【技術實現步驟摘要】
本申請涉及醫藥領域，具體涉及人乳頭瘤病毒的疫苗，尤其涉及十五價人乳頭瘤病毒的疫苗。
技術介紹
1、人乳頭瘤病毒(human?papillomavirus,hpv)，是一種無包膜的小dna病毒，可感染人表皮和粘膜鱗狀上皮細胞。于1974年首次提出了hpv感染與宮頸癌的關系，并最終證明hpv感染是引起宮頸癌發生的主要病因。hpv感染是最常見的生殖道病毒感染，人感染hpv不僅有可能導致宮頸癌，還可能引起肛門生殖器癌和生殖器疣，此外，口咽癌和其他頭頸部癌、結腸癌、直腸癌的發生也與hpv感染相關。目前已鑒別的hpv型別有二百多種，根據致癌性可分為低危型和高危型，低危型hpv主要包括hpv6/11/30/42/43/44/61型等，其中90％的生殖器疣是由hpv6和11型感染引起的；世界衛生組織(world?health?organization,who)國際癌癥研究署(international?agency?for?research?on?cancer,iarc)最新定義的高危型hpv包括12種與人類癌癥明確相關的型別(hpv16/18/31/33/35/39/45/51/52/56/58/59型)和2種致癌性證據有限的型別(hpv66/68型)，高危型hpv具有致癌性，是幾乎所有宮頸癌的病因，此外，還導致88％的肛門癌、78％的陰道癌、15％～48％的外陰癌(與年齡有關)、51％的陰莖癌和13％～60％的口咽癌。
2、接種hpv疫苗是預防hpv持續感染和相關疾病發生的最經濟、有效的手段。目前國外已上市的hpv疫苗有三種：英
3、截至目前，國內、外尚無涵蓋全部12種與人類癌癥明確相關的型別(hpv16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59型)和兩種致癌性證據有限的型別(hpv66/68型)以及引起生殖器疣的hpv6和11型的廣譜預防性hpv疫苗上市。因此亟需一種更為廣譜的hpv疫苗來提升女性宮頸癌的預防效果。
技術實現思路
1、基于現有技術的需求，本專利技術通過深入研究獲得涵蓋全部12種與人類癌癥明確相關的型別(hpv16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59型)的預防性hpv的十五價疫苗。
2、首先本專利技術提供人乳頭瘤病毒的疫苗，其包括hpv6、11、16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型的l1抗原中的一種或多種組合而成，例如其中15種，9種，6種和3種組合而成；
3、優選地，其hpv6、11、16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68抗原用量重量比為1-3：1-5：2-7：1-5：0.5-3：0.5-3：0.5-3：0.5-3：0.5-3：0.5-2：0.5-2：0.5-2：0.5-2：0.5-2：0.5-2：優選地，其hpv6、11、16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68抗原用量重量比為1.5：2：3：2：1：1：1：1：1：1：1：1：1：1：1；或者1.5：2：3：2：1：1：1：1：1：1：1：1：1：1：1；或者3：4：6：4：2：2：2：2：2：1：1：1：1：1：1；
4、更具體地每種蛋白用量為10-100μg，更優選為hpv6、11、16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68分別為每0.5ml里含有30μg、40μg、60μg、40μg、20μg、20μg、20μg、20μg、20μg、20μg、20μg、20μg、20μg、20μg、20μg。
5、進一步優選地，所述各型l1抗原在野生型序列的基礎有如下截短：野生型hpv6?l1的n端截短2個氨基酸，c端截短29個氨基酸、野生型hpv11?l1的n端截短3個氨基酸，c端截短29個氨基酸、野生型hpv16?l1的n端截短4個氨基酸，c端截短29個氨基酸、野生型hpv18?l1的n端截短4個氨基酸，c端截短30個氨基酸、野生型hpv31?l1的n端截短4個氨基酸，c端截短27個氨基酸、野生型hpv33?l1的n端截短4個氨基酸，c端截短24個氨基酸、野生型hpv35?l1的n端截短4個氨基酸，c端截短28個氨基酸、野生型hpv39l1的n端截短9個氨基酸，c端截短29個氨基酸、野生型hpv45?l1的n端截短4個氨基酸，c端截短30個氨基酸、野生型hpv51?l1的n端截短4個氨基酸，c端截短28個氨基酸、野生型hpv52?l1的n端截短4個氨基酸，c端截短23個氨基酸、野生型hpv56?l1的n端截短4個氨基酸，c端截短25個氨基酸、野生型hpv58?l1的n端截短4個氨基酸，c端截短23個氨基酸、野生型hpv59?l1的n端截短4個氨基酸，c端截短31個氨基酸、hpv68l1的n端截短4個氨基酸，c端截短28個氨基酸。
6、在一個具體實施方式中，所述hpv6、11、16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68的l1抗原的氨基酸序列分別如seq?id?no：1至15所示。
7、另外優選地，采用的佐劑是鋁佐劑，優選為氫氧化鋁佐劑，更優選地，抗原蛋白與鋁佐劑質量比0.5-1:1，優選為0.7-0.85:1。
8、進一步優選地，所述疫苗采用緩沖液是醋酸-醋酸鈉緩沖系統，并添加含有組氨酸、氯化鈉、聚山梨酯80構成的輔料。
9、更進一步優選地，醋酸-醋酸鈉緩沖系統的ph5-7，更優選為ph5.3-6.5，其濃度為5-15mm，優選為10mm；氯化鈉濃度設定為100-400mm，更優選為320-335mm；聚山梨酯80的濃度為0.005％-0.02％，優選為0.01％。
10、本專利技術還提供所述的疫苗的制備方法，其包括如下步驟：
11、純化的各型hpv?l1蛋白經體外自組裝形成vlp，vlp進一步經過柱層析換液及除菌過濾制備得蛋白原液，使用緩沖液分別稀釋至所需濃度；然后按比例將各型蛋白稀釋液全部混合，即為十五價蛋白稀釋液，經除菌過濾后備用；
12、取處方量氫氧化鋁佐劑進行稀釋混勻(優選地采用磁力攪拌器于300-340rpm混勻不少于30分鐘)，經囊式濾器過濾后備用；
13、取所需量十五價蛋白稀釋液過濾樣品和氫氧化鋁佐劑稀釋液過濾樣品混合至完全混勻即得半成品；
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【技術保護點】
1.人乳頭瘤病毒的疫苗，其特征在于，其包括HPV6、11、16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型的L1抗原中的一種或多種組合而成，例如其中15種，9種，6種和3種組合而成；
2.如權利要求1所述的疫苗，其特征在于，所述各型L1抗原在野生型序列的基礎有如下截短：野生型HPV6?L1的N端截短2個氨基酸，C端截短29個氨基酸、野生型HPV11?L1的N端截短3個氨基酸，C端截短29個氨基酸、野生型HPV16?L1的N端截短4個氨基酸，C端截短29個氨基酸、野生型HPV18?L1的N端截短4個氨基酸，C端截短30個氨基酸、野生型HPV31?L1的N端截短4個氨基酸，C端截短27個氨基酸、野生型HPV33?L1的N端截短4個氨基酸，C端截短24個氨基酸、野生型HPV35?L1的N端截短4個氨基酸，C端截短28個氨基酸、野生型HPV39?L1的N端截短9個氨基酸，C端截短29個氨基酸、野生型HPV45?L1的N端截短4個氨基酸，C端截短30個氨基酸、野生型HPV51?L1的N端截短4個氨基酸，C端截短28個氨基酸、野生型HPV52?L1的
3.如權利要求1所述的疫苗，其特征在于，所述各型L1抗原的氨基酸序列分別如SEQ?IDNO：1至15所示。
4.如權利要求1至3任一項所述的疫苗，其特征在于，采用的佐劑是鋁佐劑，優選為氫氧化鋁佐劑，更優選地，抗原蛋白與鋁佐劑質量比0.5-1:1，優選為0.7-0.85:1。
5.如權利要求1至3任一項所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗采用緩沖液是醋酸-醋酸鈉緩沖系統，并添加含有組氨酸、氯化鈉、聚山梨酯80構成的輔料。
6.如權利要求5所述的疫苗，其特征在于，醋酸-醋酸鈉緩沖系統的pH5-7，更優選為pH5.3-6.5，其濃度為5-15mM，優選為10mM；氯化鈉濃度設定為100-400mM，更優選為320-335mM；聚山梨酯80的濃度為0.005%-0.02%，優選為0.01%。
7.如權利要求1至6任一項所述的疫苗的制備方法，其包括如下步驟：
8.如權利要求7所述的疫苗的制備方法，其特征在于，所述純化的各型HPV?L1蛋白的制備方法如下：
9.如權利要求1至6任一項所述的疫苗的保存方法，其特征在于，其于2-8℃下保存。
10.如權利要求1至6任一項所述的疫苗在制備預防或治療人乳頭瘤病毒導致的疾病的藥物中用途。
...【技術特征摘要】
1.人乳頭瘤病毒的疫苗，其特征在于，其包括hpv6、11、16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型的l1抗原中的一種或多種組合而成，例如其中15種，9種，6種和3種組合而成；
2.如權利要求1所述的疫苗，其特征在于，所述各型l1抗原在野生型序列的基礎有如下截短：野生型hpv6?l1的n端截短2個氨基酸，c端截短29個氨基酸、野生型hpv11?l1的n端截短3個氨基酸，c端截短29個氨基酸、野生型hpv16?l1的n端截短4個氨基酸，c端截短29個氨基酸、野生型hpv18?l1的n端截短4個氨基酸，c端截短30個氨基酸、野生型hpv31?l1的n端截短4個氨基酸，c端截短27個氨基酸、野生型hpv33?l1的n端截短4個氨基酸，c端截短24個氨基酸、野生型hpv35?l1的n端截短4個氨基酸，c端截短28個氨基酸、野生型hpv39?l1的n端截短9個氨基酸，c端截短29個氨基酸、野生型hpv45?l1的n端截短4個氨基酸，c端截短30個氨基酸、野生型hpv51?l1的n端截短4個氨基酸，c端截短28個氨基酸、野生型hpv52?l1的n端截短4個氨基酸，c端截短23個氨基酸、野生型hpv56?l1的n端截短4個氨基酸，c端截短25個氨基酸、野生型hpv58?l1的n端截短4個氨基酸，c端截短23個氨基酸、野生型hpv59?l1的n端截短4個氨基酸...
【專利技術屬性】
技術研發人員：銀飛，伍樹明，劉玉瑩，張海江，姜緒林，沈邇萃，仉春艷，王艷，李玲，陳曉，高文雙，陳丹，楊秀芬，張瑞霞，劉永江，
申請(專利權)人：北京康樂衛士生物技術股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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