【技術實現步驟摘要】
本專利技術一般涉及用于調節免疫應答的化合物。更具體地，本專利技術涉及用于調節th1免疫應答的pd-l2的寡聚形式。本專利技術化合物可用于一系列th1介導的疾病，包括病原性感染和過度增殖性疾病。
技術介紹
1、程序性細胞死亡蛋白1(pd-1)被認為是免疫調節中的重要參與者，通過其作為效應t細胞的制動，并降低組織微環境中的免疫應答。pd-1在活化的t細胞上表達，包括免疫抑制性cd4+t細胞(treg)和耗盡的cd8+t細胞，也在b細胞、骨髓樹突細胞(mdc)、單核細胞、胸腺細胞和自然殺傷(nk)細胞上表達。這種廣泛的pd-1表達提示有效免疫和維持t細胞穩態所需的pd-1信號傳導途徑的廣泛意義(gianchecchi等人，autoimmun.rev.12：1091-100,2013)。
2、值得注意的是，pd-1信號傳導途徑有助于維持正常個體的中樞和外周耐受。在胸腺中，pd-1與其配體的相互作用抑制了陽性選擇，從而抑制cd4-cd8-雙陰性細胞向cd4+cd8+雙陽性t細胞的轉化(keir等人，j.immunol.175：7329-7379,2005)。pd-1信號傳導還負責抑制自身反應性和逃避陰性選擇的炎癥效應t細胞，以避免附帶的免疫介導的組織損傷(keir等人，j.exp.med.203：883-895,2006)。
3、pd-1具有兩種已知的配體：蛋白死亡配體1(pd-l1；freeman等人，j.exp.med.192：1027-34,2000)，在人類中也被稱為b7-h1(dong等人，nat.med
4、惡性細胞和周圍的微環境細胞異常表達pd-1及其配體。在腫瘤微環境中，pd-1在來自許多不同腫瘤類型的大部分腫瘤浸潤淋巴細胞(til)中高度表達，并抑制局部效應免疫應答。pd-1的til表達與效應功能受損(細胞因子產生和對腫瘤細胞的細胞毒性效力)和/或幾種腫瘤類型的不良結果相關(thompson等人，clin.cancer?res.13：1757–1761,2007；zhang等人，mol.immunol.7：389–395,2010；ahmadzadeh?m等人，blood?114：1537–1544,2009；shi等人，int.j.cancer?128：887–896,2011)，包括腎細胞癌、轉移性黑色素瘤、以及胃癌、乳癌、卵巢癌、胰腺癌和肺癌。類似地，已經觀察到pd-l2在人腫瘤的子集中得以上調，并且有時與不良結果相關(rozali等人，clin.dev.immunol.2012：656340,2012)。
5、鑒于其在腫瘤微環境中與癌癥相關的免疫抑制中的潛在作用，已經提出將靶向pd-1/pd-配體途徑作為有吸引力的治療策略。在這方面的一些研究已經研究了阻斷性抗體對pd-1/pd-l1途徑的治療效果，證明了增強的腫瘤控制率(curran等人，proc.natl.acadsci.usa?107：4275-4280,2010；iwai等人，proc.natl.acad?sci.usa?99：12293-12297,2002；pilon-thomas等人，j.immunol.184：3442-3449,2010；zhang等人，blood?114：1545-1552)。然而，很少有研究調查阻斷pd-l2作為明確的治療策略。雖然在很少的研究中使用pd-l2阻斷策略，但這總是與靶向pd-l1相結合(parekh等人，j.immunol.182：2816-1826,2009；he等人，j.immunol.173：4919-4928,2004)，其無法推斷抗pd-l2策略的真實價值。
技術實現思路
1、本專利技術部分基于這樣一種確定，即pd-l2在與抗原特異性免疫效應細胞(iec)(所述免疫效應細胞包括t淋巴細胞)相互作用的細胞(如抗原呈遞細胞(apc))上的表達與th1相關疾病的嚴重程度呈負相關，以及pd-l2是建立th1免疫的必要條件。還發現，pd-l2聚集在這種iec-相互作用細胞的表面上可以抑制pd-l1與pd-1的結合，從而抑制pd-l1對iec的免疫抑制功能。令人驚訝的是，本專利技術人還確定了，相較于二聚體pd-l2與pd-1的結合，寡聚度大于2的pd-l2寡聚體具有顯著更高的親和力，并且這種“更高量級的pd-l2寡聚體”可以顯著降低pd-l1對iec功能的抑制作用，包括cd4+t細胞功能。如下所述，這些發現已經實踐到用于調節th1免疫的新試劑和方法中。
2、因此，在一個方面，本專利技術提供了可用于刺激或增強th1免疫的多肽復合物，該復合物通常由式(i)所示：
3、[p]n(i)
4、其中：
5、p，每次出現時獨立地代表蛋白分子，所述蛋白分子包含pd-l2多肽、由pd-l2多肽組成、或基本上由pd-l2多肽組成；以及
6、n代表大于2的整數。
7、適當地，p缺少腫瘤或腫瘤相關的新生血管靶向結構域。
8、在一些實施方案中，pd-l2多肽包含pd-l2的可溶部分、由pd-l2的可溶部分組成、或基本上由pd-l2的可溶部分組成，說明性示例包括有信號肽的pd-l2胞外域或沒有信號肽的pd-l2胞外域。在具體的實施方案中，蛋白分子缺少pd-l2跨膜結構域和pd-l2胞質結構域中的一者或兩者。
本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種多肽復合物，其是式(I)所示：
2.根據權利要求1所述的多肽復合物，其中P缺少腫瘤或腫瘤相關的新生血管靶向結構域。
3.根據權利要求1或權利要求2所述的多肽復合物，其中所述PD-L2多肽包含PD-L2的可溶部分、由PD-L2的可溶部分組成、或基本上由PD-L2的可溶部分組成。
4.根據權利要求3所述的多肽復合物，其中所述PD-L2的可溶部分是有信號肽的PD-L2胞外域、或沒有信號肽的PD-L2胞外域。
5.根據權利要求1至4中任一項所述的多肽復合物，其中所述蛋白分子缺少PD-L2跨膜結構域和PD-L2胞質結構域中的一者或兩者。
6.根據權利要求1至5中任一項所述的多肽復合物，其中n為≥3、≥4、≥5、≥6、≥7或≥8。
7.根據權利要求1至6中任一項所述的多肽復合物，其中n為≤100、≤50、≤30或≤20。
8.根據權利要求1至7中任一項所述的多肽復合物，其中n為3至20，適當地為4至16，更適當地為8至12。
9.根據權利要求1至8中任一項所述的多肽復合物，其中所述蛋白分子
10.根據權利要求1至8中任一項所述的多肽復合物，其中單個蛋白分子還包含至少一個寡聚化結構域，所述寡聚化結構域促進所述蛋白分子的自組裝以形成所述多肽復合物。
11.根據權利要求10所述的多肽復合物，其中所述至少一個寡聚化結構域與所述PD-L2多肽可操作地連接以形成單鏈嵌合多肽。
12.一種蛋白分子，其包含權利要求1至9中任一項所限定的PD-L2多肽、由權利要求1至9中任一項所限定的PD-L2多肽組成、或基本上由權利要求1至9中任一項所限定的PD-L2多肽組成，所述PD-L2多肽可操作地連接至少一個寡聚化結構域以形成式(I)所示多肽復合物，其中所述寡聚化結構域促進所述蛋白分子的自組裝。
13.根據權利要求10至12中任一項所述的多肽復合物，其中所述至少一個寡聚化結構域可操作地連接至所述PD-L2多肽的上游(即氨基末端)和/或下游(即羧基末端)。
14.根據權利要求13所述的多肽復合物，其中所述蛋白分子包含式(II)所示單個多肽鏈、由式(II)所示單個多肽鏈組成、或基本上由式(II)所示單個多肽鏈組成：
15.根據權利要求13所述的多肽復合物，其中所述蛋白分子包含式(III)所示單個多肽鏈、由式(III)所示單個多肽鏈組成、或基本上由式(III)所示單個多肽鏈組成：
16.根據權利要求15所述的多肽復合物，其中i為2且j為4或6。
17.根據權利要求13所述的多肽復合物，其中所述蛋白分子包含式(IV)所示單個多肽鏈、由式(IV)所示單個多肽鏈組成、或基本上由式(IV)所示單個多肽鏈組成：
18.根據權利要求13所述的多肽復合物，其中所述蛋白分子包含式(V)所示單個多肽鏈、由式(V)所示單個多肽鏈組成、或基本上由式(V)所示單個多肽鏈組成：
19.根據權利要求18所述的多肽復合物，其中j為2且i為4或6。
20.根據權利要求14至19中任一項所述的多肽復合物，其中在結合配偶體存在下單個寡聚化結構域(例如，OMDA或OMDB)組裝成異寡聚體。
21.根據權利要求20所述的多肽復合物，其中所述寡聚化結構域和所述結合配偶體可以是特異性結合對的成員。
22.根據權利要求21所述的多肽復合物，其中所述特異性結合對選自：生物素-抗生物素蛋白、生物素-鏈霉親和素、抗原-抗體、半抗原-抗半抗原、配體-受體以及受體-共受體。
23.根據權利要求10至22中任一項所述的多肽復合物，其中所述至少一個寡聚化結構域選自：二聚化結構域(例如，免疫球蛋白Fc結構域、亮氨酸拉鏈等)、三聚化結構域(例如，大腸桿菌天冬氨酸轉氨甲酰酶(ATCase)的催化亞基、來自T4噬菌體次要纖維蛋白的“foldon”三聚序列、頸區肽、人肺表面活性劑蛋白D、寡聚化卷曲螺旋粘附素、I類包膜病毒融合蛋白的互補七肽重復區等)、四聚化結構域(例如，四臂粘聯蛋白的卷曲螺旋結構域)、五聚化結構域(例如，色氨酸拉鏈或軟骨寡聚基質蛋白(COMP)的五聚化結構域等)和六聚化結構域(例如，來自IgA抗體重鏈C-末端的尾部)。
24.根據權利要求10至23中任一項所述的多肽復合物，其中所述至少一個寡聚化結構域與所述PD-L2多肽直接連接。
25.根據權利要求10至23中任一項所述的多肽復合物，其中所述至少一個寡聚化結構域和所述PD-L2多肽通過肽接頭連接。
26.根據權利要求25所述的多...
【技術特征摘要】
1.一種多肽復合物，其是式(i)所示：
2.根據權利要求1所述的多肽復合物，其中p缺少腫瘤或腫瘤相關的新生血管靶向結構域。
3.根據權利要求1或權利要求2所述的多肽復合物，其中所述pd-l2多肽包含pd-l2的可溶部分、由pd-l2的可溶部分組成、或基本上由pd-l2的可溶部分組成。
4.根據權利要求3所述的多肽復合物，其中所述pd-l2的可溶部分是有信號肽的pd-l2胞外域、或沒有信號肽的pd-l2胞外域。
5.根據權利要求1至4中任一項所述的多肽復合物，其中所述蛋白分子缺少pd-l2跨膜結構域和pd-l2胞質結構域中的一者或兩者。
6.根據權利要求1至5中任一項所述的多肽復合物，其中n為≥3、≥4、≥5、≥6、≥7或≥8。
7.根據權利要求1至6中任一項所述的多肽復合物，其中n為≤100、≤50、≤30或≤20。
8.根據權利要求1至7中任一項所述的多肽復合物，其中n為3至20，適當地為4至16，更適當地為8至12。
9.根據權利要求1至8中任一項所述的多肽復合物，其中所述蛋白分子化學偶聯在一起以形成所述多肽復合物。
10.根據權利要求1至8中任一項所述的多肽復合物，其中單個蛋白分子還包含至少一個寡聚化結構域，所述寡聚化結構域促進所述蛋白分子的自組裝以形成所述多肽復合物。
11.根據權利要求10所述的多肽復合物，其中所述至少一個寡聚化結構域與所述pd-l2多肽可操作地連接以形成單鏈嵌合多肽。
12.一種蛋白分子，其包含權利要求1至9中任一項所限定的pd-l2多肽、由權利要求1至9中任一項所限定的pd-l2多肽組成、或基本上由權利要求1至9中任一項所限定的pd-l2多肽組成，所述pd-l2多肽可操作地連接至少一個寡聚化結構域以形成式(i)所示多肽復合物，其中所述寡聚化結構域促進所述蛋白分子的自組裝。
13.根據權利要求10至12中任一項所述的多肽復合物，其中所述至少一個寡聚化結構域可操作地連接至所述pd-l2多肽的上游(即氨基末端)和/或下游(即羧基末端)。
14.根據權利要求13所述的多肽復合物，其中所述蛋白分子包含式(ii)所示單個多肽鏈、由式(ii)所示單個多肽鏈組成、或基本上由式(ii)所示單個多肽鏈組成：
15.根據權利要求13所述的多肽復合物，其中所述蛋白分子包含式(iii)所示單個多肽鏈、由式(iii)所示單個多肽鏈組成、或基本上由式(iii)所示單個多肽鏈組成：
16.根據權利要求15所述的多肽復合物，其中i為2且j為4或6。
17.根據權利要求13所述的多肽復合物，其中所述蛋白分子包含式(iv)所示單個多肽鏈、由式(iv)所示單個多肽鏈組成、或基本上由式(iv)所示單個多肽鏈組成：
18.根據權利要求13所述的多肽復合物，其中所述蛋白分子包含式(v)所示單個多肽鏈、由式(v)所示單個多肽鏈組成、或基本上由式(v)所示單個多肽鏈組成：
19.根據權利要求18所述的多肽復合物，其中j為2且i為4或6。
20.根據權利要求14至19中任一項所述的多肽復合物，其中在結合配偶體存在下單個寡聚化結構域(例如，omda或omdb)組裝成異寡聚體。
21.根據權利要求20所述的多肽復合物，其中所述寡聚化結構域和所述結合配偶體可以是特異性結合對的成員。
22.根據權利要求21所述的多肽復合物，其中所述特異性結合對選自：生物素-抗生物素蛋白、生物素-鏈霉親和素、抗原-抗體、半抗原-抗半抗原、配體-受體以及受體-共受體。
23.根據權利要求10至22中任一項所述的多肽復合物，其中所述至少一個寡聚化結構域選自：二聚化結構域(例如，免疫球蛋白fc結構域、亮氨酸拉鏈等)、三聚化結構域(例如，大腸桿菌天冬氨酸轉氨甲酰酶(atcase)的催化亞基、來自t4噬菌體次要纖維蛋白的“foldon”三聚序列、頸區肽、人肺表面活性劑蛋白d、寡聚化卷曲螺旋粘附素、i類包膜病毒融合蛋白的互補七肽重復區等)、四聚化結構域(例如，四臂粘聯蛋白的卷曲螺旋結構域)、五聚化結構域(例如，色氨酸拉鏈或軟骨寡聚基質蛋白(comp)的五聚化結構域等)和六聚化結構域(例如，來自iga抗體重鏈c-末端的尾部)。
24.根據權利要求10至23中任一項所述的多肽復合物，其中所述至少一個寡聚化結構域與所述pd-l2多肽直接連接。
25.根據權利要求10至23中任一項所述的多肽復合物，其中所述至少一個寡聚化結構域和所述pd-l2多肽通過肽接頭連接。
26.根據權利要求25所述的多肽復合物，其中所述肽接頭由約1個至約100個氨基酸殘基(以及其間的所有整數個氨基酸殘基)組成。
27.根據權利要求25或權利要求26所述的多肽復合物，其中所述肽接頭包含至少一個部分，所述部分選自：促進純化所述蛋白分子的純化部分、調節對所述蛋白分子免疫應答的免疫調節部分、和賦予結構靈活性的部分。
28.一種核酸構建體，其包含編碼序列，所述編碼序列編碼權利要求10至27中任一項所限定的蛋白分子，所述編碼序列可操作地連接至調節元件，所述調節元件在宿主細胞中是可操作的。
29.一種宿主細胞，其含有權利要求28所述的核酸構建體。
30.根據權利要求29所述的宿主，其是原核宿主細胞。
31.根據權利要求29所述的宿主，其是真核宿主細胞。
32.一種產生多肽復合物的方法，所述方法包括：在適于形成多肽復合物的條件下(例如，在水溶液中)，將權利要...
【專利技術屬性】
技術研發人員：M·維克斯，
申請(專利權)人：昆士蘭醫學研究所理事會，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。