【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于醫(yī)藥檢測，具體涉及一種同時檢測末梢血中4種脂溶性維生素的方法。
技術(shù)介紹
1、脂溶性維生素檢測的傳統(tǒng)方法有免疫法、分光光度法、熒光法和高效液相色譜法(hplc)等。其中，25-羥基維生素d主要使用免疫法進(jìn)行檢測，但25-羥基維生素d容易受到溫度、基質(zhì)和抗體等其他因素的影響，而且特異性抗體容易產(chǎn)生交叉反應(yīng)，最終導(dǎo)致檢測cv和精密度都較差，而且無法區(qū)分25(oh)d2和25(oh)d3。
2、另外，脂溶性維生素中的維生素a和維生素e，檢測的主要方法包括分光光度法、熒光法和高效液相色譜法(hplc)等。分光光度法由于成本低、設(shè)備簡單，其只能測定總含量，不能定量各同分異構(gòu)體及其同系物，選擇性差；熒光法可以根據(jù)熒光強(qiáng)度進(jìn)行定量，特異性強(qiáng)、干擾少、但測定維生素e時會有所偏差；hplc雖然具有快速、高效的特點(diǎn)，但靈敏度相對液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(lc-ms/ms)低，在檢測低濃度維生素a、e時性能受限。當(dāng)檢測樣本的類型為末梢血時，采血量相較靜脈血更少，僅50-100ul左右，上述方法學(xué)的檢測方法的靈敏度、特異度都會受到更大的影響。
3、公開于該
技術(shù)介紹
部分的信息僅僅旨在增加對本專利技術(shù)的總體背景的理解，而不應(yīng)當(dāng)被視為承認(rèn)或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已為本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的在于提供一種同時檢測末梢血中4種脂溶性維生素的方法，其能夠解決的問題。
2、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)一具體實(shí)施例提供的技術(shù)方案如
3、一種同時檢測末梢血中4種脂溶性維生素的方法，包括以下步驟：
4、s1、確定待檢測藥物，所述待檢測藥物包括維生素a、25-羥基維生素d2、25-羥基維生素d3、維生素e；
5、s2、制備校準(zhǔn)品及質(zhì)控品，并配制工作曲線濃度表；
6、s3、對s2中的校準(zhǔn)品及質(zhì)控品進(jìn)行前處理；
7、s4、將s3中前處理后的液體進(jìn)行液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測；
8、s5、對檢測的結(jié)果進(jìn)行性能驗證。
9、在本專利技術(shù)的一個或多個實(shí)施例中，所述s2具體包括以下步驟：
10、s201、按1:19的比例將校準(zhǔn)品及質(zhì)控品中間液和空白基質(zhì)混合；
11、s202、以2000rpm/min渦旋震蕩5min，獲得標(biāo)準(zhǔn)品s1-s6，并繪制標(biāo)準(zhǔn)品s1-s6中各藥物濃度，獲得工作曲線濃度表。
12、在本專利技術(shù)的一個或多個實(shí)施例中，所述s201中的校準(zhǔn)品為50μl，空白基質(zhì)為950μl。
13、在本專利技術(shù)的一個或多個實(shí)施例中，所述s3具體包括以下步驟：
14、s301、將待測樣本、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和內(nèi)標(biāo)取出放至室溫并渦旋混勻；
15、s302、分別取待測樣本、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和空白樣各50μl于ep管中，加入內(nèi)標(biāo)25μl；再加入乙腈125μl，先以2000rpm的轉(zhuǎn)速振蕩混勻5min，再以14000rpm的轉(zhuǎn)速，在4℃的溫度下離心5min，得到混合液；
16、s303、取混合液中的上清液100μl于96孔板中，蓋上蓋墊，放入多管架自動平衡離心機(jī)中，以4000rpm的轉(zhuǎn)速離心5min。
17、在本專利技術(shù)的一個或多個實(shí)施例中，所述s4中環(huán)境溫度為18℃-25℃，環(huán)境濕度為不大于80％。
18、在本專利技術(shù)的一個或多個實(shí)施例中，所述s4包括流動相液制取步驟：
19、s401、流動相a：取500ml超純水至試劑瓶中，再加入500μl甲酸，混勻、過濾后恒溫超聲5min；
20、s402、流動相b：取500ml乙腈至試劑瓶中，再加入500μl甲酸，混勻、過濾后恒溫超聲5min。
21、在本專利技術(shù)的一個或多個實(shí)施例中，所述s4中的檢測設(shè)備包括液相色譜儀和串聯(lián)質(zhì)譜儀，所述液相色譜儀的設(shè)置參數(shù)為色譜柱：kinetex?f5100a，2.6μm，流速：0.6ml/min，進(jìn)樣體積：25μl，柱溫：40℃。
22、在本專利技術(shù)的一個或多個實(shí)施例中，所述s5中的性能驗證包括標(biāo)準(zhǔn)曲線線性驗證，回收實(shí)驗驗證，精密度驗證，定量下限、重復(fù)進(jìn)樣穩(wěn)定性驗證和殘留驗證。
23、在本專利技術(shù)的一個或多個實(shí)施例中，所述回收實(shí)驗驗證的操作方法包括以下步驟：
24、s501、選擇合適濃度的常規(guī)檢測樣本，并分為體積相同的3份；
25、s502、在其中2份樣本中加入不同量的待測物標(biāo)準(zhǔn)，制成2個不同加入濃度的回收樣本，計算加入的待測物的濃度；
26、s503、在剩余一份樣本中加入同樣量的無被測物的溶劑，制成基礎(chǔ)樣本；
27、s504、對回收樣本和基礎(chǔ)樣本進(jìn)行測定，即對樣本進(jìn)行3次重復(fù)分析，取其均值進(jìn)行計算。
28、在本專利技術(shù)的一個或多個實(shí)施例中，所述s504中包括以下計算公式：
29、計算回收率：回收率一＝(回收樣本濃度一-基礎(chǔ)樣本濃度)/加入濃度×100％；
30、計算平均回收率：平均回收率＝(回收率一+回收率二)/2×100％。
31、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)：
32、1、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法采用高效液相色譜分離和質(zhì)譜分析的結(jié)合方式，可以克服血液樣本中的復(fù)雜背景干擾，提高信噪比，對于體內(nèi)含量較小的脂溶性維生素種類，包括25(oh)d2、維生素e等可達(dá)到高靈敏度檢出；
33、2、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法可以進(jìn)一次樣品，檢測多種物質(zhì)，使用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法可以對4種脂溶性維生素進(jìn)行同時檢測，一次采集樣本提高檢測效率，更具有臨床意義；
34、3、樣本來源使用末梢血，可以減少采樣量，有利于緩解采血過程中采血對象，特別是低齡幼兒的痛苦，進(jìn)而可以提高檢測依從性；同時對液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法前處理進(jìn)行優(yōu)化，簡化樣本處理過程，數(shù)個步驟處理后即可上機(jī)檢測，減少樣本等待時間，及時快速出具檢測報告。
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1.一種同時檢測末梢血中4種脂溶性維生素的方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時檢測末梢血中4種脂溶性維生素的方法，其特征在于，所述S2具體包括以下步驟：
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種同時檢測末梢血中4種脂溶性維生素的方法，其特征在于，所述S201中的校準(zhǔn)品為50μL，空白基質(zhì)為950μL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時檢測末梢血中4種脂溶性維生素的方法，其特征在于，所述S3具體包括以下步驟：
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時檢測末梢血中4種脂溶性維生素的方法，其特征在于，所述S4中環(huán)境溫度為18℃-25℃，環(huán)境濕度為不大于80％。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種同時檢測末梢血中4種脂溶性維生素的方法，其特征在于，所述S4包括流動相液制取步驟：
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種同時檢測末梢血中4種脂溶性維生素的方法，其特征在于，所述S4中的檢測設(shè)備包括液相色譜儀和串聯(lián)質(zhì)譜儀，所述液相色譜儀的設(shè)置參數(shù)為色譜柱：Kinetex?F5100A，2.6μm，流速：0.6mL/min，進(jìn)樣體積
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時檢測末梢血中4種脂溶性維生素的方法，其特征在于，所述S5中的性能驗證包括標(biāo)準(zhǔn)曲線線性驗證，回收實(shí)驗驗證，精密度驗證，定量下限、重復(fù)進(jìn)樣穩(wěn)定性驗證和殘留驗證。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種同時檢測末梢血中4種脂溶性維生素的方法，其特征在于，所述回收實(shí)驗驗證的操作方法包括以下步驟：
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種同時檢測末梢血中4種脂溶性維生素的方法，其特征在于，所述S504中包括以下計算公式：
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種同時檢測末梢血中4種脂溶性維生素的方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時檢測末梢血中4種脂溶性維生素的方法，其特征在于，所述s2具體包括以下步驟：
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種同時檢測末梢血中4種脂溶性維生素的方法，其特征在于，所述s201中的校準(zhǔn)品為50μl，空白基質(zhì)為950μl。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時檢測末梢血中4種脂溶性維生素的方法，其特征在于，所述s3具體包括以下步驟：
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時檢測末梢血中4種脂溶性維生素的方法，其特征在于，所述s4中環(huán)境溫度為18℃-25℃，環(huán)境濕度為不大于80％。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種同時檢測末梢血中4種脂溶性維生素的方法，其特征在于，所述s4包括流動相液制取步驟：...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：楊毅，徐高軍，孔彬，
申請(專利權(quán))人：江蘇瑞質(zhì)生物科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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