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    一種小茴紫朵麗蝶的組織培養快速繁殖方法技術
    
                            
    技術編號：41711366 閱讀：17 留言：0更新日期：2024-06-19 12:40
    
                        
    
                        
    
                            
                            本發明專利技術提供了一種小茴紫朵麗蝶的組織培養快速繁殖方法，包括外植體的制備與消毒→啟動培養→不定芽誘導培養→不定芽的增殖培養→生根培養→組培苗移栽。本發明專利技術首次采用組織培養的方法對小茴紫朵麗蝶進行繁殖，該方法繁殖更快，可達到規模化生產的要求，保證了種苗的品質和質量，為小茴紫朵麗蝶繁殖提供了新的有效途徑。本發明專利技術在誘導培養步驟中通過誘導原球體，用原球體進行增殖長出多芽體，增殖系數2.0?3.0，與一般分株繁殖方法相比，大大提高了繁體系數。本發明專利技術在不定芽誘導培養、不定芽的增殖培養步驟中，培養環境為溫度25?28℃，光照時長8?11小時，光照強度2000?3000lux。
    
                            
                            
    


    
                            

                            
    【技術實現步驟摘要】
    
                                
    本專利技術屬于植物繁殖，具體涉及一種小茴紫朵麗蝶的組織培養快速繁殖方法。

    技術介紹
    1、小茴紫朵麗蝶（學名：phal.tzu?chiang?sapphire?）品名：紫式部，小茴紫朵麗蝶花期在4-7月左右開花，小茴紫由phal.pulcherrima與phal.tzu?chiang?lilac所雜交育出的品種。朵麗蝶原屬于是野生蝴蝶蘭品種，是為蘭科蝴蝶蘭屬，原產于亞熱帶雨林地區，為附生性蘭花。互生長椰圓形葉片翠綠挺直，葉長15-20cm、葉寬3-4cm。花梗長30～40cm，花梗有分枝。每株花梗開花超過20朵以上。淡紫色花，花瓣邊緣顏色較淡，深紫色箭型唇瓣，花徑2.5cm。開花期初夏盛開，續花。在蘭科植物中是一種最普及、最廣泛的栽培種類，具有很高的商業價值所。其主要原因在于，朵麗蝶生長周期長，是單莖性氣生蘭，因此很難常規進行分株繁殖，很難快速繁殖大量成品。因此朵麗蝶利用組織培養技術，可以快速大量地繁殖出朵麗蝶種苗，解決市場的需求。

    技術實現思路
    1、本專利技術的目的是提供一種小茴紫朵麗蝶的組織培養快速繁殖方法，可以達到快速繁殖朵麗蝶種苗，并降低制種的污染率，提高成苗率，從而推動朵麗蝶商業性發展。
    2、為了實現上述目的，本專利技術提供了以下技術方案：
    3、一種小茴紫朵麗蝶的組織培養快速繁殖方法，包括以下步驟：
    4、（1）外植體的制備與消毒：挑選生長健壯、無病蟲害長勢良好的3.5寸小茴紫朵麗蝶苗，待抽花梗并生長至10-15cm時取做外植體，用75%酒精擦拭花梗，將花梗切成2-3cm帶節芽的節段，把節芽苞片切除備用；1wt%的雙氧水中加2滴吐溫，置于搖床上振蕩2個小時后，用無菌水洗滌2次，用75%酒精漂洗1分鐘，無菌水漂洗2次，將芽段按大中小（或大小及木質化程度）分組進行消毒；用0.1-0.2wt%二氧化氯水溶液在搖床上進行消毒滅菌，大、中、小芽段的二氧化氯水溶液消毒時間分別為18-25min、12-17min、10-12?min，節段消毒滅菌結束后用無菌水漂洗2-3遍待轉入培養基；
    5、（2）啟動培養：取步驟1中消毒好的節段，切去兩端0.5cm，將節芽朝上插入啟動培養基中進行培養，培養環境溫度26-30℃，光照時長8-11小時，光照強度2000-3000lux；培養60-80天，節芽生長成有2-3片葉片的小苗后轉接到增殖培養基；
    6、（3）誘導培養：從步驟2中培養的花梗上切離小苗，將小苗的莖段橫切成0.5cm的片段，平放在誘導培養基上，培養環境溫度25-28℃，光照時長8-11小時，光照強度2000-3000lux，?培養50-60天，在莖段切片上可長出原球體；
    7、（4）增殖培養：從步驟3中的組織片段上切離原球體，接種到增殖培養基上進行增殖擴繁，培養環境溫度25-28℃，光照時長8-11小時，光照強度2000-3000lux，?培養50-60天，可獲得多量的原球體或從原球體上獲得多量的不定芽；
    8、（5）壯苗生根培養：從步驟4獲得的不定芽組織上切離小苗，接種到壯苗生根培養基上，培養環境溫度26-30℃，光照時長10-12小時，光照強度3000-4000lux，?培養50-60天，小苗生長到3-4片葉，再次接種到壯苗生根培養基，培養環境溫度26-30℃，光照時長10-12小時，光照強度3000-4000lux，?培養50-60天，小苗生長到4-5片葉，長出?2-3cm的根后可出瓶定植；
    9、（6）組培苗移栽：將步驟4中的小苗從培養瓶中取出，用干凈的水將培養基洗掉，轉移至水簾大棚，用5.5cm透明軟杯種植，用40cm*60cm*45孔穴盆固定擺放；栽培后將小苗葉片按穴盆對角線平行擺放；定植7天后淋一次4000倍克土菌，種植環境濕度80-95%，溫度26-30℃，種植的基質為水草；等長出根系后，開始淋肥水。
    10、進一步地，啟動培養基的組分為：nh4no3?550mg/l、kno3?633.3mg/l、mgso4·7h2o123.3mg/l、kh2po4?56.6mg/l、cacl2·2h2o?146.6mg/l、ki?0.83mg/l、h3bo3?6.2mg/l、mnso4·4h2o?22.3mg/l、znso4·7h2o?8.6mg/l、na2moo2·2h2o?0.25mg/l、cuso4·5h2o0.025mg/l、?cocl2·6h2o?0.025mg/l、feso4·7h2o?27.8mg/l、na2·edta?37.3mg/l、鹽酸硫胺素0.1mg/l、煙酸0.5mg/l、鹽酸吡哆醇0.5mg/l、甘氨酸2mg/l、肌醇100mg/l、椰子水200ml/l、白糖15-20g/l、瓊脂6.2g/l、6-芐氨基嘌呤3.0-5.0mg/l和萘乙酸0?.2-0?.5mg/l，培養基滅菌前ph調節至5.1。
    11、進一步地，誘導培養基的組分為：nh4no3?550mg/l、kno3?633.3mg/l、mgso4·7h2o123.3mg/l、kh2po4?56.6mg/l、cacl2·2h2o?146.6mg/l、ki?0.83mg/l、h3bo3?6.2mg/l、mnso4·4h2o?22.3mg/l、znso4·7h2o?8.6mg/l、na2moo2·2h2o?0.25mg/l、cuso4·5h2o0.025mg/l、?cocl2·6h2o?0.025mg/l、feso4·7h2o?27.8mg/l、na2·edta?37.3mg/l、鹽酸硫胺素0.1mg/l、煙酸0.5mg/l、鹽酸吡哆醇0.5mg/l、甘氨酸2mg/l、肌醇100mg/l、椰子水200ml/l、白糖15-20g/l、瓊脂6.2g/l、6-氨基嘌呤5.0-15.0mg/l、6-芐氨基嘌呤5.0-15.0mg/l和萘乙酸0.5-1.5mg/l，培養基滅菌前ph調節至5.1。
    12、進一步地，增殖培養基的組分為：nh4no3?550mg/l、kno3?633.3mg/l、mgso4·7h2o123.3mg/l、kh2po4?56.6mg/l、cacl2·2h2o?146.6mg/l、ki?0.83mg/l、h3bo3?6.2mg/l、mnso4·4h2o?22.3mg/l、znso4·7h2o?8.6mg/l、na2moo2·2h2o?0.25mg/l、cuso4·5h2o0.025mg/l、?cocl2·6h2o?0.025mg/l、feso4·7h2o?27.8mg/l、na2·edta?37.3mg/l、鹽酸硫胺素0.1mg/l、煙酸0.5mg/l、鹽酸吡哆醇0.5mg/l、甘氨酸2mg/l、肌醇100mg/l、椰子水200ml/l、白糖15-20g/l、瓊脂6?.2g/l、6-氨基嘌呤5.0-15.0mg/l、6-芐氨基嘌呤5.0-15.0mg/l和萘乙酸0.5-1.5mg/l，培養基滅菌前ph調節至5.1。
    13、進一步地，生根培養基的組分為：花寶1號?1.0-2.0g/l、硝酸鈣100mg/l、甘氨酸本文檔來自技高網...
                            
    
                            
    【技術保護點】
    
                                
    1.一種小茴紫朵麗蝶的組織培養快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步驟：
    2.根據權利要求1所述的小茴紫朵麗蝶的組織培養快速繁殖方法，其特征在于，啟動培養基的組分為：NH4NO3?550mg/L、KNO3?633.3mg/L、MgSO4·7H2O?123.3mg/L、KH2PO4?56.6mg/L、CaCl2·2H2O?146.6mg/L、KI?0.83mg/L、H3BO3?6.2mg/L、MnSO4·4H2O?22.3mg/L、ZnSO4·7H2O?8.6mg/L、Na2MoO2·2H2O?0.25mg/L、CuSO4·5H2O?0.025mg/L、?CoCl2·6H2O?0.025mg/L、FeSO4·7H2O?27.8mg/L、Na2·EDTA?37.3mg/L、鹽酸硫胺素0.1mg/L、煙酸0.5mg/L、鹽酸吡哆醇0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、肌醇100mg/L、椰子水?200ml/L、白糖15-20g/L、瓊脂6.2g/L、6-芐氨基嘌呤3.0-5.0mg/L和萘乙酸0?.2-0?.5mg/L，培養基滅菌前pH調節至5.1。
    3.根據權利要求1所述的小茴紫朵麗蝶的組織培養快速繁殖方法，其特征在于，誘導培養基的組分為：NH4NO3?550mg/L、KNO3?633.3mg/L、MgSO4·7H2O?123.3mg/L、KH2PO4?56.6mg/L、CaCl2·2H2O?146.6mg/L、KI?0.83mg/L、H3BO3?6.2mg/L、MnSO4·4H2O?22.3mg/L、ZnSO4·7H2O?8.6mg/L、Na2MoO2·2H2O?0.25mg/L、CuSO4·5H2O?0.025mg/L、?CoCl2·6H2O?0.025mg/L、FeSO4·7H2O?27.8mg/L、Na2·EDTA?37.3mg/L、鹽酸硫胺素0.1mg/L、煙酸0.5mg/L、鹽酸吡哆醇0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、肌醇100mg/L、椰子水?200ml/L、白糖15-20g/L、瓊脂6.2g/L、6-氨基嘌呤5.0-15.0mg/L、6-芐氨基嘌呤5.0-15.0mg/L和萘乙酸0.5-1.5mg/L，培養基滅菌前pH調節至5.1。
    4.根據權利要求1所述的小茴紫朵麗蝶的組織培養快速繁殖方法，其特征在于，增殖培養基的組分為：NH4NO3?550mg/L、KNO3?633.3mg/L、MgSO4·7H2O?123.3mg/L、KH2PO4?56.6mg/L、CaCl2·2H2O?146.6mg/L、KI?0.83mg/L、H3BO3?6.2mg/L、MnSO4·4H2O?22.3mg/L、ZnSO4·7H2O?8.6mg/L、Na2MoO2·2H2O?0.25mg/L、CuSO4·5H2O?0.025mg/L、?CoCl2·6H2O?0.025mg/L、FeSO4·7H2O?27.8mg/L、Na2·EDTA?37.3mg/L、鹽酸硫胺素0.1mg/L、煙酸0.5mg/L、鹽酸吡哆醇0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、肌醇100mg/L、椰子水?200ml/L、白糖15-20g/L、瓊脂6.2g/L、6-氨基嘌呤5.0-15.0mg/L、6-芐氨基嘌呤5.0-15.0mg/L和萘乙酸0.5-1.5mg/L，培養基滅菌前pH調節至5.1。
    5.根據權利要求1所述的小茴紫朵麗蝶的組織培養快速繁殖方法，其特征在于，生根培養基的組分為：花寶1號?1.0-2.0g/L、硝酸鈣100mg/L、甘氨酸1mg/L、肌醇50mg/L、香蕉泥30-50g/L、土豆泥30-50g/L、白糖20-30g/L、活性炭1g/L、紫羅蘭莖葉勻漿5g/L、無花果提取物9mg/L、瓊脂6.5g/L，培養基滅菌前pH調節至5.1。
    6.根據權利要求5所述的小茴紫朵麗蝶的組織培養快速繁殖方法，其特征在于，所述紫羅蘭莖葉勻漿的制備方法為：
    7.根據權利要求6所述的小茴紫朵麗蝶的組織培養快速繁殖方法，其特征在于，急凍時間為50min。
    8.根據權利要求5所述的小茴紫朵麗蝶的組織培養快速繁殖方法，其特征在于，所述無花果提取物的制備方法，包括以下步驟：
    9.根據權利要求8所述的小茴紫朵麗蝶的組織培養快速繁殖方法，其特征在于，超聲時間為40min。
    10.根據權利要求8所述的小茴紫朵麗蝶的組織培養快速繁殖方法，其特征在于，浸提時間為2h。
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    【技術特征摘要】
    
                                
    1.一種小茴紫朵麗蝶的組織培養快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步驟：
    2.根據權利要求1所述的小茴紫朵麗蝶的組織培養快速繁殖方法，其特征在于，啟動培養基的組分為：nh4no3?550mg/l、kno3?633.3mg/l、mgso4·7h2o?123.3mg/l、kh2po4?56.6mg/l、cacl2·2h2o?146.6mg/l、ki?0.83mg/l、h3bo3?6.2mg/l、mnso4·4h2o?22.3mg/l、znso4·7h2o?8.6mg/l、na2moo2·2h2o?0.25mg/l、cuso4·5h2o?0.025mg/l、?cocl2·6h2o?0.025mg/l、feso4·7h2o?27.8mg/l、na2·edta?37.3mg/l、鹽酸硫胺素0.1mg/l、煙酸0.5mg/l、鹽酸吡哆醇0.5mg/l、甘氨酸2mg/l、肌醇100mg/l、椰子水?200ml/l、白糖15-20g/l、瓊脂6.2g/l、6-芐氨基嘌呤3.0-5.0mg/l和萘乙酸0?.2-0?.5mg/l，培養基滅菌前ph調節至5.1。
    3.根據權利要求1所述的小茴紫朵麗蝶的組織培養快速繁殖方法，其特征在于，誘導培養基的組分為：nh4no3?550mg/l、kno3?633.3mg/l、mgso4·7h2o?123.3mg/l、kh2po4?56.6mg/l、cacl2·2h2o?146.6mg/l、ki?0.83mg/l、h3bo3?6.2mg/l、mnso4·4h2o?22.3mg/l、znso4·7h2o?8.6mg/l、na2moo2·2h2o?0.25mg/l、cuso4·5h2o?0.025mg/l、?cocl2·6h2o?0.025mg/l、feso4·7h2o?27.8mg/l、na2·edta?37.3mg/l、鹽酸硫胺素0.1mg/l、煙酸0.5mg/l、鹽酸吡哆醇0.5mg/l、甘氨酸2mg/l、肌醇100mg/l、椰子水?200ml/l、白糖15-20g/l、瓊脂6.2g/l、6-氨基嘌呤5.0-15.0mg/l、6-芐氨基嘌呤5.0-15.0mg/l和萘乙酸0.5-1.5mg/l，培養基滅菌前ph調節...
                            
    
                            
    【專利技術屬性】
    
                                技術研發人員：丁雪，周慧穎，馬文卿，周譽君，何文杰，李淑英，沈荔荔，
    
        申請(專利權)人：廣州市名卉景觀科技發展有限公司，
    
        類型：發明
    
        國別省市：
    
                            
    
                            
                        
    
                    
    
                    
                    
                     
                
    
                
                
    
                    
    
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