【技術實現步驟摘要】
本申請涉及醫藥領域，具體涉及人乳頭瘤病毒的疫苗，尤其涉及九價人乳頭瘤病毒的疫苗及其應用。
技術介紹
1、人乳頭瘤病毒(human?papillomavirus,hpv)，是一種無包膜的小dna病毒，可感染人表皮和粘膜鱗狀上皮細胞。于1974年首次提出了hpv感染與宮頸癌的關系，并最終證明hpv感染是引起宮頸癌發生的主要病因。hpv感染是最常見的生殖道病毒感染，人感染hpv不僅有可能導致宮頸癌，還可能引起肛門生殖器癌和生殖器疣，此外，口咽癌和其他頭頸部癌、結腸癌、直腸癌的發生也與hpv感染相關。目前已鑒別的hpv型別有二百多種，根據致癌性可分為低危型和高危型，低危型hpv主要包括hpv6/11/30/42/43/44/61型等，其中90％的生殖器疣是由hpv6和11型感染引起的；世界衛生組織(world?health?organization,who)國際癌癥研究署(international?agency?for?research?on?cancer,iarc)最新定義的高危型hpv包括12種與人類癌癥明確相關的型別(hpv16/18/31/33/35/39/45/51/52/56/58/59型)和2種致癌性證據有限的型別(hpv66/68型)，高危型hpv具有致癌性，是幾乎所有宮頸癌的病因，此外，還導致88％的肛門癌、78％的陰道癌、15％～48％的外陰癌(與年齡有關)、51％的陰莖癌和13％～60％的口咽癌。
2、接種hpv疫苗是預防hpv持續感染和相關疾病發生的最經濟、有效的手段。目前國內外已上市的九價hpv疫
技術實現思路
1、基于現有技術的需求，本專利技術通過深入研究獲得涵蓋2種與生殖器疣明確相關，7種與宮頸癌明確相關型別(hpv6、11和hpv16、18、31、33、45、52、58型)抗原的預防性九價人乳頭瘤病毒疫苗。
2、本專利技術首先提供九價人乳頭瘤病毒疫苗，其包括hpv6、11、16、18、31、33、45、52、58型截短的l1-vlp抗原，及氫氧化鋁佐劑；
3、優選地，其hpv6、11、16、18、31、33、45、52、58l1-vlp抗原用量重量比為(1～3):(1～5):(2～7):(1～5):(0.5～3):(0.5～3):(0.5～3):(0.5～3):(0.5～3)；優選地，其hpv6、11、16、18、31、33、45、52、58l1-vlp抗原用量重量比為1.5:2:3:2:1:1:1:1:1；
4、更具體地，每0.5ml里每種抗原用量為10～100μg，更優選為hpv6、11、16、18、31、33、45、52、58l1-vlp抗原分別為30μg、40μg、60μg、40μg、20μg、20μg、20μg、20μg、20μg；氫氧化鋁佐劑的用量為0.5～1.0mg，優選為0.75mg。
5、更具體地，hpv6、11、16、18、31、33、45、52、58l1-vlp抗原由大腸桿菌系統表達獲得。
6、具體實施方式中，各型l1-vlp抗原的粒徑為45～80nm,更優選hpv6l1-vlp抗原的粒徑為45～60nm，hpv11l1-vlp抗原的粒徑為45～60nm，hpv16l1-vlp抗原的粒徑為45～60nm，hpv18l1-vlp抗原的粒徑為55～75nm，hpv31l1-vlp抗原的粒徑為55～75nm，hpv33l1-vlp抗原的粒徑為45～60nm，hpv45l1-vlp抗原的粒徑為50～65nm，hpv52l1-vlp抗原的粒徑為50～65nm，hpv58l1-vlp抗原的粒徑為45～60nm；
7、更具體地氫氧化鋁佐劑的粒徑為3～10μm。
8、優選地，所述各型l1-vlp蛋白抗原由各型l1五聚體蛋白與組裝液(ph4.5～5.5，nacl濃度2.0～5.0m)混合后組裝而成，l1五聚體蛋白的粒徑為10～15nm。
9、在具體的實施方式中，hpv6l1五聚體蛋白的粒徑為12～15nm，hpv11l1五聚體蛋白的粒徑為12～15nm，hpv16l1五聚體蛋白的粒徑為11～14nm，hpv18l1五聚體蛋白的粒徑為11～14nm，hpv31l1五聚體蛋白的粒徑為12～15nm，hpv33l1五聚體蛋白的粒徑為12～15nm，hpv45l1五聚體蛋白的粒徑為12～15nm，hpv52l1五聚體蛋白的粒徑為12～15nm，hpv58l1五聚體蛋白的粒徑為11～14nm。
10、在具體實施方式中，所述氫氧化鋁佐劑的制備方法如下：取氯化鋁和氫氧化鈉，按al3+和oh-按摩爾比1:(2～5)反應，反應體系不添加氯化鈉，室溫或50～70℃反應后升溫至80℃維持ph?6.0～7.0左右處理50～70min，下罐后用氯化鈉溶液洗滌(重懸質量比≥6.5:1)4次以上得到氫氧化鋁佐劑。
11、進一步地，洗滌后的氫氧化鋁佐劑根據投料量用注射水或0.9％氯化鈉溶液重懸至鋁含量至7mg/ml后分裝并高壓蒸汽滅菌121℃，20min。
12、在優先實施方式中，所述各型l1-vlp抗原中的l1蛋白在野生型序列的基礎有如下截短：野生型hpv6l1的n端截短不多于10個氨基酸，c端截短不多于30個氨基酸；野生型hpv11l1的n端截短不多于10個氨基酸，c端截短不多于30個氨基酸；野生型hpv16l1的n端截短不多于10個氨基酸，c端截短不多于30個氨基酸；野生型hpv18l1的n端截短不多于10個氨基酸，c端截短不多于30個氨基酸；野生型hpv31l1的n端截短不多于10個氨基酸，c端截短不多于30個氨基酸；野生型hpv33l1的n端截短不多于10個氨基酸，c端截短不多于30個氨基酸；野生型hpv45l1的n端截短不多于10個氨基酸，c端截短不多于30個氨基酸；野生型hpv52l1的n端截短不多于10個氨基酸，c端截短不多于30個氨基酸；野生型hpv58l1的n端截短不多于10個氨基酸，c端截短不多于30個氨基酸。
13、更優選地，所述各型l1蛋白的氨基酸序列分別如seq?id?no.1、seq?id?no.3、seqid?no.5、seq?id?no.7、seq?id?no.9、seq?id?no.11、seq?id?no.13、seq?id?no.15、seq?idno.17所示。
14、在另外實施方式中，所述疫苗采用組氨酸-鹽酸緩沖體系，并添加滲透壓調節劑和表面活性劑，優選地，所述滲透壓調節劑選自氯化鈉、磷酸鈉或硫酸鈉的一種或多種，優選為氯化鈉；所述表面活性劑為聚山梨酯80。
15、優選地，所述組氨酸-鹽酸緩沖體系的ph為5～7，更優選ph為5.5～6.本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.九價人乳頭瘤病毒疫苗，其包括HPV6、11、16、18、31、33、45、52、58?型截短的L1-VLP抗原，及氫氧化鋁佐劑；
2.如權利要求1所述的九價人乳頭瘤病毒疫苗，其特征在于，其中HPV6、11、16、18、31、33、45、52、58L1-VLP抗原用量重量比為1.5:2:3:2:1:1:1:1:1；優選地，每0.5ml?里每種抗原用量為10～100μg，更優選為HPV6、11、16、18、31、33、45、52、58L1-VLP抗原分別為30μg、40μg、60μg、40μg、20μg、20μg、20μg、20μg、20μg；氫氧化鋁佐劑的用量為0.5～1.0mg，優選為0.75mg；
3.如權利要求1所述的九價人乳頭瘤病毒疫苗，其特征在于，各型L1-VLP抗原的粒徑為45～80nm，氫氧化鋁佐劑的粒徑為3～10μm；
4.如權利要求3所述的九價人乳頭瘤病毒疫苗，其特征在于，各型L1-VLP蛋白抗原由各型L1五聚體蛋白組裝而成，L1五聚體蛋白的粒徑為10～15nm；更優選HPV6L1五聚體蛋白的粒徑為12～15nm，HPV11
5.如權利要求1所述的九價人乳頭瘤病毒疫苗，其特征在于，所述氫氧化鋁佐劑的制備方法如下：取氯化鋁和氫氧化鈉，按Al3+和OH-按摩爾比1:（2～5）反應，反應體系不添加氯化鈉，室溫或50～70℃反應后升溫至80℃維持?pH?6.0～7.0左右處理50～70min，下罐后用氯化鈉溶液洗滌（重懸質量比≥6.5:1）4次以上得到氫氧化鋁佐劑；
6.如權利要求1所述的九價人乳頭瘤病毒疫苗，其特征在于，所述各型L1五聚體蛋白中的L1蛋白在野生型序列的基礎有如下截短：野生型HPV6L1的N端截短不多于10個氨基酸，C端截短不多于30個氨基酸；野生型HPV11L1的N端截短不多于10個氨基酸，C端截短不多于30個氨基酸；野生型HPV16L1的N端截短不多于10個氨基酸，?C端截短不多于30個氨基酸；野生型HPV18L1的N端截短不多于10個氨基酸，C端截短不多于30個氨基酸；野生型HPV31L1的N端截短不多于10個氨基酸，C端截短不多于30個氨基酸；野生型HPV33L1的N端截短不多于10個氨基酸，C端截短不多于30個氨基酸；野生型HPV45L1的?N端截短不多于10個氨基酸，C端截短不多于30個氨基酸；野生型HPV52L1的N端截短不多于10個氨基酸，C端截短不多于30個氨基酸；野生型HPV58L1的N端截短不多于10個氨基酸，C端截短不多于30個氨基酸。
7.如權利要求1所述的九價人乳頭瘤病毒疫苗，其特征在于，所述各型L1蛋白的氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.5、SEQ?ID?NO.7、SEQ?ID?NO.9、SEQ?IDNO.11、SEQ?ID?NO.13、SEQ?ID?NO.15、SEQ?ID?NO.17所示。
8.如權利要求1至7任一項所述的九價人乳頭瘤病毒疫苗的制備方法，其包括如下步驟：
9.如權利要求8所述的九價人乳頭瘤病毒疫苗的制備方法，其特征在于，還包括成品灌裝，具體地啟動預灌封注射器灌裝機進行灌裝，優選地，灌裝速度為30～40轉/min，更優選地以0.55ml/支灌注分裝并加膠塞，于2～8℃冷庫中保存備用。
10.如權利要求1至7任一項所述的九價人乳頭瘤病毒疫苗在制備預防或治療人乳頭瘤病毒所致疾病的藥物中的用途。
...【技術特征摘要】
1.九價人乳頭瘤病毒疫苗，其包括hpv6、11、16、18、31、33、45、52、58?型截短的l1-vlp抗原，及氫氧化鋁佐劑；
2.如權利要求1所述的九價人乳頭瘤病毒疫苗，其特征在于，其中hpv6、11、16、18、31、33、45、52、58l1-vlp抗原用量重量比為1.5:2:3:2:1:1:1:1:1；優選地，每0.5ml?里每種抗原用量為10～100μg，更優選為hpv6、11、16、18、31、33、45、52、58l1-vlp抗原分別為30μg、40μg、60μg、40μg、20μg、20μg、20μg、20μg、20μg；氫氧化鋁佐劑的用量為0.5～1.0mg，優選為0.75mg；
3.如權利要求1所述的九價人乳頭瘤病毒疫苗，其特征在于，各型l1-vlp抗原的粒徑為45～80nm，氫氧化鋁佐劑的粒徑為3～10μm；
4.如權利要求3所述的九價人乳頭瘤病毒疫苗，其特征在于，各型l1-vlp蛋白抗原由各型l1五聚體蛋白組裝而成，l1五聚體蛋白的粒徑為10～15nm；更優選hpv6l1五聚體蛋白的粒徑為12～15nm，hpv11l1五聚體蛋白的粒徑為12～15nm，hpv16l1五聚體蛋白的粒徑為11～14nm，hpv18l1五聚體蛋白的粒徑為11～14nm，hpv31l1五聚體蛋白的粒徑為12～15nm，hpv33l1五聚體蛋白的粒徑為12～15nm，hpv45l1五聚體蛋白的粒徑為12～15nm，hpv52l1五聚體蛋白的粒徑為12～15nm，hpv58l1五聚體蛋白的粒徑為11～14nm。
5.如權利要求1所述的九價人乳頭瘤病毒疫苗，其特征在于，所述氫氧化鋁佐劑的制備方法如下：取氯化鋁和氫氧化鈉，按al3+和oh-按摩爾比1:（2～5）反應，反應體系不添加氯化鈉，室溫或50～70℃反應后升溫至80℃維持?ph?6.0～7.0左右處理50～70min，下罐后用氯化鈉溶液洗滌（重懸...
【專利技術屬性】
技術研發人員：劉永江，銀飛，于泓洋，陳曉，伍樹明，張海江，姜緒林，高俊，高文雙，劉玉瑩，張佳濤，馮慧彬，沈邇萃，李玲，史亞征，薛俊蓮，王學紅，蔣麗蓉，呂木子，
申請(專利權)人：北京康樂衛士生物技術股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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