【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及食品科學與生物工程，尤其涉及一種金槍魚α-淀粉酶和二肽基肽酶-ⅳ抑制寡肽及其制備方法與用途。
技術介紹
1、糖尿病發病率正以每15年增長1倍的速度遞增，成為繼腫瘤、心血管疾病之后威脅人類健康的第三大嚴重慢性非傳染性疾病。目前常用的抗糖尿病藥物，如噻唑烷二酮類、二甲雙胍、沙格列汀、利格列汀、西格列汀、維格列汀等，在具有明顯的降糖作用外，往往還伴有體重增加、骨質流失、頭痛、泌尿和上呼吸道感染以及胃腸道副作用，并有不同程度的耐藥性。因此，迫切需要發現更安全、天然、無毒、無不良反應的替代活性成分來防治糖尿病。
2、通常在機體中α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶經常存在于腸表面細胞中，負責將復雜的碳水化合物轉化為單糖，α-淀粉酶通過將糖原和膳食淀粉轉化為麥芽糖和葡萄糖來提高血液中的葡萄糖水平，α-葡萄糖苷酶通過在小腸中將雙糖分解成葡萄糖來提高葡萄糖水平；另外，葡萄糖依賴性胰島素性多肽(gip)和胰高血糖素樣肽-1(glp-1)對維持機體血糖水平至關重要，而dpp-iv可以降解gip和glp，從而破壞正常血糖水平。因此，dpp-iv和α-amylase以及α-glucosidase成為糖尿病治療的關鍵靶點。近年來，眾多研究表明，基于食物源性蛋白質或多肽的天然活性物質替代療法對于預防和控制糖尿病具有重要潛力。大量研究證實，食源性活性肽可以通過多種機制調節血糖水平，包括抑制特定酶，特別是dpp-iv、α-glucosidase和α-amylase，并作為胰高血糖素樣肽-1(glp-1)受體激動劑。因此，具有降血糖活性的食源肽，
3、金槍魚類是世界遠洋漁業重要經濟魚類，全球每年金槍魚捕撈量超過750萬噸，由于其兼具深海魚類肉質鮮美、營養均衡全面、富含優質蛋白質的特點，其需求量在世界范圍內不斷增加。當前，在金槍魚加工過程中產生約占總重量50％-70％的副產物，包括魚邊角料、內臟、碎肉、魚頭、魚皮和魚骨等，造成金槍魚資源極大浪費和生態環境負面效應。另一方面，金槍魚加工副產物中蛋白質含量高達80％，這些蛋白及肽類具有多種生理功能，包括抗氧化、調節血脂、抗菌、抗凝和免疫調節等，具有成為藥物、功能性食品以及新型海洋健康產品重要潛力。因此，從金槍魚加工下腳料中發掘出具有降血糖效應的活性肽，對治療、預防與輔助控制糖尿病患者血糖水平，維持糖尿病患者機體健康，具有重要意義。
技術實現思路
1、針對現有技術的不足，本專利技術的首要目的是提供一種金槍魚α-淀粉酶和二肽基肽酶-ⅳ抑制寡肽，該寡肽安全無毒副作用，易消化吸收，可以開發成為α-淀粉酶(α-amylase)和二肽基肽酶-ⅳ(dpp-ⅳ)抑制劑、藥物和食品，用于糖尿病防治中。
2、所述寡肽的氨基酸序列具有如下序列中的任意一種：gly-glu-val-glu(seq?idno：1)、leu-asp-asp-val-glu-glu(seq?id?no：2)、val-ser-gly-ala-glu-leu-glu(seq?idno：3)，用單字母表示為geve、lddvee、vsgaele，esi-ms測定分子量分別為432.19da、719.31da、704.35da。
3、本專利技術的第二個目的是提供上述金槍魚α-淀粉酶和二肽基肽酶-ⅳ抑制寡肽的制備方法。
4、為達到上述目的，本申請采取以下技術方案：
5、一種金槍魚α-淀粉酶和二肽基肽酶-ⅳ抑制寡肽，該寡肽由金槍魚碎肉下腳料制備，具體制備步驟包括：
6、s1、取金槍魚碎肉，按料液比1/2-1/4，攪碎成勻漿液，調節ph?8-9之間，預熱至溫度40-55℃，加入堿性蛋白酶，加酶量為2000-4000u/g，酶解時間4-6h；酶解液升溫至90-95℃，持續10-15min滅酶；滅活酶解液8000-10000r/min，4℃低溫冷卻離心15-30min，除脂后取上清液過200目紗布，濾液過0.22μm超濾膜，收集濾過液，冷凍干燥得到金槍魚酶解蛋白肽；
7、s2、將步驟s1所得金槍魚酶解蛋白肽采用凝膠色譜進行分離，以去離子水為洗脫液，流速5.0ml/min，檢測波長220nm，收集具有最強α-amylase和dpp-ⅳ抑制能力的活性組分；經hplc-esi-ms鑒定分析，分子對接，篩選與α-amylase和dpp-ⅳ結合能力強的肽序列；本申請獲得3個肽序列并進行合成，驗證了其α-amylase和dpp-ⅳ抑制活性。
8、本專利技術的第三個目的是提供上述金槍魚寡肽的應用，所述寡肽gly-glu-val-glu(seq?id?no.1)、leu-asp-asp-val-glu-glu(seq?id?no.2)具有良好的α-amylase抑制活性，所述寡肽val-ser-gly-ala-glu-leu-glu(seq?id?no.3)具有良好的dpp-ⅳ抑制作用，從而均表現出具有降血糖功能的特性。
9、上述金槍魚寡肽可用于制備α-amylase或dpp-ⅳ抑制劑和降低血糖的藥物，以及用于輔助治療糖尿病的食品、保健品中。
10、與現有技術相比，本專利技術的優點和有益效果體現在：
11、(1)本專利技術提供的具有降血糖活性金槍魚寡肽，來源于食源性蛋白，經過食品蛋白酶酶解制備，結構清楚，功效明確，安全高效、無毒副作用，易消化吸收；
12、(2)制備工藝簡單，設備要求低，具有較強產業可實施性和社會推廣應用價值；所述的α-amylase和dpp-ⅳ抑制寡肽在研究開發具有降血糖功能的肽類健康食品或保健食品以及藥物方面具有廣闊的應用前景，對糖尿病防治和魚類資源高值化利用都具有重要意義。
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1.一種金槍魚寡肽，其特征在于，所述肽的氨基酸序列具有如下序列中的任意一種：
2.權利要求1所述金槍魚寡肽的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
3.權利要求1所述的金槍魚寡肽在制備降血糖藥物中的應用。
4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，制備作為α-淀粉酶或二肽基肽酶-Ⅳ抑制劑的藥物。
5.權利要求1所述的金槍魚寡肽在制備治療和/或輔助治療糖尿病的食品、保健品中的應用。
【技術特征摘要】
1.一種金槍魚寡肽，其特征在于，所述肽的氨基酸序列具有如下序列中的任意一種：
2.權利要求1所述金槍魚寡肽的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
3.權利要求1所述的金槍魚寡肽在制備降血糖藥...
【專利技術屬性】
技術研發人員：萬鵬，潘劍宇，陳華，蔡冰娜，趙祥彈，陳得科，孫恢禮，
申請(專利權)人：中國科學院南海海洋研究所，
類型：發明
國別省市：
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