【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物工程，涉及一種用于檢測益生菌的引物組合物及應用，具體地說是用于檢測動物雙歧桿菌乳亞種i797的引物組合物及應用。
技術介紹
1、動物雙岐桿菌乳亞種i797(以下簡稱i797)是一株安全性強、具有改善小兒腹瀉和消化不良功能的益生菌。隨著益生菌健康作用被消費者所熟知，各國研究機構和相關企業都在致力于益生菌菌種的創新，以深化對現有益生機制的理解并提高益生菌產品的功效。然而，益生菌菌株存在菌株特異性，不合理使用可能引發潛在的食品安全問題，如系統感染、有害代謝產物產生和免疫刺激作用。因此，益生菌菌株的精確鑒定對益生菌食品的品質和功能特性至關重要。
2、目前益生菌的鑒定主要分為培養法和分子生物學法。培養法主要是通過形態學、革蘭氏染色和生化測試進行鑒定，非常耗時且無法對同種的菌株之間進行區分。分子生物學方法主要包括16s?rdna、16s-23s?its基因序列測序方法、脈沖場凝膠電泳法(pulsedfield?gel?electrophoresis,pfge)和隨機擴增多態性dna分析(random?amplifiedpolymorphic?dna,rapd)等。然而，16srdna及16s-23s?its在辨別密切相關的物種和亞種方面存在局限性。脈沖場凝膠電泳法、隨機擴增多態性dna分析等dna指紋分型技術雖然可以用于在菌株水平上鑒定益生菌，但是這些dna指紋分型方法操作復雜，需要專業技能或先進的硬件和軟件，不適用于企業開展快速高效的益生菌株水平特異性鑒別。因此，建立一套高效的、可操作性強的菌株檢測方法迫在眉
3、公開號為cn?112063619?a的中國專利公開了一種快速、高靈敏性檢測和定量酸奶中動物雙歧桿菌bb-12的方法，該方法基于16s?rrna基因構建taqman-mgb探針，通過實時熒光定量pcr技術來檢測酸奶中動物雙歧桿菌bb-12。但該方法只針對16s?rrna基因，特異性差，并不能檢測出同為動物雙歧桿菌乳亞種之間的不同株系。
技術實現思路
1、本專利技術的目的，旨在要提供一種用于檢測動物雙歧桿菌乳亞種i797的引物組合物及應用，以解決現有技術中存在的以上不足，達到定性定量地檢測樣品中i797的目的。
2、為了實現上述目的，本專利技術采用的技術方案是：
3、一種用于檢測動物雙歧桿菌乳亞種i797的引物組合物，其包括上游引物和下游引物；
4、上游引物的核苷酸序列如seq?id?no.1所示，下游引物的核苷酸序列如seq?idno.2所示；
5、seq?id?no.1：ggcgccttcgtcaacct；
6、seq?id?no.2:aggttgcgaatctgcgagat。
7、作為一種限定，該引物組合物包括探針，探針的核苷酸序列如seq?id?no.3所示，其中，探針的3′端連接有淬滅基團，5′端連接有熒光基團；
8、seq?id?no.3:atcgatggcctgctaca。
9、作為進一步限定，所述淬滅基團為bhq1，熒光基團為fam。
10、本專利技術還提供了上述用于檢測動物雙歧桿菌乳亞種i797的引物組合物的應用，所述引物組合物用于定量檢測動物雙歧桿菌乳亞種i797。
11、由于采用了上述技術方案，本專利技術與現有技術相比，所取得的技術進步在于：
12、①本專利技術提供的用于檢測動物雙歧桿菌乳亞種i797的引物組合物及應用，該引物組合物具有良好的特異性，能有效區別i797與其他18株雙歧桿菌菌株(其中包括6株動物雙歧桿菌乳亞種)；
13、②本專利技術提供的用于檢測動物雙歧桿菌乳亞種i797的引物組合物及應用，該引物組合物靈敏度高，對i797菌株dna濃度和菌液濃度的檢出限分為為1.5pg和104cfu/ml；
14、③本專利技術提供的用于檢測動物雙歧桿菌乳亞種i797的引物組合物及應用，該引物組合物所針對的特異性位點在i797傳代40次過程中表現出較強的穩定性；重復性和重現性檢測結果的相對標準偏差分別小于2％和6％；
15、④本專利技術提供的用于檢測動物雙歧桿菌乳亞種i797的引物組合物及應用，不僅可以定性檢測出復合益生菌產品中是否含有i797，并且可以定量檢測出i797的菌含量。
16、本專利技術通過與其它22株動物雙歧桿菌乳亞種菌株進行全基因組測序-單核苷酸多態性(whole?genome?sequencing-single?nucleotide?polymorphism，wgs-snp)分析，確定了i797菌株位于k1717_01615基因上的一個特異性位點，根據該位點設計引物及探針，基于qpcr建立了i797菌株的量化分析方法，該引物組合物特異性好、靈敏度高、穩定性強，實現了復合益生菌產品中i797菌株的準確量化分析。
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1.一種用于檢測動物雙歧桿菌乳亞種i797的引物組合物，其特征在于，其包括上游引物和下游引物；
2.根據權利要求1所述的用于檢測動物雙歧桿菌乳亞種i797的引物組合物，其特征在于，該引物組合物包括探針，探針的核苷酸序列:5′-?ATCGATGGCCTGCTACA?-3′；
3.根據權利要求2所述的用于檢測動物雙歧桿菌乳亞種i797的引物組合物，其特征在于，所述淬滅基團為BHQ1，熒光基團為FAM。
4.根據權利要求2或3所述的用于檢測動物雙歧桿菌乳亞種i797的引物組合物的應用，其特征在于，所述引物組合物用于定量檢測動物雙歧桿菌乳亞種i797。
【技術特征摘要】
1.一種用于檢測動物雙歧桿菌乳亞種i797的引物組合物，其特征在于，其包括上游引物和下游引物；
2.根據權利要求1所述的用于檢測動物雙歧桿菌乳亞種i797的引物組合物，其特征在于，該引物組合物包括探針，探針的核苷酸序列:5′-?atcgatggcctgctaca?-3′；
<...【專利技術屬性】
技術研發人員：張棟，趙磊，馮麗莉，劉洋，王世杰，張奕南，王新潮，薛玉玲，荀一萍，寧一冰，
申請(專利權)人：君樂寶乳業集團股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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