【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物免疫治療，具體涉及抗cd70納米抗體及其用途。
技術介紹
1、cd70屬于腫瘤壞死因子(tnf)超家族成員，正常組織中cd70是一種ii型跨膜糖蛋白，僅僅短暫地表達在活化的t細胞、b細胞及成熟的樹突狀細胞中，cd27是其受體。在病理狀態下，研究發現cd70高表達于多種腫瘤細胞中。目前以cd70為靶點的免疫治療藥物已經在臨床前期研究中應用。
2、研究表明cd70在多種惡性腫瘤中表達均異常升高，包括腎細胞癌、急性骨髓性白血病、非霍奇金淋巴瘤、多發性骨髓瘤、套細胞淋巴瘤、彌漫性大細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、胰腺癌、乳腺癌、膠質母細胞瘤及其它腫瘤等，是一個有前景的腫瘤免疫治療靶標。
3、嵌合抗原受體t細胞(chimeric?antigen?receptor-t?cell，car-t)是一種針對腫瘤細胞表面特異性抗原的新型免疫治療方法。現在，許多研究人員正在開發治療實體瘤的car-t細胞。
4、抗體作為car中重要的組成部分，其對于car-t發揮特異性高效殺傷作用、降低毒性具有決定性影響。因此能夠以高特異性結合目標抗原、同時具有低免疫原性的抗體是開發car-t產品的重點。羊駝體內能夠產生特異性、親和力高的vhh抗體，同時由于vhh抗體本身的特性使其能夠識別傳統scfv抗體不能識別的抗原表位，另外羊駝vhh基因與人vh基因具有較高的同源性，所以免疫原性比較低也利于人源化改造。本領域尚無含抗cd70納米抗體的car-t細胞報道。
技術實現思路
2、在一個或多個實施方案中，所述抗cd70納米抗體的重鏈可變區序列如seq?id?no:21-28中任一所示。
3、在一個或多個實施方案中，所述抗cd70納米抗體的fr1可選自seq?id?no:21-28中任一所示的vhh的fr1，fr2可選自seq?id?no:21-28中任一所示的vhh的fr2，fr3可選自seqid?no:21-28中任一所示的vhh的fr3，fr4可選自seq?id?no:21-28中任一所示的vhh的fr4，
4、在一個或多個實施方案中，所述cd70結合分子是包含一條、兩條或多條抗cd70納米抗體或其抗原結合片段的單價或多價納米抗體或單域抗體、或多特異性納米抗體或單域抗體。
5、在一個或多個實施方案中，所述多價結合分子或多特異性結合分子通過連接子連接多個抗cd70納米抗體或其抗原結合片段。所述連接子由選自g和s的1-15個氨基酸組成。
6、在一個或多個實施方案中，所述納米抗體是駱駝重鏈抗體或軟骨魚重鏈抗體。
7、在一個或多個實施方案中，所述納米抗體還包含重鏈恒定區。
8、在一個或多個實施方案中，所述重鏈恒定區是駱駝重鏈抗體的恒定區，包含ch2和ch3。在一個或多個實施方案中，所述ch2和ch3是人igg?fc的ch2和ch3，例如igg1的ch2和ch3。優選地，所述重鏈恒定區如seq?id?no:37所示。
9、在一個或多個實施方案中，所述重鏈恒定區是軟骨魚重鏈抗體的恒定區，包含ch1、ch2、ch3、ch4和ch5。
10、在一個或多個實施方案中，本專利技術任一實施方案所述的cd70結合分子為嵌合抗體或完全人抗體；優選為完全人抗體。
11、本專利技術另一方面提供一種嵌合抗原受體，包含任選的信號肽序列、本文任一實施方案所述的cd70結合分子、鉸鏈區、跨膜區和胞內區。
12、在一個或多個實施方案中，胞內區包括胞內共刺激域和/或胞內信號域。
13、在一個或多個實施方案中，從n端到c端，該嵌合抗原受體依次含有信號肽、本文任一實施方案所述的cd70結合分子、鉸鏈區、跨膜區、胞內共刺激域和胞內信號域。
14、本專利技術還提供核酸分子，其具有選自以下任一項的序列：
15、(1)本文任一實施方案所述cd70結合分子或嵌合抗原受體的編碼序列；
16、(2)(1)的互補序列；
17、(3)(1)或(2)中任一序列的5-50bp的片段。
18、在一個或多個實施方案中，所述片段是引物。
19、本專利技術還提供一種核酸構建物，包含本文所述的核酸分子。
20、在一個或多個實施方案中，所述核酸構建物是克隆載體、表達載體或整合載體。
21、本專利技術還提供一種宿主細胞，選自：
22、(1)表達和/或分泌本文任一實施方案所述cd70結合分子或嵌合抗原受體；
23、(2)包含本文所述的核酸分子；和/或
24、(3)包含本文所述的核酸構建物。
25、在一個或多個實施方案中，所述宿主細胞是免疫效應細胞，優選t細胞。
26、本專利技術還提供一種產生本文任一實施方案cd70結合分子的方法，包括：在適合產生cd70結合分子(例如納米抗體或其抗原結合片段，單價或多價納米抗體或單域抗體、或多特異性納米抗體或單域抗體)的條件下培養本文所述的宿主細胞，和任選的從培養物中純化所述cd70結合分子。
27、本專利技術還提供一種藥物組合物，包含本文任一實施方案所述cd70結合分子、核酸分子、核酸構建物或宿主細胞，和藥學上可接受的輔料。
28、在一個或多個實施方案中，所述藥物組合物用于治療cd70表達相關的疾病或病況。
29、本專利技術還提供本文任一實施方案所述cd70結合分子、嵌合抗原受體、核酸分子、核酸構建物或宿主細胞在制備活化的免疫細胞(例如t細胞)中的用途。
30、本專利技術還提供本文任一實施方案所述cd70結合分子、嵌合抗原受體、核酸分子、核酸構建物或宿主細胞在制備用于預防或治療cd70表達相關的疾病或病況的藥物中的用途。
31、在一個或多個實施方案中，所述疾病或病況選自以下的一種或多種：腎細胞癌、急性骨髓性白血病、非霍奇金淋巴瘤、多發性骨髓瘤、套細胞淋巴瘤、彌漫性大細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、胰腺癌、乳腺癌、膠質母細胞瘤。
32、本專利技術還提供一種治療或預防cd70表達相關的疾病或病況的方法，所述方法包括給予需要的患者治療有效量的本專利技術任一實施方案所述的cd70結合分子或宿主細胞，或本專利技術任一實施方案所述的藥物組合物。
33、本專利技術還提供一種檢測cd70的試劑盒，用于例如評估藥物治療效果或診斷癌癥，所述的試劑盒包含本文任一實施方案所述cd70結合分子、核酸分子、核酸構建物或宿主細胞。
34、在一個或多個實施方案中，所述試劑盒還包括用于檢測cd70與所述cd70結合分子的結合的試本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種CD70結合分子，包含抗CD70納米抗體或其抗原結合片段，所述抗CD70納米抗體的互補決定區CDR包含CDR1、CDR2和CDR3，其中CDR1包括SEQ?ID?NO:6所示的序列、CDR2包括SEQ?ID?NO:11和12中任一所示的序列、和CDR3包括SEQ?ID?NO:18和19中任一所示的序列，
2.一種嵌合抗原受體，包含任選的信號肽序列、權利要求1所述的CD70結合分子、鉸鏈區、跨膜區和胞內區，
3.一種核酸分子，其具有選自以下任一項的序列：
4.一種核酸構建物，包含權利要求3所述的核酸分子，
5.一種宿主細胞，選自：
6.一種產生權利要求1所述的CD70結合分子或權利要求2所述的嵌合抗原受體的方法，包括：在適合產生CD70結合分子的條件下培養權利要求5所述的宿主細胞，和任選的從培養物中純化所述CD70結合分子或嵌合抗原受體。
7.一種藥物組合物，包含權利要求1所述CD70結合分子、權利要求2所述的嵌合抗原受體、權利要求3所述的核酸分子、權利要求4所述的核酸構建物或權利要求5所述的宿主細胞，
8.權利要求1所述CD70結合分子、權利要求2所述的嵌合抗原受體、權利要求3所述的核酸分子、權利要求4所述的核酸構建物或權利要求5所述的宿主細胞在制備活化的免疫細胞中的用途，或在制備用于預防或治療CD70表達相關的疾病或病況的藥物中的用途，
9.一種檢測CD70的試劑盒，所述的試劑盒包含權利要求1所述CD70結合分子、權利要求3所述的核酸分子、權利要求4所述的核酸構建物或權利要求5所述的宿主細胞，
10.權利要求1所述CD70結合分子在制備用于檢測樣品中CD70、評估藥物治療效果或診斷癌癥的試劑盒中的用途。
...【技術特征摘要】
1.一種cd70結合分子，包含抗cd70納米抗體或其抗原結合片段，所述抗cd70納米抗體的互補決定區cdr包含cdr1、cdr2和cdr3，其中cdr1包括seq?id?no:6所示的序列、cdr2包括seq?id?no:11和12中任一所示的序列、和cdr3包括seq?id?no:18和19中任一所示的序列，
2.一種嵌合抗原受體，包含任選的信號肽序列、權利要求1所述的cd70結合分子、鉸鏈區、跨膜區和胞內區，
3.一種核酸分子，其具有選自以下任一項的序列：
4.一種核酸構建物，包含權利要求3所述的核酸分子，
5.一種宿主細胞，選自：
6.一種產生權利要求1所述的cd70結合分子或權利要求2所述的嵌合抗原受體的方法，包括：在適合產生cd70結合分子的條件下培養權利要求5所述的宿主細胞，和任選的從培養物中純化所述c...
【專利技術屬性】
技術研發人員：黃慧，彭濤，胡紅明，劉翔，陳燕，
申請(專利權)人：上海恒潤達生生物科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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