試劑溶液的反應(yīng)杯放置在37℃干燥箱中，干燥4-5h，最終形成表面規(guī)則平整、厚度均一的高分子膜試劑；
14、步驟s3：高分子膜試劑包裝：
15、方法一、將高分子膜成型方式一中形成的高分子膜試劑裁切成2×2mm的小方塊狀，然后將裁切后的高分子膜試劑分裝至反應(yīng)杯中，然后對反應(yīng)杯進(jìn)行密封包裝；
16、方法二、將高分子膜成型方式二中已分裝完成的反應(yīng)杯直接密封包裝。
17、優(yōu)選地，所述步驟s1中的高分子共聚液在溫度為18-25℃、攪拌器轉(zhuǎn)速為300-500rpm的條件下，攪拌0.5-1h。
18、采用本專利技術(shù)的技術(shù)方案，具有以下有益效果：
19、本專利技術(shù)的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的測試時間較長、生產(chǎn)工藝復(fù)雜、誤差較大、測試方法繁瑣以及檢測靈敏度較低等問題，通過高分子的分子交聯(lián)，將酶固定在高分子骨架內(nèi)，在不影響酶活性的同時增加酶的穩(wěn)定性，高分子薄膜基質(zhì)由聚(乙烯-alt-馬來酸酐)、聚苯乙烯磺酸鈉、羧甲基淀粉鈉、果糖等組成，通過提供豐富的羥基以及高分子骨架，與蛋白質(zhì)之間可形成穩(wěn)定的氫鍵結(jié)構(gòu)，可以在試劑成膜及干燥脫水過程中替代蛋白周圍的水分子和相關(guān)的氫鍵；同時使蛋白包裹在高分子骨架內(nèi)，限制大分子的移動性，使分子保持在穩(wěn)定的狀態(tài)，有利于酶等蛋白的長期穩(wěn)定性；本文以聚(乙烯-alt-馬來酸酐)、果糖、聚苯乙烯磺酸鈉、羧甲基淀粉鈉等為原料，采用簡單、快速的方法將總膽固醇試劑反應(yīng)原料固定在高分子膜中，加入樣本后，高分子膜可以迅速溶解，釋放酶等反應(yīng)試劑并形成trinder反應(yīng)，根據(jù)吸光度變化測定總膽固醇的含量。該方法檢測靈敏度高、準(zhǔn)確度/精密度良好。
20、由于本專利技術(shù)采用了聚(乙烯-alt-馬來酸酐)、果糖、聚苯乙烯磺酸鈉、羧甲基淀粉鈉等高分子共聚成膜易溶解本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種用于檢測總膽固醇的高分子膜試劑，其特征在于，包括原材料如下：緩沖液10-100mmol/L、膽固醇酯酶25-100KU/L、膽固醇氧化酶10-50KU/L、色原底物3-6g/L、抗壞血酸氧化酶5-50KU/L、氯化鈣1-10mM、辣根過氧化物酶10-50KU/L、山梨醇15-60g/L、牛磺酸10-60g/L、皂苷0.5-5g/L、多糖類10-50g/L、月桂醇聚氧乙烯醚1-10g/L、高分子共聚液500-800mL/L。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測總膽固醇的高分子膜試劑，其特征在于，所述高分子共聚液的原材料由果糖0.5％-6％、聚(乙烯-alt-馬來酸酐)0.1％-5％、聚苯乙烯磺酸鈉0.1％-5％、羧甲基淀粉鈉2％-10％制備而成。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于檢測總膽固醇的高分子膜試劑，其特征在于，所述高分子共聚液的具體制備方法為：將羧甲基淀粉鈉、果糖加入純化水中攪拌3小時，形成均一的水溶液；然后加入聚(乙烯－alt－馬來酸酐)以及聚苯乙烯磺酸鈉，繼續(xù)在18－25℃條件下攪拌1個小時，待形成物料完全溶解形成均一的高分子膜液后收集并標(biāo)識為
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測總膽固醇的高分子膜試劑，其特征在于，所述緩沖液選自磷酸鹽緩沖液、HEPES、PIPES、MES緩沖液中的一種或多種，且PH值為6.10－6.60。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測總膽固醇的高分子膜試劑，其特征在于，所述多糖類選自β－環(huán)糊精、葡聚糖、殼聚糖中的一種或多種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1－5任一項(xiàng)所述的用于檢測總膽固醇的高分子膜試劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用于檢測總膽固醇的高分子膜試劑的制備方法，其特征在于，所述步驟S1中的高分子共聚液在溫度為18－25℃、攪拌器轉(zhuǎn)速為300－500rpm的條件下，攪拌0.5－1h。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種用于檢測總膽固醇的高分子膜試劑，其特征在于，包括原材料如下：緩沖液10-100mmol/l、膽固醇酯酶25-100ku/l、膽固醇氧化酶10-50ku/l、色原底物3-6g/l、抗壞血酸氧化酶5-50ku/l、氯化鈣1-10mm、辣根過氧化物酶10-50ku/l、山梨醇15-60g/l、牛磺酸10-60g/l、皂苷0.5-5g/l、多糖類10-50g/l、月桂醇聚氧乙烯醚1-10g/l、高分子共聚液500-800ml/l。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測總膽固醇的高分子膜試劑，其特征在于，所述高分子共聚液的原材料由果糖0.5％-6％、聚(乙烯-alt-馬來酸酐)0.1％-5％、聚苯乙烯磺酸鈉0.1％-5％、羧甲基淀粉鈉2％-10％制備而成。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于檢測總膽固醇的高分子膜試劑，其特征在于，所述高分子共聚液的具體制備方法為：將羧甲基淀粉鈉、果糖加入純化水中攪拌3小時...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張小海，單博文，張繼明，
申請(專利權(quán))人：深圳市雷諾華科技實(shí)業(yè)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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