【技術實現步驟摘要】
本申請涉及生物工程，特別是涉及一種無鹽培養生產聚羥基脂肪酸酯的方法。
技術介紹
1、聚羥基脂肪酸酯(polyhydroxyalkanoate，pha)是一種廣泛存在于微生物胞內且高度聚合的高分子生物聚酯，具有與傳統石油基材料(如聚丙烯、聚氯乙烯等)相媲美的物化特性，且具有良好的生物可降解性和生物相容性，其制品可在自然環境條件下由微生物重新分解成二氧化碳和水，被公認為是最具潛力的綠色環保型高分子材料。pha廣泛應用于醫療、日用品等多個領域，例如縫合線、骨折固定材料、組織工程支架、餐具、購物袋、垃圾袋等。
2、現有pha生產以微生物發酵方式為主，經過迭代的優化控制，pha發酵工藝日趨成熟。常見的生產菌種有羅氏真氧菌(ralstonia?eutropha)、鹽單胞菌(halomonasbluephagenesis)和基因改造后的大腸桿菌(escherichia?coli)等，然而，pha發酵生產過程中的含鹽培養基存在腐蝕不銹鋼設備的問題，且后續廢水的處理也十分繁雜，也已成為制約pha低成本生產工藝發展的瓶頸問題。
3、因此，開發出一種在無鹽條件下培養生產pha的方法具有十分重要的意義。
技術實現思路
1、本申請的目的是提供一種無鹽培養生產聚羥基脂肪酸酯的方法。
2、本申請采用了以下技術方案：
3、本申請公開了一種無鹽培養生產聚羥基脂肪酸酯的方法，包括：將細菌接入種子培養基中進行培養，得到種子液；將所述種子液接入基礎培養基中進行發酵培養，并監
4、需要說明的是，本申請的無鹽培養生產聚羥基脂肪酸酯的方法，所使用的培養基均不含氯化鈉，能夠避免培養體系中氯化鈉所含氯離子對不銹鋼設備的腐蝕，也能夠極大簡化下游含鹽廢水的處理，可有效降低生產成本，為生產替代石油基塑料的天然高分子生物材料提供了重要的技術手段，具有良好的工業化前景。
5、本申請的一種實現方式中，所述細菌為革蘭氏陽性菌。需要說明的是，目前的pha的生產菌種，基本集中于革蘭氏陰性菌，但通過革蘭氏陰性菌生產pha，不免受到細菌內毒素的污染，導致避免影響pha的應用，例如應用于醫療用品時會導致宿主產生免疫反應。革蘭氏陽性菌不產內毒素，生產的pha也不含內毒素，可以滿足pha應用于醫療器械等的要求，具有良好的市場應用前景。
6、本申請的一種實現方式中，所述細菌包括巨大普里斯特氏菌mibe00004。分類命名為priestia?megaterium?mibe00004，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為cctccno：m?2022789，保藏日期為2022年6月2日，保藏地址為湖北省武漢市武昌區八一路299號武漢大學。
7、本申請的一種實現方式中，所述聚羥基脂肪酸酯包括聚3-羥基丁酸脂。
8、本申請的一種實現方式中，將所述細菌接入所述種子培養基中進行培養的接種密度為105～107cells/ml。
9、本申請的一種實現方式中，將所述細菌接入所述種子培養基中進行培養的培養溫度為20～40℃。
10、本申請的一種實現方式中，將所述細菌接入所述種子培養基中進行培養的初始ph為5～9。
11、本申請的一種實現方式中，將所述細菌接入所述種子培養基中進行培養的培養時間為8～24小時。
12、本申請的一種實現方式中，所述種子培養基包括：蔗糖1～10g/l，硫酸銨0.1～1g/l，磷酸二氫鉀0.15～1.5g/l，磷酸氫二鈉0.36～3.6g/l，硫酸鎂0.05～2g/l。
13、本申請的一種實現方式中，所述發酵培養進入對數期后，進行所述第一階段補料發酵。
14、本申請的一種實現方式中，當所述發酵培養的培養體系中的糖含量下降至12g/l時，添加第一補料培養基進行第一階段補料發酵。需要說明的是，發酵培養進入對數期和發酵培養的培養體系糖含量下降至12g/l，兩者無需同時滿足，其中一個條件達到即可進行第一階段補料發酵。
15、本申請的一種實現方式中，所述發酵培養的培養溫度為20～45℃。
16、本申請的一種實現方式中，所述發酵培養的初始ph為5～9。
17、本申請的一種實現方式中，所述發酵培養的初始溶氧飽和度為0％～100％。
18、本申請的一種實現方式中，所述發酵培養的培養時間為2～10小時。
19、本申請的一種實現方式中，糖蜜10～100g/l，玉米漿干粉5～50g/l，硫酸銨0.2～10g/l，磷酸二氫鉀0.1～6g/l，磷酸氫二鈉0.1～8g/l，硫酸鎂0～1.5g/l。
20、本申請的一種實現方式中，所述第一補料培養基和所述第二補料培養基均包含碳源和氮源。
21、本申請的一種實現方式中，所述第二補料培養基中的氮源含量低于所述第一補料培養基中的氮源含量。需要說明的是，第二階段降低氮含量有利于pha的合成。
22、本申請的一種實現方式中，所述第一補料培養基的碳氮比為5:1～50:1。
23、本申請的一種實現方式中，所述第二補料培養基的碳氮比為20:1～100:1。
24、本申請的一種實現方式中，所述第一補料培養基或所述第二補料培養基的碳源選自葡萄糖、蔗糖、糖蜜、淀粉水解液、粗甘油和秸稈糖中的任意一種或多種；所述第一補料培養基或所述第二補料培養基的氮源選自酵母粉、玉米漿干粉、硫酸銨、氯化銨、硝酸銨和尿素中任意的一種或多種。
25、本申請的一種實現方式中，所述第一階段補料發酵控制培養體系中糖濃度為5～30g/l。
26、本申請的一種實現方式中，所述第一階段補料發酵控制培養體系中糖濃度為10～30g/l。
27、本申請的一種實現方式中，所述第一階段補料發酵的培養時間為12～22小時。
28、本申請的一種實現方式中，所述第二階段補料發酵控制培養體系中糖濃度為5～30g/l。
29、本申請的一種實現方式中，所述第二階段補料發酵控制培養體系中糖濃度為10～30g/l；
30、本申請的一種實現方式中，所述第二階段補料發酵的培養時間為16～28小時。
31、本申請的一種實現方式中，所述第一補料培養基或所述第二補料培養基的添加方式包括間歇補料和連續流加補料。
32、本申請的有益效果在于：
33、本申請的無鹽培養生產聚羥基脂肪酸酯的方法，所使用的培養基均不含氯化鈉，能夠避免培養體系中氯化鈉所含氯離子對不銹鋼設備的腐蝕，也能夠極大簡化下游廢水的處理，可有效降低生產成本，為生產替代石油基塑料的天然高分子生物材料提供了重要的技術手段，具有良好的工業化前景。此外，革蘭氏陽性菌不產內毒本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種無鹽培養生產聚羥基脂肪酸酯的方法，其特征在于，包括：
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述細菌為革蘭氏陽性菌；
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述聚羥基脂肪酸酯包括聚-3-羥基丁酸脂。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，將所述細菌接入所述種子培養基中進行培養的接種密度為105～107cells/mL；
5.根據權利要求1至4任一項所述的方法，其特征在于，所述發酵培養的培養溫度為20～45℃；
6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一補料培養基和所述第二補料培養基均包含碳源和氮源；
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述第一補料培養基或所述第二補料培養基的碳源選自葡萄糖、蔗糖、糖蜜、淀粉水解液、粗甘油和秸稈糖中的任意一種或多種；所述第一補料培養基或所述第二補料培養基的氮源選自酵母粉、玉米漿干粉、硫酸銨、氯化銨、硝酸銨和尿素中任意的一種或多種。
8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，當所述發酵培養的培養體系中的糖含量下降至12g/L時，添加第
9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述第二階段補料發酵控制培養體系中糖濃度為5～30g/L；
10.根據權利要求6至9任一項所述的方法，其特征在于，所述第一補料培養基或所述第二補料培養基的添加方式包括間歇補料和連續流加補料。
...【技術特征摘要】
1.一種無鹽培養生產聚羥基脂肪酸酯的方法，其特征在于，包括：
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述細菌為革蘭氏陽性菌；
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述聚羥基脂肪酸酯包括聚-3-羥基丁酸脂。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，將所述細菌接入所述種子培養基中進行培養的接種密度為105～107cells/ml；
5.根據權利要求1至4任一項所述的方法，其特征在于，所述發酵培養的培養溫度為20～45℃；
6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一補料培養基和所述第二補料培養基均包含碳源和氮源；
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在...
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