【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物檢測，尤其涉及一種非結核分枝桿菌與結核分枝桿菌復合群多重耐藥突變位點檢測試劑盒的制備及應用。
技術介紹
1、結核病是由結核分枝桿菌復合群(mtbc)感染引起的慢性傳染病。結核分支桿菌主要侵犯肺臟，稱為肺結核病；也可侵及肺臟以外的其他部位如肝、腎、腦、淋巴結等器官，稱為肺外結核病。
2、非結核分枝桿菌(ntm)是指除結核分枝桿菌、牛分枝桿菌、非洲分枝桿菌和田鼠分枝桿菌等結核分枝桿菌復合群及麻風桿菌以外的分枝桿菌總稱。ntm肺病患者與肺結核患者均有肺部病變，臨床表現相似，鑒別困難。ntm相對少見，不為臨床醫師熟悉，臨床上常被誤診為肺結核。ntm肺病與肺結核二者治療方案和療程顯著不同，大部分ntm對一線抗結核藥物耐藥，如被誤診將極大地增加患者經濟負擔，加重藥物不良反應，引起耐藥甚至廣泛耐藥。因此，早期鑒別診斷結核分枝桿菌和ntm感染對ntm肺病的及時診斷治療、結核分枝桿菌感染的流行病學調查和減少藥物耐藥發生都有重要意義。
3、結核病中，耐藥結核病具有痰菌陰轉慢，傳染期長，診斷、治療和管理技術復雜，治療費用高，缺乏特效藥以及不良反應多等特點。這使得耐藥結核病疫情的控制，成為全球結核病防治的重中之重。根據耐受抗結核藥物數量及品種的不同，耐藥結核病可分為：單耐藥結核病(mr-tb)、多耐藥結核病(pdr-tb)、耐多藥結核病(mdr-tb)、準廣泛耐藥結核病(pre-xdr-tb)、廣泛耐藥結核病(xdr-tb)、利福平耐藥結核病(rr-tb)。因此，對于耐藥及耐多藥結核病的防治，成為臨床研究熱點。
4、目前臨床上采用的耐藥檢測方法可分為表型檢測和基因型檢測兩類，并以前者為主。然而表型檢測因為各種原因，如耗時、設備昂貴、干擾因素多等，難以形成快速高效的篩查手段。相對而言，基因檢測更為直接，目前已經使用的基因分析方法有dna陣列(芯片)檢測、dna測序法、線性探針雜交法(wux.detection?ofstreptomycin?resistance?inmycobacterium?tuberculosis?clinicaisolates?using?four?molecular?methods?inchina[j].yi?chuan?xue?bao,2006.33(7):655-663)這些方法雖然檢出率和通量高低不同，但共同缺點是需要進行pcr后處理，不僅影響了檢測效率，易引起擴增產物污染，操作難度高,提高了對實驗室的要求。實時pcr技術將擴增和檢測兩步驟合一，具有快速、特異、靈敏等優點，已在病原微生物檢測和突變檢測領域得到廣泛應用，近年來在結核菌耐藥檢測上的應用也引起人們極大興趣。但是，在mtbc和ntm混合感染時，由于ntm具有與mtbc耐藥決定區高度相似的序列，會對檢測結果造成干擾。xpert?mtb/rif是一種快速檢測結核分枝桿菌和耐藥基因的分子診斷方法，雖能夠排除ntm干擾，但也只能檢測利福平耐藥情況，沒有其它一二線用藥的藥敏情況。目前現有結核耐藥基因檢測專利如一種結核分枝桿菌利福平耐藥突變檢測方法及試劑盒(cn?102229988a)、一種結核分枝桿菌異煙肼耐藥突變檢測方法及試劑盒(cn?102229987a)、一種結核分枝桿菌氟喹諾酮耐藥突變檢測方法及試劑盒(cn102229990a)都是單獨檢測一種藥物，且檢測樣本需要經過分離培養，檢測周期長達1個月。目前市面上還沒有無需培養，集合結核分枝桿菌復合群檢測、非結核分枝桿菌檢測、多種一線抗結核藥物聯合耐藥檢測的試劑盒。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種非結核分枝桿菌與結核分枝桿菌復合群多重耐藥突變位點檢測試劑盒的制備及應用，解決結核分枝桿菌復合群、非結核分枝桿菌檢測、結核分枝桿菌耐藥檢測需要分步檢測，耐藥檢測試劑盒無法排除ntm干擾，大多需要分離培養，檢測周期過長，或者只能檢測單個耐藥藥物，不能及時全面識別結核分枝桿菌的耐藥性的技術問題。
2、為了實現上述專利技術目的，本專利技術提供以下技術方案：
3、本專利技術提供了一種非結核分枝桿菌與結核分枝桿菌復合群多重耐藥突變位點檢測試劑盒，所述試劑盒包括：管a、管b和管c，
4、其中管a：包括is6110的正向引物is6110-f，is6110的反向引物is6110-r，is6110的探針is6110-probe，ntm的正向引物ntm-f，ntm的反向引物ntm-r，ntm的探針ntm-probe，rpob1的正向引物rpob-f，rpob1的反向引物rpob-r，rpob1的探針rpob1-probe1和rpob1-probe2；
5、所述is6110-f的核苷酸序列如seq?id?no.1所示；
6、所述is6110-r的核苷酸序列如seq?id?no.2所示；
7、所述is6110-probe的核苷酸序列如seq?id?no.3所示；
8、所述ntm-f的核苷酸序列如seq?id?no.4所示；
9、所述ntm-r的核苷酸序列如seq?id?no.5所示；
10、所述ntm-probe的核苷酸序列如seq?id?no.6所示；
11、所述rpob-f的核苷酸序列如seq?id?no.7所示；
12、所述rpob-r的核苷酸序列如seq?id?no.8所示；
13、所述rpob1-probe1的核苷酸序列如seq?id?no.9所示；
14、所述rpob1-probe2的核苷酸序列如seq?id?no.10所示；
15、管b：包括pre-inha的正向引物pre-inha-f，pre-inha的反向引物pre-inha-r，pre-inha的探針pre-inha-probe，inha的正向引物inha-f，inha的反向引物inha-r，inha的探針inha-probe，rpob2的正向引物rpob-f，rpob2的反向引物rpob-r，rpob2的探針rpob2-probe1和rpob2-probe2；
16、所述pre-inha-f的核苷酸序列如seq?id?no.11所示；
17、所述pre-inha-r的核苷酸序列如seq?id?no.12所示；
18、所述pre-inha-probe的核苷酸序列如seq?id?no.13所示；
19、所述inha-f的核苷酸序列如seq?id?no.14所示；
20、所述inha-r的核苷酸序列如seq?id?no.15所示；
21、所述inha-probe的核苷酸序列如seq?id?no.16所示；
22、所述rpob-f的核苷酸序列如seq?id?no.7所示；
23、所述rpob-r的核苷酸序列如seq?id?n本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種非結核分枝桿菌與結核分枝桿菌復合群多重耐藥突變位點檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：管A、管B和管C，
2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括DNTP、pH＝8～9的Tris-HCl、MgCl2、KCl、硫酸銨、TMAC、DNA聚合酶、核酸酶抑制劑、UDG酶。
3.權利要求1或2所述試劑盒在制備結核分枝桿菌復合群檢測、非結核分枝桿菌檢測和結核分枝桿菌耐藥突變檢測的產品中的應用。
【技術特征摘要】
1.一種非結核分枝桿菌與結核分枝桿菌復合群多重耐藥突變位點檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：管a、管b和管c，
2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括dntp、ph＝8～9的tri...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張忠法，鄧云峰，李強，
申請(專利權)人：山東省公共衛生臨床中心，
類型：發明
國別省市：
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